CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲状腺乳头状癌中的表达及其诊断价值*

唐 娟，俸瑞发,伍金凤

(桂林医学院第二附属医院 a.病理科；b. 乳腺甲状腺外科，广西 桂林 541199)

甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是内分泌系统常见恶性肿瘤，也是甲状腺恶性肿瘤中最常见的一种类型，占所有甲状腺恶性肿瘤的80%～90%，发病率逐年升高，该类肿瘤在中青年女性中的发生率较高[1]。大部分甲状腺乳头状癌的生物学行为相对惰性，患者10年生存率超过90%[2]，国内研究揭示，患者术后10年生存率可高达96%[3-4]，早期明确诊断对甲状腺乳头状癌患者有重要意义。甲状腺乳头状癌患者临床通常表现为无症状的颈部肿块或甲状腺结节，与甲状腺良性病变不能区分。近年随着影像技术的发展，虽然超声检查能在一定程度上区分良恶性甲状腺病变，但仍需病理组织学金标准确诊。在病理诊断中，甲状腺良性增生性病变与一些不典型的甲状腺乳头状癌在组织结构及细胞形态方面具有相似性，单纯依据形态学诊断有困难。近年随着分子生物学研究的深入，发现一些有助于鉴别甲状腺良恶性病变的生物分子标志物。本研究探讨生物分子标志物CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲状腺乳头状癌病理诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月至2020年12月本院收治的甲状腺乳头状癌患者202例与甲状腺良性病变患者51例，所有患者临床病理资料完整，均经手术获取了病灶组织，术前均未行放化疗治疗。202例甲状腺乳头状癌患者，男24例，女178例；年龄16～86岁，平均(45.2±12.0)岁。51例甲状腺良性病变患者，男10例，女41例；年龄19～75岁，平均(52.3±13.1)岁。两组年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经过桂林医学院第二附属医院医学伦理委员会批准；患者知情并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 患者均经手术切除病灶，标本用10%中性福尔马林固定24 h后，取病灶组织块，采用全自动组织脱水机进行常规脱水、透明、浸蜡，石蜡包埋备用。

1.2.2 免疫组化 均采用EnVision两步法染色，CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO一抗均购自福州迈新生物技术开发有限公司。石蜡标本连续切片约4 μm厚，60 ℃烤片1 h以防脱片，切片置入二甲苯脱蜡15 min，重复2次，再依次置入无水酒精、95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精各10 min，清水冲洗5 min，利用柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复3 min，3%过氧化氢液浸泡封闭10 min，滴加一抗37 ℃ 孵育60 min，采用PBS缓冲液冲洗3次，5 min/次，滴加二抗37 ℃孵育30 min，PBS缓冲液冲洗3次，5 min/次，DAB显色，苏木素复染，封片。

1.2.3 结果判读 由两位高年资病理诊断医师利用光学显微镜独立阅片，观察切片内病变细胞着色情况，进行免疫组化结果评估。CK19、TPO阳性染色位于细胞质，HBME-1阳性染色位于细胞质/膜，Galectin-3阳性染色位于细胞核/质/膜，阳性细胞>10%为阳性，阳性细胞≤10%为阴性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 26.0统计学软件分析数据，计数资料以n，%表示，采用χ2检验；应用ROC曲线分析CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO对甲状腺乳头状癌的诊断效能。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO的表达模式

CK19、HBME-1和Galectin-3在甲状腺乳头状癌中呈阳性表达，且CK19表现为细胞质着色，HBME-1表现为细胞膜及细胞质着色，Galectin-3表现为细胞膜、质、核均着色，三者在甲状腺良性病变中多为阴性；TPO的表达情况则相反，在甲状腺良性病变中呈阳性，表现为细胞质着色，而在甲状腺乳头状癌中出现失表达。详见图1。

图1 免疫组织化学检测CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO的表达(200×)

2.2 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO的表达情况

CK19、HBME-1和Galectin-3在甲状腺乳头状癌中的表达阳性率分别为99.01%、92.57%、98.02%，高于在甲状腺良性病变中的表达54.90%、21.57%、31.37%，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)；TPO在甲状腺乳头状癌中的表达阳性率为8.42%低于甲状腺良性病变中的表达90.20%，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

表1 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲状腺乳头状癌及甲状腺良性病变组织中的表达(n，%)

2.3 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO表达与甲状腺乳头状癌转移的相关性分析

CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲状腺乳头状癌淋巴结转移与无转移患者中的表达差异无统计学意义(P>0.05)，他们的表达与甲状腺乳头状癌淋巴结转移无相关性。详见表2。

表2 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO表达与甲状腺乳头状癌转移的相关性分析(n，%)

2.4 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO表达与甲状腺乳头状癌被膜侵犯的相关性分析

CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲状腺乳头状癌被膜侵犯与无侵犯患者中的表达差异无统计学意义(P>0.05)，他们的表达与甲状腺乳头状癌被膜侵犯无相关性。详见表3。

表3 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO表达与甲状腺乳头状癌被膜侵犯的相关性分析(n，%)

2.5 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO对甲状腺乳头状癌的诊断价值分析

ROC曲线分析表明，CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO联合检测与任意单一检测在甲状腺乳头状癌患者中的诊断灵敏度及特异性均较高。详见表4和图2。

表4 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO对甲状腺乳头状癌的诊断效能

图2 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲状腺乳头状癌中的诊断ROC曲线

3 讨论

甲状腺乳头状癌的诊断主要依据其典型、明确的核特征，如核拉长重叠、核沟、核内假包涵体等，然而，在某些病例中，典型核特征不明确时，准确的诊断变得困难。同时，一些甲状腺良性病变也可出现乳头状结构和核的形态变化，形态学与甲状腺乳头状癌高度相似，这使两者的鉴别极具挑战。因此，运用有效的分子生物学方法辅助诊断是十分必要的。

CK19是一种低分子量细胞角蛋白，由KRT19基因编码，在各种上皮组织和肿瘤中表达。研究结果显示，CK19在甲状腺乳头状癌中通常呈现弥漫的强表达，而在甲状腺良性病变中也可有一定程度表达[5]。HBME-1即人骨髓内皮细胞标记物，是间皮细胞表面微绒毛表面特异性标记物，在肿瘤血管的形成、肿瘤的生长及转移中发挥重要作用[6]。近年来，HBME-1在甲状腺乳头状癌的研究逐渐增多，有研究显示，HBME-1在甲状腺乳头状癌中阳性率较高，在良性病变中仅少数表达[7-8]。Galectin-3即半乳糖凝集素-3，是β-半乳糖苷结合蛋白动物凝集素家族成员之一，其编码基因位于1p13。目前研究发现，Galectin-3在多种癌组织中的表达显著高于正常组织，如甲状腺乳头状癌、喉癌、肺癌、乳腺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、肾癌、膀胱癌、子宫内膜癌[9]等。研究证实Galectin-3在甲状腺恶性肿瘤的诊断中有较高的价值，特别是在甲状腺乳头状癌有较高表达[10-11]。TPO是一种合成甲状腺激素所必需的膜结合蛋白，它催化酪氨酸残基的碘化和偶联于甲状腺球蛋白，形成甲状腺激素T3和T4，被认为是甲状腺分化标记物，在甲状腺癌中表达降低[12]。CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO的研究均显示此4项生物分子标记物在甲状腺乳头状癌和甲状腺良性病变中的表达存在显著差异，提示他们可能成为诊断甲状腺乳头状癌的有效参考标记物，但对其诊断敏感度和特异性的报道不一，仍存在争议。本研究结果显示，甲状腺乳头状癌中CK19、HBME-1、Galectin-3的阳性率分别为99.01%、92.57%、98.02%，明显高于甲状腺良性病变组的54.90%、21.57%、31.37%，而TPO的阳性率8.42%则明显低于甲状腺良性病变组的90.20%，与Sanuvada等[11]和Huang等[13]的研究结果相似，表明以上4项指标对甲状腺乳头状癌均具有良好的提示作用，在鉴别甲状腺乳头状癌和甲状腺良性病变中具有较高的应用价值。本研究ROC曲线分析显示CK19、HBME1、Galectin3和TPO对甲状腺乳头状癌的诊断灵敏度分别为0.990、0.926、0.980、0.916，特异性分别为0.451、0.784、0.686、0.902，与多项研究结果显示的 CK19具有高灵敏度低特异性，HBME-1、Galectin-3灵敏度和特异性居中一致[10-11，13-14]。本研究结果显示，TPO对甲状腺乳头状癌的诊断特异性最高，4项指标联合检测灵敏度为0.990、特异性为0.902。虽然联合检测的灵敏度和特异性没有明显优于任何单一指标检测，差异不具有统计学意义(P>0.05)，但在实际工作中联合检测仍能避免因实验误差造成的风险，为甲状腺病变的准确诊断提供更多保障。

尽管甲状腺乳头状癌通常分化良好，生长缓慢，并且局限在原发部位，但长期得不到处理的甲状腺乳头状癌也可以发生淋巴结转移和被膜侵犯，淋巴结转移和被膜侵犯与肿瘤远处转移和局部复发关系密切，且对甲状腺乳头状癌分期及手术范围也有影响[15]。近期一项针对55岁以下甲状腺乳头状癌患者的研究显示，复发率与诊断时的年龄、肿瘤大小、甲状腺被膜侵犯、多灶和淋巴结转移有关，且淋巴结转移是较高复发率的独立危险因素，年龄越小，复发率越高[16]，故淋巴结转移和被膜侵犯均是甲状腺乳头状癌预后不良的影响因素。本研究结果显示，CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO的阳性率与淋巴结转移和被膜侵犯没有相关性，即以上4项指标不能作为甲状腺乳头状癌预后评估指标。

综上所述，CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲状腺乳头状癌和甲状腺良性病变中的表达均具有显著差异，CK19、HBME-1、Galectin-3在甲状腺乳头状癌中高表达，TPO在甲状腺乳头状癌中低表达或不表达，且该4项指标对甲状腺乳头状癌均具有较高的诊断价值，可作为病理诊断的有效辅助方法。