高效液相色谱法测定乙霉威原药含量

何培迎，陈弘祥，仲春梅

(江苏蓝丰生物化工有限公司，江苏新沂221400)

乙霉威是一种氨基甲酸酯类杀菌剂，能有效地防治对多菌灵产生抗性的灰霉病菌引起的葡萄及蔬菜病害，如黄瓜灰霉病、甜菜叶斑病、番茄灰霉病，也可用于防治茶腐病以及蔬菜水果的防腐保鲜[1]。

根据文献报道，乙霉威原药采用气相色谱分析方法[2]具有较好的准确度和精密度，但采用液相色谱分析方法还未见报道。本文采用高效液相色谱法[3]，对试样中乙霉威进行定量分析。经过试验验证，该方法操作简便、快速、准确，分离效果好，准确度和精密度均能达到定量分析的要求，能够满足乙霉威原药的检验要求，是一种较为理想的分析方法。

1 材料仪器

1.1 样品和试剂

甲醇：色谱纯；水：二次重蒸；乙霉威标样：已知含量≥99.0%(沈阳化工研究院)；流动相：甲醇+水=60+40(体积比)，流动相经0.45 μm孔径的滤膜，并超声脱气10 min。

1.2 试验仪器

高效液相色谱仪：具有紫外可见波长检测器；色谱数据处理机或工作站；色谱柱：Nova-Pak C18不锈钢柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)[沃特世科技(上海)有限公司]。

1.3 高效液相色谱操作条件

流速：1.0 mL/min；柱温：室温(温差变化≤2 ℃)；检测波长：254 nm；进样体积：20 μL；保留时间约5.4 min。

上述操作参数是典型的，可根据仪器的特点，对给定的操作参数作适当调整，以期获得最佳效果，典型的乙霉威高效液相色谱图见图1。

2 测定步骤

2.1 标样溶液的配制

称取乙霉威标样0.050 0 g (精确至0.000 2 g)置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻度摇匀，备用。

2.2 试样溶液的配制

称取含乙霉威试样0.050 0 g (精确至0.000 2 g)置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻度摇匀，备用。

2.3 试样的测定

在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值的重复性，待相邻2针的响应值＜1.0%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

2.4 试样中有效含量的计算

将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中的乙霉威峰面积分别进行平均，试样中乙霉威的质量分数X1(%)按式(1)计算：

式中：A1为标样溶液中乙霉威峰面积的平均值；A2为试样溶液中乙霉威峰面积的平均值；m1为乙霉威标样的质量，g；m2为乙霉威试样的质量，g；P为乙霉威标样的质量百分数，%。

3 结果与讨论

3.1 分析方法的线性相关性试验

准确配制一系列不同浓度的乙霉威标样溶液，在上述色谱条件下进行测定，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。乙霉威线性回归方程：Y=19 593x+13 984，相关系数：R2=0.999。本方法具有良好的线性相关性(图2)。

图2 乙霉威标准曲线

3.2 分析方法的精密度实验

在上述色谱操作条件下，对同一乙霉威原药试样平行测定10次，测得标准偏差为0.254 7，变异系数为0.002 6%(表1)。

表1 乙霉威精密度测定

3.3 分析方法的准确度试验

准确称取5个已知含量的乙霉威原药试样，分别加入一定量的乙霉威标样，在上述色谱操作条件下进行测定。乙霉威平均回收率为100.02%(表2)。

表2 回收率测定

4 结 论

结果表明，采用本方法测定乙霉威含量的准确度和精密度较高，能满足定量分析要求。此方法线性关系良好，操作简单易行，能满足分析产品的检验要求。