Prospero相关同源异形盒蛋白1在宫颈癌组织中的表达及其临床意义>

李冰，马起鹏，林林，刘畅>

(1.铁岭市中心医院 妇产科,辽宁 铁岭 112000； 2.中国医科大学附属盛京医院滑翔院区 妇科,辽宁 沈阳 110022)

宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤之一，其发病率占女性恶性肿瘤的第4位。近年来，我国宫颈癌的发病率和死亡率呈逐渐上升之势[1]。寻找宫颈癌潜在的分子生物学指标对改善患者生存预后有重要意义。Prospero相关同源异形盒蛋白1(Prospero- related homeobox 1，PROX1)是一种转录调节因子，在淋巴管的形成和发育中发挥重要作用[2]。PROX1在胶质瘤、肝细胞癌、乳腺癌和甲状腺癌等肿瘤组织中高表达，可能发挥促癌基因作用，其表达与肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭、凋亡及迁移等生物学行为密切相关[3- 6]。本研究用免疫组化染色方法检测宫颈癌组织中PROX1的表达水平，探讨PROX1与宫颈癌患者临床病理特征及预后的关系，以期寻找潜在的宫颈癌生物学指标。

1 材料与方法

1.1 标本来源

选取2011年6月至2014年6月铁岭市中心医院81例宫颈癌患者的宫颈癌组织进行研究。纳入标准：(1) 年龄≥18岁；(2) 组织病理学检查证实为宫颈癌；(3) 术前未接受放疗、化疗或免疫治疗等。排除标准：(1) 严重的心肝肾功能障碍；(2) 随访资料不全。患者年龄44～68岁，平均(54.01±11.80)岁；腺癌25例，鳞癌56例；低分化癌44例，中分化癌21例，高分化癌16例；肿瘤直径(3.89±1.34)cm；深浸润42例；有淋巴结转移38例；FIGO分期为Ⅰa期18例，Ⅰb期23例，Ⅱa期40例；术后辅助化疗59例，放疗或放化疗联合治疗13例。治疗后对患者进行门诊和电话随访，患者随访截止2019年6月，记录患者总体生存时间。

1.2 免疫组化染色法检测组织中PROX1的表达

宫颈癌组织和癌旁组织(距离癌组织>4 cm[7])的石蜡切片由铁岭市中心医院病理科制作，厚度为4 μm。在70 ℃下烤片30 min，随后进行脱蜡处理。用Tris/EDTA抗原修复缓冲液(北京酷来搏科技有限公司)进行抗原修复，羊血清封闭30 min。加入鼠抗人PROX1单克隆抗体(1∶1 000稀释，美国Sigma公司)，4 ℃过夜，随后加入生物素标记的鼠抗兔IgG(1∶500稀释，美国Sigma公司)，37 ℃孵育30 min。用辣根标记的链霉素卵白素工作液和DAB显色液处理，苏木紫复染。经过脱水、透明、封片处理后在显微镜下观察。

由两位病理科医师进行独立阅片，两人结果一致则记录结果，如有争议则请第3名医师看片，以两个相同结果为准。每张切片随机选择10个视野，每个视野计数100个细胞，根据细胞的染色强度及阳性细胞比例判断PROX1表达情况。染色为阴性记0分、浅黄色1分、棕黄色2分、棕褐色3分；阳性细胞数为0～10%记1分、11%～50%记2分、51%～80%记3分、81%～100%记4分，将二者评分相乘得出最终结果：0分为阴性，1～3分为弱阳性，4～8分为中等阳性，9～12分为强阳性[8]。0～3分为低表达组，4～12分为高表达组。

1.3 统计学处理

应用SPSS 21.0统计软件进行统计学分析。两组间计数资料比较用McNemar检验。生存分析用Kaplan- Meier法，多因素分析用Cox比例风险回归模型。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 PROX1在宫颈癌组织中的表达

如图1所示，PROX1阳性染色主要出现在细胞核中，细胞浆中也有少量染色。癌组织中PROX1高表达率为69.14%(56/81)，明显高于癌旁组织的11.11%(9/81)，差异有统计学意义(χ2=35.905，P<0.001)。

A.PROX1在癌旁组织中弱阳性表达; B.PROX1在癌组织中强阳性表达

2.2 PROX1表达与宫颈癌临床病理特征的关系

高表达组组织低分化、深浸润和淋巴结转移率均高于低表达组(均P<0.05)，其余资料的组间比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。多因素分析结果显示，分化程度、浸润深度和淋巴结转移是PROX1表达的独立影响因素(P<0.05)，见表2。

表1 PROX1表达与宫颈癌临床病理特征的关系

表2 影响PROX1表达的多因素分析

2.3 宫颈癌总体生存时间的影响因素分析

Cox多因素分析结果显示，组织低分化、浸润较深、淋巴结转移、未辅助化疗、PROX1高表达是宫颈癌患者总体生存时间短的独立影响因素(均P<0.05)，见表3。

表3 宫颈癌患者总体生存时间的多因素分析

2.4 PROX1表达与宫颈癌患者生存预后的关系

高表达组5年生存率为40.74%，明显低于低表达组的71.73%，差异有统计学意义(P=0.031，Log- rank检验)，见图2。

图2 宫颈癌患者生存曲线

3 讨 论

宫颈癌的发病机制目前尚未完全明确[9]。PROX1于1996年首次被Zinovieva等人发现，是prospero在哺乳动物中的同源框基因转录因子[10]。既往研究[3- 6]发现，PROX1与胶质瘤、肝细胞癌、乳腺癌和甲状腺癌等多种肿瘤的发生和发展密切相关。PROX1在宫颈癌中的表达及意义既往未见报道，本研究用免疫组化染色法检测了81例宫颈癌组织和配对的癌旁组织，结果显示癌组织中PROX1表达率为69.14%(56/81)，明显高于癌旁组织的11.11%(9/81)，差异有统计学意义。结果说明PROX1可能作为促癌基因在宫颈癌中发挥作用。

本研究发现，PROX1高表达组低分化、深浸润、淋巴结转移率均高于低表达组，提示PROX1与宫颈癌的进展密切相关。PROX1在肿瘤中的作用机制既往报道较少。Gramolelli等[11]发现，PROX1结合并抑制基质金属蛋白酶- 14表达，进而参与肿瘤血管生成和肿瘤侵袭。也有学者[12]发现，PROX1通过核小体重塑和去乙酰化酶复合物抑制Notch信号通路，进而抑制肿瘤细胞增殖。PROX1也与免疫炎症损伤有关，它能够通过上调转录因子κB促进瘤细胞增殖和侵袭[3]。PROX1也表达于淋巴管内皮细胞，能够参与肿瘤淋巴管新生和肿瘤淋巴道转移[2]。

影响宫颈癌预后的因素有很多，本研究发现肿瘤低分化、浸润较深、淋巴结转移、未辅助化疗是宫颈癌患者不良生存预后的独立影响因素，这与既往报道[13- 15]一致。本研究结果显示，高表达组5年生存率为40.74%，明显低于低表达组的71.73%，提示PROX1可能会成为预测宫颈癌患者预后的生物学指标。

综上所述，PROX1表达水平与宫颈癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移及FIGO分期有关，PROX1高表达可能预示患者的不良生存预后。本研究也存在一些局限性，例如未检测血清中PROX1表达水平，其对宫颈癌早期诊断及鉴别诊断的价值还有待研究；未分析PROX1下游分子的变化，未来需要深入探讨其在宫颈癌中的作用机制。