2020年山东省部分地区鸭圆环病毒感染情况分析

高攀攀，李玲子，韦良孟，庄晓峰，刘金龙，朱瑞良，魏凯*

试验研究

2020年山东省部分地区鸭圆环病毒感染情况分析

高攀攀1，李玲子1，韦良孟1，庄晓峰2，刘金龙2，朱瑞良1，魏凯1*

（1.山东农业大学动物科技院，山东 泰安 271018；2.山东贝瑞康生物科技有限公司，山东 潍坊）

为了解山东省部分地区2020年6～12月份鸭圆环病毒与其他病原体感染的情况，本实验室对从聊城、东营、德州、潍坊、济宁地区送检的130份样品进行了PCR鉴定及药敏试验，其中病毒检测包括：鸭圆环病毒（DuCV）、腺病毒（FAV）、鸭细小病毒（DPV）、禽流感病毒（AIV）、鸭坦布苏病毒（DTMUV）、新型鸭呼肠弧病毒（NDRV）和鸭肝炎病毒（DHV）。结果表明：在130份样品中，76份样品检测出病毒，其中DuCV检出43份，约占56.58 %。86份样品检出细菌，占总样本数28.46 %；DuCV与细菌混合感染37份，占DuCV阳性样本数86.05 %。细菌单纯感染时敏感药物有四种，分别为盐酸环丙沙星、硫酸庆大霉素、氨苄西林钠、阿莫西林；细菌和DuCV混合感染时敏感药物只有两种，分别为硫酸庆大霉素和阿莫西林。说明DuCV在山东省部分地区存在着不同程度的流行，同时与细菌混合感染情况严重且增加了细菌的耐药性。

鸭圆环病毒；单纯感染；混合感染；检出率

鸭圆环病毒（DuCV）是无囊膜结构的DNA病毒，属于圆环病毒科（Circoviridae）、圆环病毒属（Circovirus），基因组全长在1 900～2 000 bp碱基之间[1-2]。DuCV分两个基因型（1型和2型），临床感染以基因1型为主[3]。鸭圆环病毒感染机体后临床表现为羽毛杂乱、生长发育迟缓、体重下降、免疫功能减弱、多器官生长发育不良[4]。鸭圆环病毒与猪圆环病毒相似，有着圆环病毒的共同特征，都可以感染宿主的免疫器官，在淋巴系统内增殖，从而引起免疫抑制，会使机体免疫力降低从而导致继发感染或多重感染，使病情严重，死亡率增加，造成的经济损失严重[5]。结合整个行业的疫情监测结果分析来看，鸭圆环病毒在所有病毒病中感染率高居首位，并且临床分析发现一个明显的规律，只要存在鸭圆环病毒感染，细菌感染的程度往往非常严重。针对2020年6～12月份从聊城、东营、德州、潍坊、济宁地区送检的130份样品调查鸭圆环病毒和其他病原体感染情况来明确山东省部分地区鸭群中DuCV危害情况，进而为山东省养殖户提供数据支持和参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 被检样品 2020年6～12月份，山东省的聊城、东营、德州、潍坊、济宁地区养鸭场共送检130份患病鸭的内脏（肝脏、肺脏、脾脏等），日龄均在20～ 30 d。

1.1.2 主要试剂 Biospin病毒DNA/RNA 提取试剂盒购自杭州博日科技有限公司；2 × Rapid-TaqMasterMix、HisScriptⅡ1stStrandc DNA Synt-hesisKit均购自诺唯赞生物科技（南京）有限公司。

1.2 方法

1.2.1 核酸的提取 实验人员用无菌镊子和无菌剪刀在超净台中取部分肝脏、肺脏、脾脏等置于1.5 ml离心管中，加入生理盐水，放入无菌钢珠（2.5 mm及2 mm各一个），在全自动样品快速研磨器中研磨2 min，参照Biospin病毒DNA/ RNA提取试剂盒说明书提取病毒核酸。

1.2.2 引物 鸭圆环病毒（DuCV）、腺病毒（FAV）、鸭细小病毒（DPV）、禽流感病毒（AIV）、鸭坦布苏病毒（DTMUV）、新型呼肠弧病毒（NDRV）和鸭肝炎病毒（DHV）特异性扩增引物序列，生工生物工程（上海）股份有限公司提供，见表1。

表1 引物序列

1.2.3 PCR/RT-PCR扩增 根据表1中的特异性引物进行PCR/RT-PCR扩增，反转录根据HisScriptⅡ1stStrandcDNA SynthesisKit试剂盒操作；PCR反应体系为DNA模板4 μl、Mix酶10 μl、上游引物（100 μmol/L）1 μl、下游引物（100μmol/L）1 μl、双蒸水4 μl；PCR反应程序：95 ℃ 3 min预变性；95 ℃ 15 s变性，60 ℃ 15 s退火，72 ℃ 6 s延伸，循环32次；72 ℃ 5 min延伸。取10 μl扩增产物进行核酸电泳，琼脂糖凝胶浓度为1 %，将胶回收产物送生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序。

1.2.4 药敏试验 首先无菌取部分肝脏、脾脏等置于2 ml离心管，加入生理盐水，放入无菌钢珠（2.5 mm及2 mm各一个），在全自动样品快速研磨器中研磨2 min，然后将混悬液用玻璃涂布棒均匀致密的涂抹在普通培养皿表面，最后依次贴上磺胺间甲氧嘧啶、大观霉素、盐酸环丙沙星、硫酸粘菌素、盐酸多西环素、利福平、盐酸土霉素、恩诺沙星、硫酸庆大霉素、痢菌净、硫酸新霉素、硫酸卡那霉素、氟苯尼考、盐酸林可霉素、氨苄西林钠、氟甲喹钠、安普霉素、强力霉素、青霉素、丁胺卡那霉素、甲磺酸加替沙星、阿莫西林药敏片置于37 ℃ 温箱培养16～24 h。

1.2.5 数据分析 对聊城、东营、德州、潍坊、济宁地区送检的130份样品病毒检出率、细菌检出率、DuCV与其他病原体混合感染情况进行统计和分析。

2 结果与分析

2.1 病毒和细菌总检出率

表2 6-12月病毒和细菌总检出率

由表2可知，山东省6～12月份，DuCV在130份样品中检出76份病毒，检出率为58.46 %，细菌在130份样品中检出86份，检出率为66.15%，细菌感染严重。在76份病毒阳性样品中DuCV检出43份，检出率为56.68 %，在DuCV阳性样品中细菌检出37份，检出率为86.05 %。说明DuCV感染鸭群更易造成细菌混合感染。

2.2 单个月份鸭圆环病毒和细菌检出数

图1 单个月份鸭圆环病毒和细菌检出数

由图1可知，6、7、8、9月份DuCV、细菌、DuCV和细菌混合感染检出数明显高于10、11、12月份DuCV、细菌、DuCV和细菌混合感染检出数。

2.3 不同病毒的检出数

根据以往病毒流行情况在6～12月份对130份样品检测了DuCV、DPV、H9N2、NDRV、DTMUV、DHV-1、DHV-3和FAV这八种病毒，从图2可以看出，DuCV检出数最高，DPV、H9N2、NDRV和FAV检出数次之，DTMUV、DHV-1和DHV-3检出数最低。

2.4 药敏试验

细菌单纯感染、DuCV和细菌混合感染药敏情况，见表3。

图2 不同病毒的检出数

表3 细菌单纯感染、DuCV和细菌混合感染药敏情况

由表3可知，细菌单纯感染对药物的敏感性高于DuCV和细菌二重感染对药物的敏感性，细菌单独感染时敏感药物有4种，分别为盐酸环丙沙星、硫酸庆大霉素、氨苄西林钠、阿莫西林；细菌和DuCV混合感染时敏感药物只有两种，分别为硫酸庆大霉素和阿莫西林。

3 讨论

我国养鸭业年出栏量已达50亿只，养殖量占全球的80%以上，鸭肉已经成为我国继猪肉和鸡肉之后的第三大肉食品。然而，养鸭业目前的养殖现状堪忧，养殖模式较为简陋和粗放，防疫难度非常大。近几年，鸭传染病呈现“老病未除，新病又发”的状态，尤其是肉鸭养殖后期，细菌病更是难以控制。DuCV通常以隐性感染的形式存在，无特征性症状和病变，它单独感染，几乎不会造成死亡，仅表现为料肉比下降[6]。DuCV侵入机体后感染免疫器官，造成机体抗病能力下降，被条件性致病微生物趁虚而入而造成机体发病。一旦发生混合感染，死亡率明显增加，造成养殖户经济损失严重，因此对DuCV与其他病毒、细菌共感染的研究也越来越多。研究表明DuCV与鹅细小病毒共感染会增强其致病性，导致短喙－侏儒综合征[5]。刘少宁等人研究也表明鸭圆环病毒病和鸭疫里默氏杆菌病或者大肠杆菌等细菌二重感染率达到9.57 %[7]。根据本实验室6～12月份收集的130份样品显示，DuCV和细菌混合感染检出率为86.05 %（37/43），但实际结果应高于86.05 %，是因为实验室条件有限，只检测了一些常规细菌，对于一些要求条件高的如鸭疫里默氏杆菌等无法进行培养。由此可见，DuCV与细菌混合感染在山东部分地区是极其严重的。同时根据不同月份感染情况统计结果显示，DuCV、细菌、以及DuCV和细菌混合感染在6～9月份较多，说明DuCV虽然一年四季都可感染，但是在夏秋季节比较多发，可能是由于夏季雨水较多，温度较高，湿热的环境容易滋生病原菌。根据DuCV和细菌混合感染情况的药敏试验对比发现，DuCV和细菌混合感染的病料比单独细菌感染的耐药性更强，产生的抑菌圈更小，同时有效抗生素较少。由此可以得出，在临床上细菌病危害严重与DuCV感染机体有很大关系，因此在用药之前一定做好PCR检测和药敏试验，做到对症下药，避免盲目用药，增加机体肾脏、肝脏负担以及耐药性的产生。

[1] Guanghua Fu, Shaohua Shi, Yu Huang, Longfei Cheng, Chunxiang Peng, Chunhe Wan,Hongmei Chen, Fang Lin,Jiansheng Lin. Genetic Diversity and Genotype Analysis of Duck Circovirus[J]. Avian Diseases, 2011（2）: 55.

[2] 李天芝, 于新友, 张颖, 等. 鸭圆环病毒病原学特性及分子生物学诊断方法研究进展[J]. 家禽科学, 2018（8）: 40-43.

[3] Liu J, Yang X, Hao X, et al. Effect of goose parvovirus and duck circovirus coinfection in ducks. J Vet Res. 2020, 64（3）: 355-361.

[4] 陆晓, 张俊, 吴军, 等. 鸭圆环病毒感染的临床症状探述[J]. 畜牧业环境, 2020（11）: 78-79.

[5] 邓文芳, 宋文博, 胡星星, 等. 2017-2018年华中地区猪圆环病毒2型分子流行病学分析[J]. 中国动物传染病学报, 2020, 28（2）: 32-38.

[6] Huang Juan, Yang Cui, Jia Renyong, Wang Mingshu, Chen Shun,Liu Mafeng, Zhu Dekang, Zhao Xinxin, Yang Qiao, Wu Ying, Zhang Ling, Yin Zhongqiong, Jing Bo, Cheng Anchun. Induction of a protective response in ducks vaccinated with a DNA vaccine encoding engineered duck circovirus Capsid protein.[J]. Veterinary microbiology, 2018, 225（9）: 40-47.

[7] 刘少宁, 姜世金. 鸭圆环病毒研究进展[C]. 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会（Branch of Animal Infectious Diseases, CAAV）.中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（下册）. 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会. 中国畜牧兽医学会, 2009: 424-427.

（2021–05–11）

S852.65

A

1007-1733（2021）08-0001-04

中央引导地方科技发展资金项目（YDZX20203700004857）