31例克氏综合征患者核型、睾丸体积及生殖激素水平分析

马一婧，詹福寿，万 艳，宋旭梅，王国萍，闫 昕

（1.宁夏医科大学总医院医学实验中心，银川 750004；2.中国人民解放军联勤保障部队第九四二医院，银川 750004）

克氏综合征（klinefelter syndrome，KFS）早在70多年前就被发现，是常见的性染色体疾病，男性新生儿中发病率约为1/500，占不育患者3%以上，其中占男性无精子症比例高达11%[1-2]。KFS被确诊的三个主要时期是出生前、儿童期和青春期，不同时期患者均需行染色体核型分析（karyotyping）确诊[3]。但由于许多患者仍然被误诊或未被确诊，它仍将继续构成重大的诊断挑战。事实上，只有25%的KFS患者被准确诊断，而这些诊断大多是在成年后才得出的。KFS的典型特征包括睾丸小、不育、性腺功能亢进、性腺功能减退和认知障碍等。

1 资料与方法

1.1 临床资料

收集2015年8月至2017年6月在宁夏医科大学总医院生殖医学中心就诊的男性患者31例，经静脉血染色体核型分析确诊为KFS，年龄21～31岁。31例患者多以不育、无精、第二性征不发育或发育不良来就诊，均表现出体毛、腋毛稀少，胡须稀少或无、喉结不明显。随机选择同期10例健康男性为对照组，年龄22～33岁。询问KFS患者家族史、遗传病、生育史、接触史等。对照组纳入标准为：有正常生育史、计划生育二胎的且染色体核型正常、精子密度＞20×106/mL。

1.2 方法

1.2.1 细胞遗传学染色体核型分析 将两组人群的外周血接种于人体外周血淋巴细胞培养基中，在（37±0.5）℃培养箱内培养66～72 h，培养终止前在培养基中加入秋水仙素（终浓度为0.1～0.5μg·mL-1），（37±0.5）℃培养箱中处理1～3 h。常规收获细胞。标本按常规制片，G显带处理，常规计数20个细胞（嵌合体计数100个细胞）。选取其中5个核型进行分析并作出诊断结果。

1.2.2 睾丸体积测量 应用LOGIQ P3彩色超声机，嘱检查者仰卧位，阴囊探头涂藕合剂，探查双侧睾丸，测量纵切面最大径上下径，左右径及横切面前后径，记录各个径线值（cm）。按照Lambert公式（体积=睾丸上下径×左右径×前后径×0.71）算出睾丸体积（mL），计算机进行统计处理[4]。

1.2.3 生殖激素水平分析 清晨空腹抽取外周静脉血3～5 mL，待自然凝固后分离血清，采用罗氏Cobas E601电化学发光仪及其配套试剂测定血清黄体生成激素（LH）、卵泡生成激素（FSH）、雌二醇（E2）、睾酮（T）和催乳激素（PROL）。各指标生物参考区间：LH为1.50～18.10 mIU·mL-1；FSH为1.40～9.30 mIU·mL-1；E2为0～39.80 pg·mL-1；T为241.00～827.00 ng·mL-1；PROL为2.10～17.70 ng·mL-1。

1.3 统计学方法

数据采用SPSS 19.0软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验，睾丸体积与生殖激素的相关性采用Pearson分析，P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 染色体核型分析结果

31例KFS患者中1例核型为47，XXY[41]/46，XY[59]，其余30例核型均为47，XXY。

2.2 两组年龄、身高、体质量、睾丸体积对比

KFS组年龄与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；KFS组身高与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；KFS组体质量与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；KFS组睾丸体积低于对照组，两组比较差异有统计学意义（P＜0.01），见表1。

2.3 两组生殖激素水平检测

KFS组生殖激素FSH、LH水平高于对照组，T水平低于对照组，两组比较差异有统计学意义（P均＜0.001）。两组之间PROL、E2比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表1 KFS组与对照组年龄、身高、体重、睾丸体积对比

表2 KFS组与对照组血清性激素水平对比

2.4 睾丸体积与生殖激素的相关分析

KFS组左、右侧睾丸体积与FSH、LH值呈负相关（P均＜0.05），与T值无相关性（P＞0.05），见表3。

表3 睾丸体积与生殖激素的相关性分析

3 讨论

KFS患者染色体核型共有30余种，其中大多数患者的核型为47，XXY，占全部病例的80%。非典型染色体核型包括48，XXXY、49，XXXXY及嵌合型46，XY/47，XXY、46，XX/47，XXY等[5]。早期减数分裂中的错误事件可能是导致男性不育的重要因素。减数分裂时染色体不正确的分离可能导致产生不平衡的精子或卵母细胞。如果这些配子参与受精，结果胚胎是非整倍体的，即染色体太多（三体）或过少（单体）。一般认为，KFS是由于患者双亲之一在生殖细胞减数分裂过程中或在胚胎细胞有丝分裂早期染色体不分离所造成[6]，而绝大多数是由于母方卵细胞发生时X染色体的不分离造成的。X染色体着丝粒区a2卫星DNA过多的重组可能是造成X染色体不分离的重要原因之一[7]。KFS患者的临床表现为身材高大，睾丸小而硬，阴茎正常或短小，阴毛偏少，性功能低下，生精小管发育不全，无精子症或无精液症和血清促性腺激素水平（FSH、LH）升高[8-10]。本研究结果显示KFS患者睾丸体积低于正常男性对照组。这可能与其染色体核型组成中增加了一条X染色体而产生的剂量效应有关，因此，染色体核型组成中X染色体的数目越多，智力低下发生率越高，障碍程度越严重，男性化障碍程度也越明显，并发畸形率也就越高[11]。同样，在嵌合体中正常核型所占比例越多，其症状越轻。

睾丸是产生精子和合成性激素的重要器官，其主要由生精细胞、支持细胞、间质细胞等组成。各类细胞在下丘脑-垂体-睾丸轴的严格调节和控制下发挥相应作用，如果睾丸内的细胞成分发生改变，将会影响到睾丸的体积和生殖激素水平，并反馈引起下丘脑、垂体的调控失衡[12]。汪明等[13]研究认为KFS患者血清性激素存在明显的“两高一低”现象，即FSH和LH水平升高，T水平降低。本研究结果显示：KFS组生殖激素FSH、LH水平明显高于对照组，T水平低于对照组，与上述研究结果完全一致。此外，睾酮水平不依赖于睾丸体积，睾丸体积无论大小如何，由于睾丸间质细胞功能的保存，睾酮的平均浓度可为正常。睾丸体积较小的男性体内的睾酮水平与睾丸体积较大的男性相当，这可能是由于FSH和LH水平的增加。因为睾酮是由间质细胞合成，分泌主要用于抑制和调控FSH和LH的激素。FSH有促进精子成熟的作用，LH能促使睾丸间质细胞增生，促进生精上皮的发育和精子的生成[14]。

血清生殖激素水平的检测可作为KFS患者的初筛指标之一，而细胞遗传学检查即染色体核型分析是最终的确诊指标。近年来，对于血清抑制素B的研究较多，受到临床广泛的关注，在生精细胞存在的前提下，成年男性血清抑制素B维持在一定水平，因而能较特异性的反映睾丸生精能力[15]，除此之外，像苗勒氏管激素、瘦素等一些新的激素指标也可预测睾丸的生精功能。通过对患者的临床表现、病史、激素水平、睾丸体积、染色体核型分析、AZF检测等综合性评估，才能更准确地确诊无精的类型，从而判断是否可通过睾丸穿刺术获得精子，而对于严重少弱精症的极少数患者来讲，体外受精－胚胎移植（IVF-ET）及其衍生技术的发展使其生育成为可能[16]。