不同温度下冷凝集素试验对ABO血型正反定型与电子交叉配血试验结果的影响

刘力铭

（平顶山市第一人民医院，河南 平顶山 467000）

输血是临床上一项重要的抢救和治疗措施，当血红蛋白＜60 g·L-1时，机体代偿机能难以维持正常血压水平，会引发机体活动障碍，此时需输血治疗[1-2]。为保证输血有效性、安全性，临床常通过ABO血型正反定型与电子交叉配血试验进行配血[3]。冷凝集素属自身抗体，正常生理情况下，不会促进红细胞凝集，但研究证实，在低温条件下，红细胞由于自身特性会出现凝集现象，尤其在4℃时红细胞明显凝集[4]。高滴度冷凝集素会对交叉配血试验结果造成影响，从而降低输血治疗效果，因此，在进行交叉配血时，需尽可能避免冷凝集素影响，提高配血成功率，保证用血安全[5]。本研究选取我院2019年2月至2020年4月间收治的需紧急输血患者248例，探讨不同温度下冷凝集素试验对ABO血型正反定型与电子交叉配血试验结果的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院收治的需紧急输血患者248例（2019年2月～2020年4月）作为研究对象，其中女123例，男125例；年龄18～76岁，平均年龄56.68±8.14岁；体质量45.6～77.8 kg，平均体质量61.15±7.67 kg。

纳入标准：患者及其家属知情、自愿并签署同意书；血红蛋白＜60 g·L-1；年龄≥18岁；无输血史、药物过敏史、遗传病史。

排除标准：伴有免疫系统疾病、肝功能损伤及艾滋病、结核病、乙肝等传染性疾病；血型为Rh（-）。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂

血型血清学离心机（生产厂家：长春博研科学仪器有限责任公司，型号：TD-3A），全自动血库系统（生产厂家：烟台艾德康生物科技有限公司，型号：AIS-EN70），恒温水浴箱（生产厂家：常州市国旺仪器制造有限公司，型号：HHW-420.600.），显微镜（生产厂家：日本奥林巴斯公司，型号：BX53）。

凝聚胺试剂购于合肥天一生物技术研究所，抗A抗B血型定型试剂购于上海信帆生物科技有限公司，RhD血型定型试剂购于苏州苏大赛尔免疫生物技术有限公司。所有仪器与试剂均进行严格质控，按照使用说明书进行操作。

1.2.2 ABO血型正反定型

抽取患者静脉血2 mL，于37℃离心后取血清加入1 mL抗凝血剂，使用生理盐水洗涤血液样本内的红细胞3次，将经过洗涤的溶液制成浓度为2%的红细胞悬液。取10支试管，分别加入生理盐水0.2 mL，接着向第1支试管加入0.2 mL血清，直至对半稀释到第9支，最后与第10支进行比较。向10支试管各加入0.2 mL红细胞悬液，混合均匀后分别放置在20 ℃、37 ℃温度下，静置12 h后观察结果。

1.2.3 电子交叉配血

血型鉴定：吸取内含EDTA-K2抗凝剂的患者血液样本2 mL，以3000 r·min-1离心5min后置于全自动血库系统进行血型检测。

电子交叉配血：首先检测血液样本中的不规则抗体，若结果呈阴性，根据血型鉴定结果，对血型匹配一致性进行判断，若结果呈阳性，需确定抗体性质，后判断血型匹配一致性。分别在20 ℃、37 ℃进行交叉配血，查看凝集反应是否出现并记录结果。

1.2.4 血清学交叉配血

以试管法复查RhD血型与ABO血型，再采用1.2.3中血型鉴定方法与血液标本进行主侧、次侧交叉配血。

1.2.5 冷凝集素试验

向血清标本中加入O型健康人群红细胞或同型血，分别放置在4 ℃、31 ℃、37 ℃温度下，记录红细胞凝集情况。

1.2.6 交叉配血试验

于37℃温度下，使用盐水法、凝聚胺配血法处理患者血液样本，主侧、次侧均出现凝集现象，代表配血不符，以24 ℃生理盐水洗涤红细胞3次，制成浓度为2%的红细胞悬液，再次进行交叉配血，观察结果。

1.3 统计学分析

所有数据采用SPSS22.0软件进行分析，计量资料以均数±标准差（±SD）表示，行t检验；计数资料以例或率（n（%））表示，行χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清学交叉配血与电子交叉配血结果比较

248例需紧急输血患者血液样本，血清学交叉配血、电子交叉配血主侧相合率无明显差异（P＞0.05），次侧相合率差异显著（P＜0.05），见表1。

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2.2 不同温度下ABO血型鉴定结果

ABO血型，在不同温度下的鉴定结果（表2）。

表2 不同温度下ABO血型鉴定结果比较

2.3 不同温度下电子交叉配血结果

20℃时电子交叉配血出现凝集例数多于30 ℃（P＜0.05），见表3。

表3 不同温度下电子交叉配血结果（n（%），n=248）

2.4 冷凝集素试验结果

向血清标本中加入O型健康人群红细胞或同型血，分别放置在4℃、31℃、37℃温度下，4℃温度下出现明显红细胞凝集现象，31℃温度下可见红细胞凝集，而温度升至37℃时，红细胞凝集现象消失。

2.5 交叉配血试验结果

于37℃温度下，以盐水法、凝聚胺配血法进行交叉配血，主侧、次侧均出现凝集现象，后用经过处理的血清采取相同方法进行交叉配血，主侧、次侧未出现凝集现象，将血液样本放置在载玻片，利用显微镜观察到红细胞弥漫、散在排列，交叉配血成功。

3 讨论

输血为临床重要治疗手段，为避免发生溶血、免疫排斥等不良反应，输血前需对供血者、受血者的血型进行配对[6-7]。现阶段，在临床配血时通常经ABO血型正反定型匹配后方允许输血，保证输血安全性[8]。但正反定型结果受到众多因素影响，冷凝集素是其中之一[9]。随着电子技术进步，电子交叉配血试验在临床逐渐得到应用，其具有便捷、高效、准确等优势，能降低试剂库存量，减少工作量，由计算机系统选择与受血者相匹配的血型，还能减少人工操作失误[10-11]。本研究对248例需紧急输血患者血液样本进行研究发现，冷凝集素引发的交叉配合不合，主要为次侧不合，可在加温后消除。温度是影响冷凝集素活性的关键，有关文献报道，温度＜31℃时，冷凝集素作用于红细胞抗原，出现红细胞凝集现象，随着温度上升，冷凝集素活力消失[12]。本研究还发现，ABO血型正反定型与电子交叉配血试验结果受到温度影响。要避免冷凝集素的影响，在ABO血型正反定型与电子交叉配血试验时需注意以下几点：（1）春冬季节温度较低，易出现高效价冷凝集素，可将血液样本放置在37℃恒温水浴箱中，后再行检测，若提高温度后，血型正反定型仍不相符或仍发生凝集反应，需排除其他因素引发的凝集反应；（2）ABO血型正反定型不符时，应进一步选择合适定型方法，如盐水法、凝聚胺配血法；（3）对于需输血治疗的患者，应首先确定冷凝集素的效价，保证输入同型血液，同时注意输血速度缓慢、血液温度适宜，以保证输血有效性、安全性[13-15]。

综上所述，在低温条件下，冷凝集素可促进红细胞凝集，影响输血科ABO血型正反定型与电子交叉配血试验结果，为保证输血安全，应选择科学合理鉴别方式，避免漏检、误检。