性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

殷均阳，郭 航，刘 宇，李辑伦，郭海周

(郑州大学第一附属医院胸外一科，河南 郑州 450052)

性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4(sex-determining region Y-related high mobility group box 4，SOX4)是SOX家族的主要成员，在调节细胞干性、增殖、分化和调控胚胎发育、器官形成过程中起到关键性作用[1]。既往研究[2-5]发现，SOX4在恶性肿瘤组织中频繁高表达，参与了结直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌等多种肿瘤的发生、发展。在肺癌中，SOX4充当何种角色尚不清楚，能否将之作为肺癌诊断、预后标志物及新的治疗靶点有待研究。本研究旨在探讨SOX4在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)组织中的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料收集郑州大学第一附属医院2018年10月至2018年12月收治的63例接受肺癌根治术患者的肿瘤组织及癌旁正常组织标本，所有患者均未接受术前化疗或放疗。63例患者年龄43～75岁，中位年龄62岁。男39例，女24例。吸烟33例，不吸烟30例。病理类型：腺癌42例，鳞癌21例。分化程度：高分化13例，中分化20例，低分化30例。临床分期：I期15例，Ⅱ期20例，Ⅲ期28例。有淋巴结转移38例，无淋巴结转移25例。

1.2 荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测SOX4 mRNA采用qPCR检测NSCLC患者肿瘤组织和癌旁正常组织中SOX4 mRNA表达。具体过程：根据Trizol操作说明书进行总RNA抽提，提纯后，逆转录合成互补DNA，-80 ℃保存备用。SOX4上游引物：5’-CTCAAAGACAGCGACAAGATCC-3’；下游引物：5’- ACTTGTAGTCGGGGTAGTCAGC -3’。使用SYBR Green qPCR Mix (Universal)进行SOX4 mRNA检测。用2-△△Ct法处理测得的Ct值，得出mRNA的相对表达量。实验重复3次。

1.3 免疫组化染色检测SOX4蛋白采用免疫组化染色检测NSCLC患者肿瘤组织和癌旁正常组织中SOX4 mRNA表达。具体过程：对组织标本进行包埋、脱蜡、抗原修复、封闭处理后分别予以一抗(SOX4抗体，1400)、二抗(羊抗鼠IgG，1400)处理，染色后脱水、封片、观察。染色后可见阳性SOX4为棕黄色颗粒，主要定位于细胞核。统计10个显微镜视野中显示免疫反应的阳性细胞数，计算阳性细胞百分比。阳性细胞百分比评分:0分(0%)、1分(1%～10%)、2分(11%～50%)、3分(>50%)。阳性细胞染色强度评分:0分(阴性)、1分(弱)、2分(中等)、3分(强)。将百分比和强度评分相乘得到最终数值。总分≥3者定义为SOX4高表达，<3分者为低表达。

2 结果

2.1 NSCLC患者肿瘤组织和癌旁正常组织中SOX4 mRNA表达比较SOX4 mRNA在NSCLC肿瘤组织和癌旁正常组织中的表达水平分别为1.25±0.72和0.58±0.52，比较差异有统计学意义(t=10.419，P<0.001)。

2.2 NSCLC患者肿瘤组织和癌旁正常组织中SOX4蛋白表达比较SOX4蛋白在NSCLC肿瘤组织和癌旁正常组织中的高表达率分别为60.3%(38/63)和30.2%(19/63)，差异有统计学意义(χ2=11.565，P<0.001)。见图1、表1。

图1 NSCLC患者肿瘤组织(A)和癌旁正常组织(B)中SOX4蛋白表达比较

表1 NSCLC患者肿瘤组织和癌旁正常组织中SOX4蛋白表达比较

2.3 肿瘤组织中SOX4蛋白表达与NSCLC临床病理特征之间的关系肿瘤组织中SOX4表达与NSCLC分化程度(χ2=9.839，P=0.007)、临床分期(χ2=10.030，P=0.002)、淋巴结转移(χ2=10.240，P<0.001)有关。见表2。

表2 肿瘤组织中SOX4蛋白表达与NSCLC临床病理特征之间的关系

3 讨论

转录和转录后的分子网络改变推动了肿瘤的进展，以此为基础，SOX4通过影响下游基因的转录激活及表观遗传修饰，赋予肿瘤细胞生存和增殖的优势，抑制其凋亡，并使之获得上皮间质转化、迁移和侵袭的能力，以促进肿瘤的进展。越来越多的研究已经揭示了SOX4与各种恶性肿瘤发生、发展之间的关联性。Hur等[6]的研究表明SOX4通过抑制肿瘤抑制因子p53的转录活性，减少肿瘤细胞的凋亡，进而促进肝癌的进展。Zhang等[7]在乳腺癌中研究中发现SOX4在体外和体内异种移植模型中的表达可诱导上皮间质转化并促进肿瘤转移，与此相契合的是， Vervoort等[8]报道，在上皮间质转化过程中，TGF-β介导的SOX4表达上调是诱导人乳腺上皮细胞间充质表型产生的重要条件。上皮间质转化使肿瘤细胞耐药性增强、基底膜降解、血管生成、影响肿瘤微环境[9]，更加证实了SOX4与肿瘤之间的密切联系。PI3K/Akt/mTOR信号通路影响癌症的许多主要特征，包括细胞增殖、存活、代谢和基因组不稳定性等， Mehta等[10]的研究发现SOX4扩增也可通过调节PI3K/Akt信号通路，改变Akt磷酸化程度，进而调控肿瘤发展。

但其在非小细胞肺癌中的作用仍未得到清晰的阐释，针对这一问题，我们利用免疫组织化学染色比较了癌旁组织与肿瘤组织SOX4蛋白表达的差异性，结果提示，在多数肿瘤组织中SOX4呈高表达(38/63)，而在癌旁组织中，SOX4则多为低表达(44/63)。而在转录水平上，肺癌细胞SOX4 mRNA的扩增也进一步证实了这种差异性表达；为了解SOX4与NSCLC临床特征间的关系，将63例NSCLC患者按照SOX4的表达进行分层，结果表明SOX4过表达与临床分期、淋巴结转移(N分期)、分化程度相关，提示SOX4在NSCLC的进展、转移中可能充当了类似癌基因的角色。SOX4在NSCLC中的具体作用机制不详，Friedman等[11]发现，来自SOX4的抗原肽能够激活识别SOX4阳性肺肿瘤细胞的CD4+和CD8+T细胞，而SOX4敲除能够逆转CCAT1导致的顺铂耐药[12]，这些证据表明，SOX4有望成为NSCLC治疗中一个潜在的治疗靶点。

本研究入组病例较少，随访时间短，未进行生存分析，尚不能判断能否将SOX4作为判断预后的指标。但是，本组资料提示，SOX4高表达的患者中，多有淋巴结转移，且以 Ⅲ 期病变为主，推测该群患者可能关联了一个不良的预后，提示我们在临床决策时根据SOX4的表达情况将患者分为不同的亚群，采用个体化的治疗模式，有望提高临床疗效。临床实践中，Ⅰ～Ⅱ期病变推荐尽早进行手术干预，对于Ⅲ期NSCLC病变，则推荐同步放化疗或者新辅助治疗后再决定是否手术的策略。