迈瑞BC6800-PLUS血液分析仪8倍光学模式在低值血小板计数检测中的临床应用价值

郭浩翔，李涛，许颖（浙江省台州医院.检验科，.心内科，浙江台州 371000）

低值血小板计数（PLT）是临床疾病诊断的重要依据，也是血小板输注的重要指标。国外输血指南推荐，预防性的血小板输注阈值为10×109／L［1］；国内输血指南推荐，当PLT在（10～50）×109时，需要根据临床出血情况来输注血小板，当PLT低于5×109／L时，应立即给予血小板输注［2］。目前，全自动血液分析仪的普及和应用大大提高了PLT 检测的效率，但仍存在一定的局限性。常用的电阻抗法受到大血小板、小红细胞、红细胞碎片、血小板聚集等诸多因素的干扰，影响PLT。迈瑞BC6800-PLUS血液分析仪除用电阻抗通道和光学通道检测PLT外，还装载了其特有的8 倍倍增模式，即8 倍光学法，在检测过程中，仪器将获取较光学法模式下的8倍PLT统计量，来提高低值PLT 检测的准确性。本研究将对该模式进行临床应用的评价。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂 迈瑞BC6800-PLUS血液分析仪、SC-120自动血涂片制备仪（深圳迈瑞公司），BA53F显微镜（日本Olympus公司），XB-K-25 血细胞计数板（上海安信光学仪器制造公司），按《全国临床检验操作规程（第3版）》配制PLT稀释液（草酸铵法稀释液）［3］。

1.2 标本来源与分组 收集本院2020 年1 月至2021 年1 月PLT≤50×109／L 的全血标本共335例，其中男176 例，女159 例，年龄2～87 岁。335例标本中，按浓度梯度挑选5例（经镜检无干扰）检测重复性，其余330例标本根据有无血小板干扰分成无干扰组120 例，有干扰组210 例，其中有干扰组分成假性增高120例，假性减低90例。330例按PLT（×109／L）分为0～10、10～30、30～50组。

1.3 检测方法

1.3.1 仪器检测法 335 例标本用迈瑞BC6800-PLUS血细胞分析仪的电阻抗法、光学法、8 倍光学法检测PLT，分别记为PLT-I、PLT-O、PLT-O8。

1.3.2 手工法 由2 名技术熟练的主管技师采用双盲法严格按照《全国临床检验操作规程（第3版）》［3］手工计数PLT，取2次计数结果的平均值（2次误差控制在5%以内），记为PLT-M。

1.3.3 染色镜检法 将335 例标本用血涂片制备仪制成血涂片，高倍镜下观察血小板干扰情况，并用油镜确认，分类并记录，有红细胞碎片和小红细胞干扰的归为假性增高组，有大血小板和血小板聚集干扰的归为假性减低组。

1.4 统计学分析 用SPSS 19.0 和Excel 2007 软件对数据进行分析。用Excel 2007 对仪器进行重复性评价，用SPSS 19.0 对3 种仪器方法和手工法检测结果进行配对样本的t检验；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 重复性 结果见表1。比较5 例标本PLT-I、PLT-O、PLT-O8 结果可见，PLT-O8 的CV和s均小于PLT-I、PLT-O的CV和s，说明PLT-O8 的重复性结果最好，精密度高。

表1 5例低值PLT标本重复性检测结果

2.2 无干扰组3 种仪器方法与手工法比较 结果见表2。PLT-I、PLT-O、PLT-O8 分别与PLT-M 比较，差异均无统计学意义（P均＞0.05）；说明PLT无干扰时，PLT-I、PLT-O、PLT-O8结果可靠。

表2 120例无干扰组3种仪器方法与手工法比较结果

2.3 假性增高组3 种仪器方法与手工法比较 结果见表3。120例假性增高标本，经镜检，有小红细胞干扰者28 例，有红细胞碎片干扰者43 例，上述干扰均存在者49 例。将PLT-I、PLT-O、PLT-O8 分别与PLT-M比较发现，PLT-I与PLT-M差异有统计学意义（P＜0.05）；当PLT 在0～10×109／L 时，PLT-O与PLT-M 差异有统计学意义（P＜0.05），而PLT-O8与PLT-M差异无统计学意义（P＞0.05）；表明PLT在0～10×109／L 且有红细胞碎片和小红细胞干扰时，PLT-O8准确性更好。

表3 120例假性增高标本3种仪器方法与手工法比较结果

2.4 假性减低组3 种仪器方法与手工法比较 结果见表4。90 例假性减低标本中，经镜检，血小板聚集者57 例，大血小板干扰者33 例。PLT-I、PLT-O、PLT-O8 分别与PLT-M 比较发现，PLT-I 与PLT-M 差异有统计学意义（P＜0.05），PLT-O、PLT-O8与PLT-M 比较差异无统计学意义（P＞0.05）；表明血小板在有大血小板和血小板聚集干扰时，PLT-O和PLT-O8可靠。

表4 90例假性减低组3种仪器方法与手工法比较结果

3 讨论

随着科技的进步，市面上出现了很多型号的全自动血液分析仪，PLT的检测方法也由过去的电阻抗法发展到现在的光学法、荧光法等，大大提高了临床实验室PLT 检测的效率［4］。有研究报道，当PLT＜80×109／L时，与电阻抗法和光学法相比，荧光法检测PLT具有更好的精密度和准确性［5］，但对于当PLT低于10×109／L时抗干扰检测的报道并不多见。本研究数据显示，当PLT＜10×109／L 且有红细胞碎片或小红细胞干扰时，迈瑞BC6800-PLUS 血液分析仪的8倍光学法准确性和精密度较高，可应用于临床。

迈瑞BC6800-PLUS 血液分析仪的8 倍倍增模式是利用光学法原理，结合半导体激光和RNA 核酸荧光染色法，用前向散射光反映细胞大小，侧向散射光的荧光强度反映细胞内核酸物质含量，在一定程度上检测颗粒细胞内部结构和形态，分辨不同性质的颗粒细胞，由于小红细胞、红细胞碎片等没有RNA不会被荧光染色，因此有效地消除了小红细胞、红细胞碎片等带来的干扰。此光学通道还利用了PLT解聚技术，在恒定的温度和pH 下加入解聚剂，再通过速度达到1 400 r／min 的物理搅拌，有效地解离聚集的血小板，能基本解决由于EDTA抵抗造成的血小板聚集问题。另外其8 倍倍增模式在以上原理基础上获取了对低值PLT 8 倍的粒子统计量，大大提高了低值PLT检测的准确性。

临床上，红细胞碎片、白细胞碎片、小红细胞是引起PLT假性增高常见的干扰成分［6］。有研究表明［7］，由于红细胞和血小板是同一个计数通道，当红细胞体积＜70 fL 时，会对PLT 产生干扰，而本研究的假性增高组只统计了小红细胞和红细胞碎片两项干扰因素，对于其他白细胞碎片、未成熟红细胞的干扰因素尚未可知。当外周血出现体积＜70 fL的真菌、有核红细胞等干扰时，该模式是否适用需要作进一步研究。大血小板、血小板聚集（以EDTA 抗凝剂依赖常见）［8］常引起临床上的PLT假性减低。本研究数据显示，假性减低组中的57例血小板聚集标本有2 例标本并不能利用光学通道有效解决也无法手工计数，这可能与EDTA诱发血小板膜蛋白与GPⅡb／Ⅲa抗体反应，结合后的抗体Fc 端与单核细胞或者淋巴细胞膜上的Fc 受体牢固结合而产生的聚集现象有关，此时无法用光学法解聚血小板，而需要重新采集并用枸橼酸钠抗凝或者末梢血来纠正。另外，全血标本若采集后立即检测PLT也会假性减低，这可能与血小板的可逆性聚集有关，此时需要标本静置30 min 后重新检测［9］。

综上所述，当PLT用电阻抗法检测出现低值报警时，如血小板聚集报警、直方图、散点图等，应该首先涂片复检，以观察到血小板的数量、大小、形态、有无聚集、聚集多少等。若镜检有血小板聚集、大血小板、红细胞碎片、小红细胞等干扰存在时，可选用光学法和8倍光学倍增模式检测，若有红细胞碎片和小红细胞干扰存在且PLT＜10×109／L 时可选用8倍光学倍增模式。若遇到PLT其他干扰时，比如大块血液凝固、白细胞碎片、真菌、有核红细胞等，此时尚未有研究表明该8 倍光学模式可靠，这时还需要结合手工法和血涂片镜检法，才能保证PLT检测的准确和质量，为临床提供更可靠的检验信息。