离子色谱法测定牛黄清胃丸中二氧化硫残留量

张 烨,李 静,丁 华,陈羽涵,聂黎行*,姚令文*

(1. 鄂尔多斯市检验检测中心,内蒙古 鄂尔多斯 017010；2. 中国食品药品检定研究院,北京 100050；3. 鄂尔多斯市蒙医医院,内蒙古 鄂尔多斯 017010)

二氧化硫因其干燥、漂白、防霉、防虫等作用,广泛用于中药材的初加工和仓储等环节[1]。经过硫磺熏蒸(简称硫熏)的药材,色泽美观、不易霉变生虫、含水量高、贮藏期长。但过度熏蒸会改变药性和化学成分,从而影响药效[2],且易导致二氧化硫残留,对人体产生潜在危害[3],故《中国药典》2015年版对山药、牛膝、党参等10种中药材及饮片中二氧化硫的限量作出了规定：二氧化硫残留量不得超过400 mg·kg-1；其他中药材及饮片中二氧化硫残留量不得超过150 mg·kg-1。

牛黄清胃丸由人工牛黄、麦冬、大黄、菊花、桔梗等17味中药材配研制成,具有清胃泻火、润燥通便的功效,用于心胃火盛,头晕目眩,口舌生疮,牙龈肿痛,乳蛾咽痛,便秘尿赤[4]。方中大黄、菊花、桔梗、麦冬等原料易变色或变质,为追求色泽美观,延长储存时间,在产地加工时可能使用硫熏[5-6],从而将二氧化硫残留风险引入中成药。随着药品分析技术的发展,中药材及饮片中二氧化硫的检测方法已基本成熟[6],中成药中二氧化硫的测定尚未见报道。本文采用离子色谱法建立了牛黄清胃丸中二氧化硫的检查方法[7],并首次提出了中成药中二氧化硫的拟定残留限度,为相关药品的安全性研究提供了示范和参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

AE240十万分之一电子天平(瑞士Mettler公司),ICS-1100离子色谱仪,配有阴离子抑制器和电导检测器(美国Dionex公司)。

1.2 药品与试剂

本研究所用49批次牛黄清胃丸均为2018年国家药品监督抽验样品,产自18个生产单位。硫酸根标准溶液(1000 mg/L)购于中国计量测试研究院。30%过氧化氢(优级纯)、氢氧化钾(分析纯)、亚硫酸钠(分析纯)、盐酸(优级纯)购于国药集团化学试剂有限公司,实验用水为市售纯净水经Millipore纯水处理系统纯化所得。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：赛默飞-Thermo Dionex IonPac AS19 IC 色谱柱(250 mm × 4 mm),配有AG11-HC保护柱(50 mm × 4 mm),柱温：35 ℃。氢氧化钾溶液作为洗脱液进行梯度洗脱：0～20 min：8 mmol/L；20～25 min：40 mmol/L；25～30 min：8 mmol/L,流速1.0 mL/min。抑制器电流：60 mA。电导检测器检测池温度：35 ℃。进样体积：100 μL。

2.2 溶液的制备2.2.1 对照品溶液的制备

精密量取硫酸根标准溶液适量,分别加水稀释制成浓度为0.5、1.0、2.0、10、20 mg/L的系列对照溶液,作为工作对照。

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品重量差异项下的大蜜丸,剪碎,混匀,取约5.0 g,精密称定,置两颈烧瓶中,加水50 mL,振摇使分散均匀,接通水蒸气蒸馏瓶。吸收瓶中加入3%过氧化氢溶液20 mL,吸收管下端插入吸收液液面以下。两颈烧瓶中沿瓶壁快速加入盐酸5 mL,立即密封,开始蒸馏。保持蒸馏瓶沸腾并调整蒸馏火力,使吸收管端的馏出液的流出速率约为2 mL/min。至吸收瓶中液体接近100 mL时,停止蒸馏,用水洗涤尾接管并转移至吸收瓶中。加水定容至刻度,摇匀,静置1 h,取上清液,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,即得。

2.2.3 空白溶液的制备

不加样品,自“加水50 mL”起,按“2. 2. 2”项下方法操作,即得。

2.3 测定法

取系列工作对照溶液和供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进样,标准曲线法测定供试品溶液中硫酸根离子含量,再以二氧化硫/硫酸根离子= 0.6669的分子量比折算样品中二氧化硫残留量。

2.4 方法学验证2.4.1 专属性实验

分别取对照品溶液、供试品溶液与空白溶液,按“2.1”项下色谱条件进样,由图1可见,空白溶液不干扰硫酸根离子(二氧化硫)的测定。

图1 HPLC色谱图

2.4.2 线性关系、检出限和定量限

取系列浓度的对照品溶液,进样测定,以浓度为横坐标X,峰面积为纵坐标Y,绘制标准曲线,并进行线性回归,结果硫酸根离子在0.5～20 mg/L范围内线性关系良好,回归方程为Y=0.61X+0.03,相关系数(r)为0.9999。精密量取浓度为1 mg/L的对照品溶液适量,稀释至不同浓度,进样测定,测得检出限(信噪比3∶1)为0.12 mg/L,定量限(信噪比10∶1)为0.37 mg/L。

2.4.3 精密度实验

取浓度为1 mg/L的对照品溶液,按“2.1”项下色谱条件,连续进样6次,测定硫酸根离子峰面积,计算RSD值为0.93%(n=6),表明仪器精密度良好。

2.4.4 重复性和回收率实验

取本品重量差异项下的1号样品,剪碎,混匀,取约5.0 g,精密称定,置两颈烧瓶中,精密加入亚硫酸钠溶液1.5 mL(亚硫酸钠溶液临用新配,并用碘量法[8]标定,以二氧化硫计,浓度为0. 5010 g/L),自“加水50 mL”起,按“2. 2. 2”项下方法制备6份加样回收溶液,按“2.1”项下色谱条件测定,计算得平均回收率为98.55%,RSD值为1.33%(n= 6),表明方法准确性和重复性良好,见表1。

表1 二氧化硫加样回收率(n=6)

2.4.5 样品测定结果

取18个厂家生产的牛黄清胃丸49批次,依法测定,结果所有样品均未检出二氧化硫。

3 讨论

联合国粮食及农业组织/世界卫生组织(Food and Agriculture Organization/World Health Organization,FAO/WHO)食品添加剂联合专家委员会(Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives,JECFA)不定期对有害物质进行风险评估,制定并发布每千克体重每月/周/日可耐受摄入量。二氧化硫及亚硫酸盐类物质作为食品添加剂的每千克体重每日可耐受摄入量(ADI)为0.7 mg/kg[9]。成年人的平均体重(BW)以60 kg计,则二氧化硫每日可耐受摄入量为42 mg。根据药品标准或药品使用说明书中用量计算,牛黄清胃丸每日服用量(F)为24 g。根据公式MRL=ADI×BW/F,得到牛黄清胃丸中二氧化硫的最大残留限度(MRL)为1.75 mg/g。按此拟定限度评价,本文所测样品二氧化硫均未超标,提示该品种二氧化硫残留风险低。