血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA联合检测对良恶性卵巢囊性病变的鉴别诊断价值*

李 凡，毕胜利，张学林，郝 洁，吕 佳

河北北方学院附属第二医院：1.检验科；2.妇科；3.肿瘤科，河北张家口 075100

卵巢囊性病变是体内多种内分泌系统功能异常协同作用而导致卵巢产生过量雄性激素的结果，在妇科疾病中较为常见[1]。其发病较隐匿，缺乏典型的临床症状及有效的早期鉴别诊断方法，易造成误诊[2]。因此，准确地鉴别诊断卵巢囊性病变的良恶性对临床治疗方案的选择及预后的改善有重要意义。血清高半胱氨酸蛋白61(Cyr61)是结缔组织生长因子家族成员之一，近年来其在肿瘤中的调节作用已成为国内外研究的热点[3-4]。血清血管生成素样蛋白4(Angptl4)是血管生成素样蛋白家族的成员之一，在糖脂代谢及胰岛素抵抗的调节中起重要作用，此外还与肿瘤细胞的迁移密切相关[5-6]。本研究通过检测卵巢囊性病变患者血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相对表达水平，探讨血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA联合检测鉴别诊断良恶性卵巢囊性病变的价值，以期提高卵巢囊性病变良恶性的鉴别诊断率。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年6月至2020年5月在河北北方学院附属第二医院妇科接受治疗的156例卵巢囊性病变患者为研究对象，根据术后病理结果明确病变性质，将患者分为良性卵巢囊性病变患者(良性肿瘤组，82例)和恶性卵巢囊性病变患者(恶性肿瘤组，74例)。良性肿瘤组患者年龄20～69岁，平均(47.34±13.17)岁；恶性肿瘤组患者年龄20～68岁，平均(47.02±13.46)岁。2组患者年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。恶性肿瘤组肿瘤最大径≥5 cm的患者有38例，肿瘤最大径<5 cm有36例；分化程度：中、高分化46例，低分化28例；FIGO临床分期：Ⅰ+Ⅱ期45例，Ⅲ+Ⅳ期29例；组织分型：浆液性腺癌39例，黏液性腺癌35例；淋巴结转移：无淋巴结转移45例，有淋巴结转移29例。本研究经河北北方学院附属第二医院伦理委员会批准执行；所有研究对象均为自愿参加，并签署知情同意书。

纳入标准：(1)经影像学及临床检查发现，并经病理学检查明确病变性质；(2)实验室、临床检查及影像学资料完整、清晰；(3)初次确诊，此前未进行过放化疗及手术治疗；(4)精神状态无异常。排除标准：(1)伴有急性感染性疾病及其他部位原发性恶性肿瘤；(2)伴有其他妇科疾病；(3)伴有严重心、肝、肾功能不全及凝血功能不全；(4)因其他原因不能参与本研究。

1.2试剂与仪器 RNA提取试剂盒(货号：R1200)购自上海恒斐生物科技有限公司；反转录试剂盒(货号：121262)购自北京凯瑞基生物科技有限公司；miScript SYBR®Green 实时荧光定量PCR(qPCR)试剂盒(货号：218076)购自德国凯杰公司。qPCR仪(型号：7500)购自美国Applied Biosystems公司。

1.3方法

1.3.1标本采集与保存 采集所有受试者入院第2天清晨空腹静脉血标本3 mL，3 000 r/min离心15 min后收集血清，迅速置于-80 ℃保存待测。

1.3.2血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相对表达水平检测 采用RNA提取试剂盒提取血清总RNA，反转录试剂盒将RNA反转录得到cDNA，具体操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。采用qPCR法测定血清Cyr61、Angptl4及其内参GAPDH的mRNA表达情况，引物由上海生工生物工程股份有限公司设计并合成，引物序列见表1。反应体系共20.0 μL：cDNA模板(50 ng/μL)2.0 μL，miScript SYBR®Green Mix 10.0 μL，上、下游引物(10 μmol/L)各0.8 μL，ddH2O 6.4 μL。反应条件：95 ℃预变性5 min；95 ℃ 30 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40个循环。每份样品均设3个重复孔，采用2-ΔΔCt法计算血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相对表达水平。

表1 qPCR引物序列

2 结 果

2.1良性肿瘤组与恶性肿瘤组血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相对表达水平比较 恶性肿瘤组血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相对表达水平高于良性肿瘤组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 良性肿瘤组与恶性肿瘤组血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相对表达水平比较

2.2恶性卵巢囊性病变患者血清Cyr61 mRNA与Angptl4 mRNA的相关性 Pearson相关分析结果显示，恶性卵巢囊性病变患者血清Cyr61 mRNA与Angptl4 mRNA呈正相关(r=0.612，P<0.05)。见图1。

图1 恶性卵巢囊性病变患者血清Cyr61 mRNA与Angptl4 mRNA的相关性散点图

2.3血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA与恶性卵巢囊性病变患者临床病理参数的关系 根据恶性卵巢囊性病变患者血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相对表达水平平均值(1.52、1.62)，将患者分为Cyr61 mRNA低表达组(36例)、高表达组(38例)，Angptl4 mRNA低表达组(39例)、高表达组(35例)。恶性卵巢囊性病变患者血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA与年龄、肿瘤最大径、癌组织分型无关(P>0.05)，与肿瘤分化程度、FIGO临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。见表3。

表3 血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA与恶性卵巢囊性病变患者临床病理参数的关系[n(%)]

续表3 血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA与恶性卵巢囊性病变患者临床病理参数的关系[n(%)]

2.4血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA对良恶性卵巢囊性病变的鉴别诊断价值 以血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA为检验变量绘制ROC曲线，结果显示，血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA单独检测鉴别诊断良恶性卵巢囊性病变的曲线下面积(AUC)分别为0.849(95%CI:0.790～0.908)、0.893(95%CI:0.841～0.946)，最佳临界值分别为1.278、1.358，特异度分别为78.0%、81.7%，灵敏度分别为78.4%、87.8%。血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA联合检测鉴别诊断良恶性卵巢囊性病变的AUC为0.921(95%CI:0.876～0.966)，特异度为91.5%，灵敏度为85.1%。见图2。

图2 血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA对良恶性卵巢囊性病变鉴别诊断的ROC曲线

2.5影响恶性卵巢囊性病变发生的多因素Logistic回归分析 将是否发生恶性卵巢囊性病变作为因变量，以血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA、肿瘤分化程度、FIGO临床分期、淋巴结转移作为自变量进行多因素Logistic回归分析，结果显示，血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA、FIGO临床分期是影响恶性卵巢囊性病变发生的独立危险因素(P<0.05)。见表4。

表4 影响恶性卵巢囊性病变发生的多因素Logistic回归分析结果

3 讨 论

卵巢囊性病变是发生在各个年龄阶段的女性常见生殖系统疾病，若不能及时治疗，会出现多种严重的并发症，同时还会对患者生殖功能及体内激素水平造成影响，严重影响女性的生殖健康及生活质量[7-9]。目前，卵巢囊性病变检查主要采用常规超声，但其检查只能表明卵巢上有异常的包块出现，无法说明包块的具体性质，且该检查方式受操作医生专业水平等多种因素影响[10-11]。因此，临床上缺乏鉴别诊断卵巢囊性病变良恶性的有效指标。

Cyr61是一种富含半胱氨酸的分泌性肝素连接蛋白，可与多种调节细胞功能及信号传导通路的分子相互作用，进而参与细胞分化、增殖和血管生成，最终在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用[12-14]。本研究结果显示，恶性肿瘤组患者血清Cyr61 mRNA的相对表达水平高于良性肿瘤组，与孟春艳等[15]及ZHANG等[16]研究结果中的表达趋势一致。血清Cyr61 mRNA与肿瘤分化程度、FIGO临床分期、淋巴结转移有关，且血清Cyr61 mRNA是影响恶性卵巢囊性病变发生的独立危险因素，提示血清Cyr61 mRNA可能通过高表达在恶性卵巢囊性病变中发挥重要作用，推测原因是血清Cyr61 mRNA的相对表达水平升高后，与体内不同因子相互作用，使血清Cyr61 mRNA在细胞环境中发挥生物效应，进而参与血管生成及恶性肿瘤细胞的增殖、迁移等进程。此外，ROC曲线分析结果显示，血清Cyr61 mRNA对良恶性卵巢囊性病变有一定的鉴别诊断价值，其AUC为0.849，特异度、灵敏度分别为78.0%、78.4%。表明血清Cyr61 mRNA相对表达水平的异常升高对恶性卵巢囊性病变的发生有一定提示作用，但其特异度、灵敏度均相对较低，需与其他指标联合使用。

Angptl4主要在脂肪组织及肝脏中表达，它是一种在代谢综合征及糖尿病等疾病发病机制中发挥重要作用的脂肪因子，对糖脂代谢的作用是其研究热点[17-18]。近年研究表明，Angptl4参与上皮细胞分化，通过激活某些信号通路，在肿瘤细胞增殖和转移中起着重要作用[19]。CONWAY等[20]研究表明，PRSS21/testisin可通过拮抗Angptl4来抑制卵巢肿瘤的转移。本研究结果显示，恶性肿瘤组血清Angptl4 mRNA的相对表达水平高于良性肿瘤组，血清Angptl4 mRNA是影响恶性卵巢囊性病变发生的独立危险因素，且血清Angptl4 mRNA与肿瘤分化程度、FIGO临床分期、淋巴结转移有关。提示Angptl4可能不仅参与恶性卵巢囊性病变的发生、发展，还与其肿瘤侵袭、转移等密切相关，Angptl4可能是通过与细胞因子结合，进而激活其下游相关信号通路，进一步促进肿瘤细胞的增殖和转移，加速患者病情进展。ROC曲线分析结果显示，血清Angptl4 mRNA对良恶性卵巢囊性病变有较高的鉴别诊断价值，其AUC为0.893，特异度和灵敏度分别为81.7%、87.8%，均高于血清Cyr61 mRNA，而血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA联合检测后的鉴别诊断价值高于其单独检测，表明血清Angptl4 mRNA的异常升高可对卵巢囊性病变由良性转为恶性有重要提示作用，且血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA联合检测鉴别诊断价值更高。但卵巢囊性病变是一个多基因、多因素共同参与的复杂过程，血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA在其发病机制中的具体作用，仍需进一步扩大样本量深入研究。

综上所述，血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA对卵巢囊性病变的良恶性均有一定的鉴别诊断价值。