强直性脊柱炎患者抗核抗体检测结果及临床意义分析

陈水绵，游玉权，张红凤，饶华春，郭庆昕△，蔡美美

福建中医药大学附属泉州市正骨医院：1.检验科；2.强直性脊柱科，福建泉州 362000

强直性脊柱炎(AS)是一种以侵犯脊柱、骶髂关节为主要临床表现，可同时合并全身多部位炎症或异常的慢性进展性疾病。自身抗体是诊断自身免疫性疾病(AID)的重要依据，抗核抗体是细胞内所有核抗原成分的总称，为AID的重要辅助诊断指标。抗核抗体存在多种荧光模型，不同荧光模型对应不同的特异性抗体，如抗-SSA抗体、抗-SSB抗体、抗-双链DNA(ds-DNA)抗体等，常见的特异性抗体大部分可通过抗核抗体谱检测，这些抗体也可在AID临床症状前数年被检出[1]，是AID早期诊断必不可少的生物学指标。本文回顾性分析AS患者血清中抗核抗体的检测结果，探讨抗核抗体检测结果在AS患者中的临床应用价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集本院2018—2019年明确诊断为AS的患者453例为研究对象，对抗核抗体检测结果和临床资料进行统计分析，其中合并其他AID的患者12例，包括合并类风湿性关节炎(RA)5例、干燥综合征(SS)3例、系统性红斑狼疮(SLE)2例、系统性硬化症(SSc)1例、混合性结缔组织病(MCTD)1例。纳入标准：(1)符合国际相关协会AS、RA、SLE、SS、SSc、MCTD诊疗指南推荐的诊断标准；(2)排除合并乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒患者；(3)排除银屑病或肠道疾病患者。453例研究对象中男性344例(75.94%)，平均年龄(33±10)岁；女性109例(24.06%)，平均年龄(36±11)岁。

1.2仪器与试剂 Leica-DM2500荧光显微镜(德国恩斯特·徕茨公司)、EURO-Blot MasterⅡ全自动免疫印迹及配套的EURO-Lin Scan软件扫描仪(德国欧蒙医学诊断有限公司)、TDZ5-WS台式低速离心机(湖南湘潭湘仪仪器有限公司)、420B电热恒温水浴箱(江苏新康医疗器械有限公司)。血清抗核抗体IgG检测试剂盒(德国欧蒙医学诊断有限公司)，每个反应区同时有灵长类肝组织切片和人喉癌上皮细胞。抗核抗体谱IgG抗核抗体检测试剂盒(德国欧蒙医学诊断有限公司)。

1.3方法 采用间接免疫荧光法检测抗核抗体，暗环境中用Leica-DM2500荧光显微镜镜检。结果判读：抗体滴度<1∶100为阴性，抗体滴度≥1∶100为阳性，包括1∶100、1∶320、1∶1 000、1∶3 200、>1∶3 200，滴度≥1∶320的标本平行稀释到最终滴度，由本实验室内有5年以上工作经验的工作人员判读，双人复核。采用免疫印迹法检测抗核抗体谱IgG，使用全自动免疫印迹仪进行检测，配套EURO-LinScan软件进行显色结果灰度值扫描分析。结果判读：灰度值<11为阴性，11～25为弱阳性，>25为阳性。

2 结 果

2.1不同性别AS患者抗核抗体分布特征 453例AS患者中抗核抗体阳性139例，阳性率为30.68%。将抗核抗体检测结果分为阳性组(139例)和阴性组(314例)。阳性组男性92例、女性47例，平均年龄(35±11)岁；阴性组男性252例、女性62例，平均年龄(34±10)岁。12例AS合并其他AID患者中男性5例、女性7例，平均年龄(42±8)岁；抗核抗体阳性11例，阳性率为91.67%。女性患者抗核抗体阳性率(43.12%，47/109)显著高于男性患者的抗核抗体阳性率(26.74%，92/344)，差异有统计学意义(χ2=10.44,P<0.01)。

2.2抗核抗体阳性的AS患者荧光核型分布 139例抗核抗体阳性的AS患者，各核型所占比例依次为颗粒型(45.32%，63/139)、均质型(18.71%，26/139)、胞浆型(16.66%，23/139)、核仁型(8.63%，12/139)、混合型(6.47%，9/139)、其他核型(4.32%，6/139)。胞浆型以胞浆颗粒型为主(73.91%,17/23)；混合型以颗粒型混合胞浆颗粒型为主(44.44%，4/9)。各核型检出率比较，差异有统计学意义(χ2=17.9,P<0.01)。

2.3抗核抗体阳性的AS患者核型滴度分布 抗核抗体阳性的AS患者整体滴度中位数为1∶100，各核型滴度中位数分别为颗粒型1∶100，均质型1∶210，胞浆型1∶100，核仁型1∶100，混合型1∶100，其他核型1∶210。见图1。

2.4不同性别中高滴度(≥1∶320)抗核抗体患者分析 将139例抗核抗体阳性的AS患者分成中高滴度组(≥1∶320)与低滴度组(1∶100)。中高滴度组36例，其中男性22例、女性14例；低滴度组103例，其中男性70例、女性33例；2组男女各自所占比例差异无统计学意义(χ2=0.56，P>0.05)。抗核抗体中高滴度(≥1∶320)患者核型以均质型为主(38.89%，14/36)；中高滴度组患者中13例进行了抗核抗体谱检测，其特异性抗体阳性率为30.77%(4/13)；4例抗核抗体谱阳性的特异性抗体分别为抗ds-DNA抗体(均质型1∶1 000)。抗核小体抗体(胞浆颗粒型1∶1 000)、抗nRNP/Sm抗体、抗Ro-52抗体(胞浆纤维型1∶1 000)、抗组蛋白抗体(均质型1∶1 000)。12例AS合并其他AID患者中，中高滴度患者6例，占50.00%，其中仅2例进行了抗核抗体谱检测，均检出了特异性抗体。

2.5AS患者合并其他AID患者多因素Logistic回归分析 以AS患者有无合并其他AID(赋值：无=0，有=1)为因变量，以性别(赋值：男=0，女=1)、年龄(赋值：<20岁=0,20～35岁=1,>35～45岁=2,>45岁=3)、抗核抗体结果(赋值：阴性=0，阳性=1)、滴度1∶100(赋值：其他=0,1∶100=1)、滴度1∶320(赋值：其他=0,1∶320=1)、滴度1∶1 000(赋值：其他=0,1∶1 000=1)为自变量进行多因素Logistic回归分析，结果显示，年龄越大、抗核抗体阳性为AS合并其他AID的危险因素(P<0.05)。见表1。

注：H表示均质型；S表示颗粒型；C表示胞浆型；N表示核仁型；Mix表示混合型；Others表示核点型、中心粒型、着丝点型、致密颗粒型等其他核型。

表1 AS患者合并其他AID患者多因素Logistic回归分析结果

3 讨 论

AS发病机制的研究主要集中在免疫、遗传、肠道感染等相关的领域。有研究通过交叉理论和分子模拟做动物模型试验，证实微生物感染肠道上皮细胞后数天可使机体产生自身抗体[2]。另外，已有研究利用宏基因组学的技术为肠道菌群异常在自身免疫性疾病中致病机制的研究提供了依据[3]。因此，抗核抗体在AS患者中有一定的阳性率，但结缔组织病与AS是否有共同的发病基础，目前研究尚无定论，而AS合并其他AID的相关文献，国内外鲜有报道[4-7]。

本研究结果显示，AS患者抗核抗体阳性率为30.68%，与近年文献报道较为一致[8-9]。男性患者(75.94%)所占比例远高于女性(24.06%)，但对抗核抗体阳性患者进行分析，109例女性患者中抗核抗体阳性率(43.12%)却显著高于344例男性患者中的抗核抗体阳性率(26.74%)，可见尽管是以男性为主的研究人群中，抗核抗体阳性仍具有明显的性别差异。可能的原因为雌激素通过与B淋巴细胞的雌激素受体结合参与免疫调节，从而可能导致女性中自身抗体的产生与增加[9]。

本研究结果显示，抗核抗体阳性患者不同核型检出率差异有统计学意义(P<0.05)。核型以颗粒型(45.32%)为主，其他核型较为分散，主要原因为AID不同个体因致病机制的差异可出现不同的靶抗原及荧光核型。颗粒型特异性抗体以抗-SSA抗体、抗-SSB抗体、抗U1-RNP抗体为主，而抗-SSA抗体、抗-SSB抗体为SS的特异性抗体[10-12]。SS常伴随其他AID，然而关于SS与AS并存的报道较少[13-14]。有文献报道显示，AS患者中，10%伴有SS，71.4%为抗核抗体阳性[14]。HELENIUS等[15]研究认为，AS与SS可能存在相似的发病基础。

抗核抗体阳性的AS患者核型滴度的分布以低滴度为主，抗核抗体滴度≥1∶320的AS患者占18.71%(36/139)。低滴度抗核抗体常见于健康人或老年人，但本文抗核抗体在AS中的阳性检出率(30.68%)远高于以往研究中健康体检者抗核抗体的阳性率12.8%[16]、9.86%[17]。本研究合并其他AID的AS患者有12例，主要合并RA，这可能与本院风湿病患者中以RA为主有关。

对AS合并其他AID患者进行多因素Logistic回归分析结果显示，年龄越大、抗核抗体阳性为AS并发其他AID的高危因素。年龄越大，细胞凋亡更频繁，而细胞凋亡中降解表达在细胞表面的蛋白通常为抗核抗体谱的靶细胞，因此，随着年龄的增长，患AID的风险越大。本研究也在一定的局限性，对滴度的多因素Logistic回归分析只显示1∶100为其危险因素，1∶320与1∶1 000却没有呈现，分析原因为：(1)本研究AS合并其他AID的患者病例数不足，滴度、核型数据离散，仍需要设计合理的大样本研究并进行长期随访来论证；(2)确诊患者并非首诊患者，可能受治疗过程中药物等混杂因素影响。刘倩等[18]通过总结国内外文献发现，AS合并其他AID，两者症状的出现时间相隔大多在5年以上,因此，随着疾病发展，年龄越大，抗核抗体阳性的AS患者应警惕并发其他AID。

综上所述，临床工作中AS患者可通过临床表现及抗核抗体检查结果，加强其临床分类管理。对抗核抗体阳性的中老年人应长期进行医学随访，注意详问病史、查体，深入评估是否并发其他AID。检出中高滴度抗核抗体患者，建议进一步做抗核抗体谱的特异性靶抗原确认或其他相关辅助检查。当临床高度疑似合并其他AID，不论抗核抗体检测结果如何，都需要对特异性抗体进行检测，有利于AS患者合并其他AID的早发现、早诊断、早治疗。