lncRNA XIST在胶质瘤中的表达及生物学功能

陈刚 唐海涛 王玉春 王凯 张磊 王晶 曹艳菲

胶质瘤作为神经系统肿瘤中占比较高的一类疾病，与本病相关的众多研究中，关于肿瘤发生发展的研究多见。lnc RNA是近年来在较多疾病患者中研究较多的方面，其对于细胞周期调控及细胞分化调控等方面发挥着重大作用，其表达或功能方面的异常与较多疾病的发生发展密切相关，而各类lnc RNA在胶质瘤患者中的表达研究不断增多[1-2]，XIST作为lnc RNA中研究较多的一类，其在胶质瘤中的细致变化研究[3]，包括对生物学功能的影响研究不足，故认为其仍有待深入探究，以为胶质瘤的诊治提供参考依据。本研究就lnc RNA XIST在胶质瘤中的表达水平及其生物学功能进行研究与探讨，现将研究结果总结分析并报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

（1）选取2018年6月—2019年5月的35例胶质瘤患者为观察组，同时期的35例脑外伤患者为对照组。对照组中包括男性22例，女性13例，年龄为21～63岁，平均年龄（39.0±6.6）岁；致伤原因：车祸致伤者26例，其他9例。观察组中包括男性23例，女性12例，年龄为22～63岁，平均年龄（39.2±6.9）岁；分级：Ⅰ级者8例，Ⅱ级者10例，Ⅲ级者9例，Ⅳ级者8例。两组的年龄与性别比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）中科院细胞库胶质瘤U87及U251细胞。

1.2 方法

采集观察组的胶质瘤组织标本及对照组的健康脑组织标本进行检测，采用实时定量PCR法进行组织lnc RNA XIST表达情况的检测；进行转染试剂的配置，对胶质瘤细胞U87及U251进行转染，术前1 d接种于6孔板，首先以10%血清培养皿进行培养，细胞配合度在70%～80%时严格按照标准进行转染处理，形成siRNA XIST，并设置siRNA-NC；于转染完成后48 h进行克隆数方面的检测与统计，主要为以克隆形成实验进行检测，以5 000个细胞于培养皿中进行培养，直至克隆集落形成后进行下一步的固定染色处理，进行U87及U251细胞克隆数的统计；然后采用AnnexinV/PI双染色细胞凋亡试验进行凋亡细胞的检测，在细胞融合度在80%时进行培养基清洗，依次进行其他处理，并以流式细胞仪进行检测，判定各个象限的细胞情况，统计凋亡细胞比率；对U87及U251进行Transwell细胞侵袭实验检测，培养后，基底膜干燥后采用单细胞悬液进行培养，并于显微镜下进行5个视野细胞穿膜数的统计。然后统计及比较两组、观察组中不同分级者的组织lnc RNA XIST表达情况，同时检测转染siRNA XIST与siRNA-NC的U87及U251细胞克隆数、凋亡细胞比率及细胞穿膜数。

1.3 统计学检验

研究中的数据采用软件SPSS 23.0进行分析，计量资料采用（）表达，进行t检验，重复测量的计量资料进行方差分析，计数资料采用（%）表示，进行χ2检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组、观察组中不同分级者的组织lnc RNA XIST表达情况比较

观察组的lnc RNA XIST表达高于对照组，观察组中不同分级者的组织lnc RNA XIST表达比较，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。

2.2 siRNA XIST与siRNA-NC的U87及U251细胞克隆数比较

转染siRNA XIST的U87及U251 XIST表达量下调为80%；转染siRNA AGAP2-AS1的U87及U251细胞克隆数低于siRNA-NC，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表2。

2.3 siRNA XIST与siRNA-NC的U87及U251凋亡细胞比率比较

转染siRNA AGAP2-AS1的U87及U251凋亡细胞比率高于siRNA-NC，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表3。

2.4 siRNA XIST与siRNA-NC的U87及U251细胞穿膜数比较

转染siRNA AGAP2-AS1的U87及U251细胞穿膜数低于siRNA-NC，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表4。

3 讨论

近年来关于各类长链非编码RNA在肿瘤发生发展中的作用研究不断增多，研究普遍显示，其在各类肿瘤的生殖、侵袭等功能中具有重要的调控作用[4-5]。而lnc RNA XIST作为一类重要长链非编码RNA，有研究认为其是miR-429、miR-204-5p的靶向miRNA，而miR-429及miR-204-5p对于胶质瘤的增殖、迁徙及侵袭等生物学行为有调控作用[6-8]。临床中关于lnc RNA XIST在胶质瘤患者中的表达变化研究可见的同时，其对于胶质瘤分期的检测作用仍有待深入研究[9-10]，而其对胶质瘤增殖、侵袭及凋亡等方面的针对性影响研究极为匮乏，因此进一步细致探究lnc RNA XIST对胶质瘤生物学功能的调控作用意义较高。

本研究就lnc RNA XIST在胶质瘤中的表达水平及其生物学功能进行探究，结果显示，胶质瘤病灶组织的lnc RNA XIST表达升高，且分级较高者的胶质瘤组织lnc RNA XIST表达相对更高，同时siRNA XIST的U87及U251细胞克隆数及细胞穿膜数低于siRNANC，凋亡细胞比率高于siRNA-NC，因此认为lnc RNA XIST在胶质瘤中的检测价值较高，其对于胶质瘤的生物学行为具有较强的调控作用。分析原因，可能与lnc RNA XIST通过调控miR-429及miR-204-5p等miRNA来实现对胶质瘤细胞的血管形成、细胞增殖及侵袭等影响[11]，且分级越高者的表达越高，与疾病的进展情况有关[12]。综上所述，我们认为lnc RNA XIST在胶质瘤中的表达水平较高，lnc RNA XIST的高表达状态提升了胶质瘤细胞的增殖及侵袭能力。

表1 两组、观察组中不同分级者的组织lnc RNA XIST表达情况比较 （）

表1 两组、观察组中不同分级者的组织lnc RNA XIST表达情况比较 （）

组别lnc RNA XIST观察组 Ⅰ级（n=8） 1.03±0.15Ⅱ级（n=10） 1.86±0.21Ⅲ级（n=9） 2.29±0.28Ⅳ级（n=8） 2.81±0.37 F值 70.585 P值 0.000整组（n=35） 2.10±0.26对照组（n=35） - 0.95±0.12 t值 - 23.758 P值 - 0.000

表2 siRNA XIST与siRNA-NC的U87及U251细胞克隆数比较 （）

表2 siRNA XIST与siRNA-NC的U87及U251细胞克隆数比较 （）

分类 U87 U251 siRNA XIST 86.32±15.33 88.63±17.65 siRNA-NC 198.68±22.31 210.35±25.35 t值 24.557 23.312 P值 0.000 0.000

表3 siRNA XIST与siRNA-NC的U87及U251凋亡细胞比率比较 （）

表3 siRNA XIST与siRNA-NC的U87及U251凋亡细胞比率比较 （）

分类 U87 U251 siRNA XIST 25.25±2.68 29.89±2.72 siRNA-NC 12.23±1.37 9.96±1.63 t值 25.592 37.183 P值 0.000 0.000

表4 siRNA XIST与siRNA-NC的U87及U251细胞穿膜数比较 （）

表4 siRNA XIST与siRNA-NC的U87及U251细胞穿膜数比较 （）

分类 U87 U251 siRNA XIST 16.65±2.21 19.96±2.53 siRNA-NC 58.83±3.39 66.76±3.90 t值 61.664 59.558 P值 0.000 0.000