无创DNA产前检测筛查胎儿染色体异常的临床价值分析

景丽丽 ，胡昭昭

（1.武汉市青山区妇幼保健院，湖北 武汉 430080；2.武汉市汉阳区妇幼保健院，湖北 武汉 430050）

0 引言

染色体疾病是一大类遗传疾病，不仅危害个人生长发育、智力问题，还可能涉及到多个器官、系统的形态功能异常。在某些遗传性疾病（例如：Bloom综合征、范可尼贫血、唐氏综合征）中，DNA修复过程存在缺陷，染色体易发生突变，因此以上患儿发生急性白血病及淋巴瘤的危险性极高，染色体异常的影响不可小觑[1]。据2012年《中国出生缺陷防治报告》显示，我国出生缺陷发生率在5.6%左右[2]，在医疗卫生层面还需提升临床筛查与诊断能力。处于二级预防的无创DNA检测是基于细胞核型水平，对母体外周血中胎儿的DNA构建单倍体型，不仅位点准确而且准确度高。基于此，本文将探讨唐筛高风险、MOM值异常等高风险产妇的检测优势，确定精确度的范围。

1 资料与方法

1.1 一般资料。选取我院于2018年1月至2020年1月收治的82例孕妇为研究对象，孕周期均满5周以上，且经过B超检测存在胎心和卵黄囊。年龄23～43岁，平均（28.14±5.34）岁，孕周13～26周，根据孕妇个人情况分为以下五组：①唐筛高风险组：16例，均筛查血清检查标志物后确定唐筛NTD高风险数据[3]；②直接DNA监测组：20例，孕20+6w以上错过血清学筛查最佳时间；③唐筛MOM值异常组：23例，危险性高于1/270，血浆蛋白a值和绒毛膜促性腺激素等数值不正常；④B超监测超常组：10例，宫腔内可见妊娠残留物或宫壁可见内为混杂回声的包块；⑤高龄组：13例。

1.2 方法。无创DNA检测法：抽取孕妇肘静脉血5 mL，离心，提取孕妇血浆中游离态DNA；使用试剂盒（购自于华大生物科技（武汉）有限公司）对孕妇待测血清中游离态的DNA 进行测序，采用最新MGISeq-2000 测序系统（购自华大基因）检测，获取每条染色体上分布的确切的核酸序列，对样本序列进行比对，计数染色体后生成报告。羊水/脐血细胞染色体培养检查：确定高风险后，在超声仪器的精准定位下，针头穿过子宫肌层，避免接触胎儿，且确认胎儿有无异常举动，找准胎盘位置，再进行穿刺抽取羊水，辅助QF-PCR技术及CMA芯片批量检测细胞，对染色体进行染色、观察、分析、审核的操作后，识别24条染色体形态特征及显带分布，得出诊断比例，当比例错误如母血细胞的污染需重新取样。如果错过最初产检诊断，采用脐带血穿刺方式。

1.3 观察指标

1.3.1 遵循 NIPT最新指南：该指南指出无创DNA检测是指针对羊水/脐血穿刺而言的一种产前保护性预判，通过综合高通量测序技术与遗传与变异理论基础，对18、21、13三对染色体个数进行筛查，并报以谨慎态度寻其假阳性和假阴性的可能[4]。

1.3.2 以完整度高的样本信息为基础：首先在首次阳性筛查确定高风险后，还需以“金标准”二次复查，即通过羊水穿刺对全基因组的缺失重复等情况下诊断。其次对产程需要较好的把握，严格记录孕周及年龄等一般资料；产后按时随访阴性样本，结合影像学检测二次排除阳性可能。

2 结果

2.1 82例孕妇无创DNA检测筛查阳性情况。五组孕妇中染色体筛查阳性的有12例，具体患有的疾病风险分布如表1。

2.2 82例孕妇完善羊水/脐血穿刺后检查结果比对。四者核型在完善羊水/脐血穿刺后检出率均为100%，无创检查21-三体核型异常的准确率为64.52%；18-三体、13-三体和XXY核型的准确率分别为83.33%、100.00%、100.00%，见表2。

表1 82例孕妇无创DNA检测筛查阳性情况

表2 82例孕妇完善羊水/脐血穿刺后检查结果比对

3 讨论

为贯彻落实《健康中国行动（2019-2030年）》，规范二级预防的无创产前基因检测，我们需关注无创DNA检测的适用人群及把控正确率。无创DNA检测是将血液中的少量胎儿DNA游离、富集，通过PCR扩增技术比对样本序列，程度较为简单[5-6]。相比于以往的血清筛查对孕周有严格要求，且对于假阳性率为3.5%～8%的局限，无创检测所满足的孕周范围更大，满足12～24周的条件内即可得出风险率，且检出率远远高于血清筛查[7-8]。

本文针对临界高风险孕妇作单倍体型的构建，高级筛查出12例单基因遗传性问题，总阳性率为14.63%，再对高风险人群作羊水或脐血穿刺，以对全基因组的缺失重复等情况下作诊断，提示18-三体、13-三体和XXY核型的准确率分别为83.33%、100.00%、100.00%。这得益于减少了两次纯化的PCR扩增最大限度的保留的胎儿游离DNA，减少了样本间的污染。研究表明，胎儿游离DNA片段长度较小，纯化过程中更容易丢失，因此通过简化血浆DNA测序文库的构建流程使得精准度增加。而通过直接建立PCR-free库抑制PCR固有惯性扩增，改善短片段DNA结构变化的缺陷，可真实反映原始样本。此外，无创DNA对染色体微缺失或重复等100多中染色体病同样具有检测效应，根据10余万临界危险孕妇检测回访数据得，对某种微缺失疾病（DiGeorge）的检测率高达94.20%，这无异是跳出了传统筛查仅可检测出21/18/13三体的局限。

站在临界高风险孕妇的角度而言，无创DNA检测带来精确度高的同时也减少了不必要的损伤及风险。孕产妇对于孕育健康儿童的需求不断提高，部分孕妇在羊水穿刺可能面临的流产、感染甚至损伤胎儿的可能性感到恐惧，无创DNA检测的出现为不想有创的孕妇提供了第二个选择。因此，胎儿游离DNA补缺临床无创的筛查空白，起到对现有诊断技术体系的有效补充。

综上所述，无创DNA的基因检测技术为出生缺陷防控带来了极大的积极作用，大大提升了准确率，推进了无创检测的发展。