张家港地区14 242例女性人乳头瘤病毒27种分型检测和感染情况分析*

周勤峰，陈媛媛，翟丽华，王 蓉

南京中医药大学附属张家港医院检验科，江苏苏州 215600

宫颈癌是我国女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，几乎90%的宫颈癌病例是由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起[1]。HPV几乎是所有宫颈癌的发病原因，此外，它还会引发其他部位的癌症，比如阴茎、阴道、外阴、肛门和口咽等[2]。目前已知的HPV有170多种[3]，根据其致癌潜力将其分为高危型和低危型两类[4]。由于宫颈癌发病率位居高位，HPV的感染率也因地区和人群而异，因此，制订完善的防治策略，开展HPV分型检测的流行病学分析，对临床宫颈癌的防治具有重要指导意义。

1 资料与方法

1.1一般资料 标本来源于南京中医药大学附属张家港医院2018年1月至2020年8月妇科、妇产科、皮肤科及体检中心等的14 242例女性，年龄16～86岁。其中，阳性病例共3 187例，根据患者年龄分为3组，其中<30岁555例；30～45岁1 526例；>45岁1 106例。

1.2仪器与试剂 试剂为上海透景生命科技股份有限公司提供的HPV核酸分型检测试剂盒，PCR仪为杭州博日公司生产，多功能流式点阵仪为美国Luminex公司生产。

1.3方法

1.3.1标本采集 医护人员以窥阴器暴露宫颈口，用无菌棉拭子擦去宫颈口分泌物，将宫颈刷伸入宫颈口处，顺时针轻柔转动4～5周，慢慢取出宫颈刷，将其放入装有细胞保存液的取样管中，旋紧管盖，并保持标本取样管直立放置，立即送实验室检查或4 ℃短期保存，或-20 ℃长期保存。

1.3.2标本检测 采用HPV核酸分型检测试剂盒(流式荧光杂交法)进行模板制备。(1)DNA模板的提取：标本振荡混匀，取200 μL样本混合液加入1.5 mL EP管内，置于高速离心机内14 000 r/min离心5 min，弃上清液。加入200 μL核酸提取液，混匀，100 ℃干浴15 min，14 000 r/min离心5 min，吸取5 μL上清液作为PCR的模板，同时设立阴性、阳性对照。(2)PCR反应液的配置：每个PCR反应液的总体积为15.8 μL,组成为预混液10.0 μL、引物混合液5.0 μL，聚合酶0.8 μL，试剂混匀备用。(3)加样：在PCR反应管内每孔加入15 μL配置好的PCR反应液，再加入相应5 μL DNA模板，盖紧盖子后瞬时离心使反应液集中在PCR反应管的底部。(4)PCR扩增：将PCR管放入普通PCR仪器，按照试剂说明书指定的扩增反应条件温度进行循环扩增。(5)杂交检测：加入混匀的22 μL微球杂交液，每个标本吸取3 μL PCR扩增产物并加入到相应的杂交孔中，封膜，按照说明书的指示温度和时间进行变性和杂交过程。小心将封膜撕下，每孔快速加入链霉亲和素-藻红蛋白75 μL。加完后将封模重新贴好，48 ℃继续孵育15 min。将微孔杂交板迅速转移至预热的多功能点阵仪上进行检测。(6)结果判读：当标本内标(Globin)信号>150，且HPV型别特异性探针信号>150时，判断该探针对应的HPV型别为阳性。

1.4统计学处理 应用SPSS26.0软件对所得数据进行统计学分析，计数资料用例数或百分比表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1张家港地区HPV27种亚型的阳性率和在阳性标本中所占比例情况比较 14 242份标本中检出HPV阳性3 187例，总阳性率为22.38%(3 187/14 242)。HPV高危型中，阳性率前3位的分别是HPV52、HPV16、HPV58；HPV低危型中，阳性率前3位的分别是HPV61、HPV81、HPV44。见表1。

2.2HPV多重感染分布情况 HPV单一感染最多见，其构成比为71.16%，二重感染构成比为18.45%，三重感染构成比为6.97%，四重感染构成比为2.73%，五重感染构成比为0.56%，五重以上感染构成比为0.13%。见表2。

表2 HPV多重感染分布情况(n=3 187)

2.3不同年龄段HPV单一感染和多重感染的分布情况比较 3 187份阳性标本中，<30岁组共有555份，30～45岁组共有1 526份，>45岁组共有1 106份，3个年龄段均以单一感染多见，各个年龄段间单一感染比较，差异无统计学意义(P >0.05),各个年龄段间多重感染比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 不同年龄段HPV单一感染和多重感染的检出情况比较[n(%)]

3 讨 论

近年来，宫颈疾病的发病率越来越高，且发病人群也越来越年轻化。如果没有及时发现宫颈异常，很可能会造成治疗时机的延误。尤其是在宫颈癌疾病的早期，大多数患者临床症状表现不明显，给临床诊断带来困难[5]。宫颈癌的进展与多种因素相关，其中最主要的诱因为 HPV 感染[6]。因此，有效的筛查女性HPV感染分型检测及恰当的干预，对降低宫颈癌的发病率和病死率至关重要。

根据与宫颈良恶性肿瘤发生的相关性，HPV感染可分为低危型和高危型，前者常导致低度鳞状上皮内病变及良性生殖器疣，后者能导致高度鳞状上皮内病变及宫颈癌。本研究结果显示，张家港地区女性主要感染的HPV高危亚型是HPV52、HPV58、HPV16、HPV53，在阳性标本中所占比例分别为16.35%、11.48%、11.48%、10.45%，这与欧阳敏秀等[7]报道的珠海市女性HPV感染的主要高危亚型为HPV52、HPV16、HPV53基本一致，以及与杨怡艳等[8]报道的广西梧州女性HPV感染的主要高危亚型结果相似。

此外，本研究显示，张家港地区14 242份标本中HPV阳性率为总22.38%(3 187/14 242),且HPV感染以单一感染为主，其构成比为71.16%(2 268/3 187)。不同年龄段HPV单一感染和多重感染的检出情况比较发现，感染人数最多的年龄段集中于30～45岁，其次为>45岁以上。主要原因有可能为30～45岁女性处于性生活活跃期，而45岁之后，由于女性开始进入绝经期，阴道微生态变化及自身免疫力开始降低，从而导致HPV感染[9]。因此，应该重视和倡导不同年龄段女性及时进行HPV基因感染筛查工作，做到早发现早治疗。

HPV感染分型分布情况具有一定的地区差异性，开展HPV感染27种分型检测及感染情况分析有助于发现本地区HPV感染的主要型别，为临床治疗提供有力依据，同时也将会对我国宫颈癌疫苗的研发具有指导性意义。