乳腺癌患者癌组织中lincRNA-ROR的表达变化及临床意义分析

张晓申 唐炜 郑文博 潘凌霄 高进 陈伦

【摘要】 目的：探討乳腺癌患者癌组织中lincRNA-ROR的表达变化及临床意义。方法：选取2018年5月-2019年5月本院收治的乳腺癌患者160例为研究组，选取同时间段在本院接受检查的正常人群160例为对照组。比较两组血清中lincRNA-ROR表达情况，研究组癌组织、癌旁正常组织中lincRNA-ROR表达情况。分析乳腺癌患者血清中lincRNA-ROR表达情况与临床特征的关系。结果：治疗前，研究组血清中lincRNA-ROR水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后，两组lincRNA-ROR水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）。研究组癌组织中lincRNA-ROR水平为（2.2±0.8），癌旁正常组织中lincRNA-ROR水平为（0.8±0.2），研究组癌组织中lincRNA-ROR水平高于癌旁正常组织（P<0.05）。乳腺癌患者血清中lincRNA-ROR水平升高与患者年龄、肿瘤TNM分期、人表皮生长因子受体-2（HER2）、细胞增殖指数（Ki-67）无关（P>0.05），与淋巴结转移、PR、ER有关（P<0.05）。结论：乳腺癌检查中，lincRNA-ROR在乳腺癌患者血清中的水平明显升高，癌组织中的LincRNA-ROR水平显著高于癌旁正常组织，且lincRNA-ROR水平与PR、ER受体的状态、淋巴结转移情况存在明显的关系，可以将lincRNA-ROR作为乳腺癌诊断中的潜在分子标记物。

【关键词】 乳腺癌 癌组织 lincRNA-ROR 表达变化 临床意义

Expression Changes of lincRNA-ROR in Breast Cancer and Its Clinical Significance/ZHANG Xiaoshen， TANG Wei， ZHENG Wenbo， PAN Lingxiao， GAO Jin， CHEN Lun. //Medical Innovation of China， 2021， 18（01）： 0-066

[Abstract] Objective： To explore the expression changes and clinical significance of lincRNA-ROR in breast cancer patients. Method： A total of 160 cases of breast cancer patients admitted to our hospital from May 2018 to May 2019 were selected as the study group， and 160 cases of normal people who were examined in our hospital during the same period were selected as the control group. The expression of lincRNA-ROR in serum of the two groups was compared， and the expression of lincRNA-ROR in cancer tissues and adjacent normal tissues of the study group was compared， the relationship between the expression of lincRNA-ROR in serum and clinical features of breast cancer patients was analyzed. Result： Before treatment， the serum level of lincRNA-ROR in the study group was higher than that in the control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. After treatment， there was no statistically significant difference in the lincRNA-ROR level between the two groups （P>0.05）. The lincRNA-ROR level in the cancer tissues of the study group was （2.2±0.8）， and that in the adjacent normal tissues was （0.8±0.2）， the lincRNA-ROR level in the cancer tissues of the study group was higher than that in the adjacent normal tissues （P<0.05）. The serum level of lincRNA-ROR in breast cancer patients was not correlated with age， TNM stage， human epidermal growth factor receptor-2 （HER2）， and cell proliferation index （ki-67） （P>0.05）， but was correlated with lymph node metastasis， PR， and ER （P<0.05）. Conclusion： During breast cancer examination， the level of lincRNA-ROR in serum of breast cancer patients was significantly increased， and the level of lincRNA-ROR in cancer tissues was significantly higher than that in adjacent normal tissues， and lincRNA-ROR was significantly correlated with the status of PR， ER receptor and lymph node metastasis， so lincRNA-ROR could be used as a potential molecular marker in breast cancer diagnosis.

[Key words] Breast cancer Cancer tissue lincRNA-ROR Expression changes Clinical significance

First-authors address： The First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University， Guangzhou 510120， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.01.016

乳腺癌是临床女性最常见的恶性肿瘤，近几年，该恶性肿瘤的发生率明显升高[1]。虽然乳腺癌的分子发生机制、早期诊断、治疗均有了很大的提升，但是发病5年内依然有30%～40%的患者会发生复发与转移，且侵袭、转移是导致患者复发、死亡的主要因素[2]。因此，对乳腺癌侵袭、转移机制进行分析对降低患者致死率、提高治疗成功率非常重要。近几年，临床研究发现，lincRNA异常表达与乳腺癌等其他恶性肿瘤的发生、发展存在紧密的联系，其可以通过多种途径对乳腺癌细胞生长、繁殖、凋亡、侵袭、转移进程造成影响[3]。随着更深入的研究发现，lincRNA在多种生物学进程中发挥着关键性作用，比如蛋白质翻译、转录后调节、基因转录、染色质重塑等[4]。当前临床上关于这方面的研究还比较少。此次研究的目的是探讨乳腺癌患者癌组织中lincRNA-ROR的表达变化及临床意义，以便可以为临床诊断、治疗乳腺癌患者提供一定的参考价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年5月-2019年5月本院收治的乳腺癌患者160例为研究组，选取同时间段在本院接受检查的正常人群160例为对照组。纳入标准：（1）研究组均符合乳腺癌相关诊断标准;（2）均为非妊娠女性，年龄18～69岁;（3）术前穿刺活检确诊;（4）心电图检查无异常，心脏彩色超声检查心臟射血分数大于65%，平常活动不受限制，日常活动不会引发心绞痛、呼吸困难、心悸、疲乏;（5）均可以耐受治疗;（6）意识清楚，可以理解讲解的内容;（7）对照组人群经临床检查一切正常。排除标准：（1）合并有急性创伤或者是急性疾病者;（2）合并有其他恶性肿瘤疾病者;（3）心肝肾受到严重的损伤者。研究对象均知情研究，研究得到医院伦理委员会审批并在其监督下进行。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 两组均采集空腹静脉血5 mL，离心分离取血清后放置保存备用。研究组患者手术切除的新鲜癌组织、癌旁正常组织各40例份放置到液氮中冷冻并保存备用。

1.2.2 主要的试剂、设备 血清RNA提取试剂盒由北京百泰克公司生产提供（bioteke）;扩增试剂盒（SYBR R Premix Ex TaqⅡ， TaKaRa）由大连宝生物公司生产提供;逆转录试剂盒（PrimeScriptTMRTⅡ， TaKaRa）由大连宝生物公司生产提供;PCR引物由上海生工生物公司生产提供;紫外分光光度计（UV-2450）由日本岛津公司生产提供;电泳仪（XH600）由上海昕慧公司生产提供;荧光定量PCR仪器（ABI7500 Fast， ABI）由美国公司生产提供;凝胶成像仪（Gel Doc XR+， Bio-Rad）由美国公司生产提供。

1.2.3 总RNA的提取与cDNA合成 使用RNA提取试剂盒对血清中的总RNA进行提取，使用gDNA Eraser对基因组DNA去除，提取后的RNA使用紫外分光光度计进行纯度、浓度检测，对A260/A280值进行计算;同时使用琼脂糖凝胶电泳对RNA的完整性进行检测。使用逆转录试剂盒根据37 ℃（15 min）、85 ℃（5 s）、4 ℃（1 min）进行反应，将获得的cDNA放置到-20 ℃条件下保存。所有的操作均按照说明书严格执行。

1.2.4 内参的选择与引物的设计 根据文献[5]设计引物，选择β-actin作为内参。lincRNA-ROR引物、β-actin内参通过BLAST比对（上海生工生物公司生产提供）。引物序列见表1。

1.2.5 lincRNA-ROR水平检测 使用荧光定量PCR仪对每个SYBR（R） Green（扩增循环后）荧光信号水平进行检测，共有20 μL反应体系，其中50×0.4 μL的ROXReference Dye，6 μL的RNase Free ddH2O，2 μL的cDNA溶液（RT产物），

0.8 μL的PCR Reverse Primer（10 μM），0.8 μL的PCR Forward Primer（10 μM），2×10 μL的SYBR（R） Premix Ex TaqTMⅡ;先95 ℃下预变性30 s，共进行40个循环反应：95 ℃（5 s）、60 ℃（34 s），通过溶解曲线对扩增产物的纯度进行检测。获得CT值并分析，得到lincRNA-ROR水平[6]。

1.3 观察指标 （1）比较两组血清中lincRNA-ROR表达情况[7]。（2）比较研究组癌组织、癌旁正常组织中lincRNA-ROR表达情况[8]。（3）分析乳腺癌患者血清中lincRNA-ROR表达情况与临床特征的关系[9]。

1.4 统计学处理 采用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 对照组160例，年龄19～68岁，平均（60.7±2.2）岁。研究组160例，年龄18～69岁，平均年龄（60.3±2.3）岁;其中黏液癌6例、非特殊类型浸润性乳腺癌4例、导管内癌9例、乳腺浸润导管癌141例;早期检查肿瘤直径<3 cm，且早期患者73例，中晚期患者87例。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 两组血清中lincRNA-ROR表达情况对比 治疗前，研究组血清中lincRNA-ROR水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后，两组lincRNA-ROR水平比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

2.3 研究组癌组织、癌旁正常组织中lincRNA-ROR表达情况对比 研究组癌组织中lincRNA-ROR水平为（2.2±0.8），癌旁正常组织中lincRNA-ROR水平为（0.8±0.2），研究组癌组织中lincRNA-ROR水平高于癌旁正常组织（P<0.05）。

2.4 乳腺癌患者血清中lincRNA-ROR表达情况与临床特征的关系分析 乳腺癌患者血清中lincRNA-ROR水平升高与患者年龄、肿瘤TNM分期、人表皮生長因子受体-2（HER2）、细胞增殖指数（Ki-67）无关（P>0.05），与淋巴结转移、PR、ER有关（P<0.05），见表3。

3 讨论

乳腺癌是临床常见的肿瘤，发生率逐渐升高。有关统计显示，我国乳腺癌发生率较高，且该疾病是导致女性死亡的主要疾病[10]。乳腺癌治疗后复发、转移是导致死亡的主要因素，且转移死亡率高于复发患者。因此，寻找有效的指标尽早诊治非常重要。当前肿瘤发展、发生机制研究已经从RNA基因着手，研究证实多种非编码RNA与各种肿瘤的发生、发展存在紧密的联系[11]。随着研究的不断深入，lincRNA已经成为临床研究的重点。

近几年，临床研究发现，lincRNA的生物学功能较多，其表达异常与肿瘤发生、发展、转移、侵袭之间存在紧密的联系[12]。通过荧光定量逆转录PCR法对乳腺癌与正常人群血清中的lincRNA-ROR水平进行检测发现，乳腺癌患者中lincRNA-ROR水平明显升高，可能会成为乳腺癌早期诊断分子标记物，临床价值较高[13]。

当前有研究发现，lincRNA-ROR与胚胎干细胞分化、特性维持之间联系紧密，在诱导多种细胞形成、转换、促使氧化应激反应发生、DNA损伤中发挥着关键性作用，且在肝癌、乳腺癌患者血清、组织中存在水平升高现象[14]。本次研究显示，治疗前研究组血清中lincRNA-ROR水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），治疗后两组lincRNA-ROR水平比较，差异无统计学意义（P>0.05），说明血清中lincRNA-ROR水平升高、癌组织中lincRNA-ROR水平升高是乳腺癌患者的重要特征，可以将其作为潜在诊断乳腺癌的分子标记物。

最新的研究显示，激素受体中PR、ER在乳腺癌细胞生长、增殖、分化期间发挥着一定的调控作用，乳腺癌的发生、预后与激素受体情况之间存在紧密的联系[15]。此次研究显示，乳腺癌患者血清中lincRNA-ROR水平升高与患者年龄、肿瘤TNM分期、人表皮生长因子受体-2（HER2）、细胞增殖指数（Ki-67）无关（P>0.05），与淋巴结转移、PR、ER有关（P<0.05），这与其他学者的研究结果基本相同，说明lincRNA-ROR水平与乳腺癌的发生发展存在紧密的联系。且lincRNA-ROR水平与淋巴结转移、PR、ER存在关系，淋巴结发生转移的患者，lincRNA-ROR水平更高，患者发生乳腺癌后PR、ER等激素水平发生异常也导致了lincRNA-ROR水平升高。

lincRNA水平异常与恶性肿瘤的生长、繁殖、散播、侵袭、预后均有关系。有关研究显示，lincRNA-ROR在细胞生长、分化、发育、代谢期间均发挥着生物学调节作用，在肿瘤发生、发展进程中发挥着癌基因或者是抑癌基因生物学特性，在乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌、肝癌组织、细胞系中均存在水平异常升高现象，但是在胶质瘤组织、细胞系中均存在水平降低现象[16]。有学者对其进行研究发现，lincRNA-ROR的水平与乳腺癌疾病情况有很大的关系，沉默的lincRNA-ROR可以对肿瘤细胞的生长进行抑制，也可以对癌细胞的转移进行抑制，同时可以通过调控miR-145、miR-205等对细胞的生长、分化、发育、代谢造成影响[17]。

核酸可以在人体外周循环中稳定表达，以lincRNA为代表的核酸可以作为乳腺癌最新诊断因子[18]。有研究显示，外周血中的lincRNA-ROR水平可以对乳腺癌患者体内的肿瘤情况进行动态监测与反应，而水平显著升高可以作为肿瘤转移、患者死亡的独立预测因子[19]。lincRNA-ROR可以通过沉默的miR-34a来抑制吉西他滨诱导乳腺癌肿瘤细胞自我吞噬、凋亡机制;lincRNA-ROR水平升高会使乳腺癌化疗耐受发生，是乳腺癌多重耐药的重要标志物[20]。此次研究显示，研究组癌组织中lincRNA-ROR水平为（2.2±0.8），癌旁正常组织中lincRNA-ROR水平为（0.8±0.2），研究组癌组织中lincRNA-ROR水平高于癌旁正常组织（P<0.05），说明发生乳腺癌后，患者的血清、癌组织中均有lincRNA-ROR水平升高现象。而术后患者的lincRNA-ROR水平显著降低，说明通过lincRNA-ROR水平可以动态的反映乳腺癌患者体内肿瘤情况，血清lincRNA-ROR水平也可以作为评估最终治疗效果、疾病复发的重要因子，更有利于为临床治疗提供一定的指导价值。

此次研究中，笔者发现乳腺癌患者血清、癌组织中均有lincRNA-ROR水平升高现象，且通过lincRNA-ROR水平可以为临床早期诊断乳腺癌、最终治疗效果提供一定的参考价值。但lincRNA-ROR作为一种新型的早期乳腺癌诊断、潜在治疗标志物，具体价值还需要临床进一步进行研究证实，故在今后的研究中，笔者会进行进一步的探索，为临床提供更准确的有用信息。

综上所述，乳腺癌检查中，lincRNA-ROR在乳腺癌患者血清中的水平明显升高，癌组织中的lincRNA-ROR水平显著高于癌旁正常组织，且lincRNA-ROR水平与PR、ER受体的状态、淋巴结转移情况存在明显的关系，可以将lincRNA-ROR作为乳腺癌诊断中的潜在分子标记物。

参考文献

[1]张凯，陈然，罗智辉，等.乳腺癌患者新辅助化疗前后Ki-67、Tau表达水平与化疗效果的关系分析[J].中国医学创新，2019，16（22）：63-66.

[2]吴钧，余丽莉，王晓明，等.血浆长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1在乳腺癌中的表达及其临床意义[J].中华检验医学杂志，2018，41（2）：92-96.

[3]何悦，夏明智，胡小波，等.乳腺癌组织微小RNA-191、性别决定区高迁移率组盒4mRNA的表达观察[J].山东医药，2019，59（27）：1-4.

[4] Karuturi M S，Holmes H M，Lei X，et al.Potentially inappropriate medication use in elderly breast cancer patients[J].Drugs and Aging，2018，23（10）：823-837.

[5]高志强，汪俊峰，陈德华，等.乳腺癌耐药蛋白基因在肝癌组织的表达的临床意义及抑制其表达对肝癌细胞增殖凋亡的影响[J].中华实验外科杂志，2018，35（4）：748-751.

[6]袁鲲，谭鑫，吴芳兰，等.鞘氨醇激酶1在乳腺癌骨髓中的表达及临床意义[J].中国现代医学杂志，2019，29（19）：39-42.

[7]刘少杰，陈腾腾，陈晓越，等.R-脊椎蛋白1表达与Wnt/β-catenin信号通路在乳腺癌中的相关性及临床意义[J].实用医学杂志，2019，35（16）：2579-2583.

[8] Bai X Y，Li S，Wang M，et al.Krüppel-like factor 9 down-regulates matrix metalloproteinase 9 transcription and suppresses human breast cancer invasion[J].Cancer Letters，2018，412（2）：224-235.

[9]朱长明，王涛，高华，等.长链非编码RNA-重编程调节因子在胃癌中的表达及生物学功能[J].中华实验外科杂志，2019，36（3）：411-413.

[10]彭湃，韩运涛，邬攀，等.CD97和CD55在三阴性乳腺癌中的表达及其临床意义[J].中国现代医学杂志，2019，29（22）：18-22.

[11]苗玉，张欣，邢荣格，等.乳腺癌组织INPP4B与β-catenin表达临床意义[J].中华肿瘤防治杂志，2018，25（12）：866-871.

[12] Kasoha M，Unger C，Solomayer E F，et al.Prostate-specific membrane antigen （PSMA） expression in breast cancer and its metastases[J].Clin Exp Metastasis，2017，34（8）：479-490.

[13]黄飞翔，向廷秀，任国胜，等.驱动蛋白KIF18B对ER+乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其临床意义[J].第三军医大学学报，2019，41（18）：1738-1743.

[14]易红，龙汉安，王舰梅，等.浸润性乳腺癌组织人DOC2/DAB2相互作用蛋白的表达变化及其意义[J].山东医药，2019，59（18）：81-83.

[15]涂晓丽，文荃，闫军，等.HBV+肝细胞癌患者lncRNA-mRNA共表达网络分析及作用[J].第三军医大学学报，2018，40（1）：37-44.

[16] Friedrich M，Reichert K，Woeste A，et al.Effects of Combined Treatment with Vitamin D and COX2 Inhibitors on Breast Cancer Cell Lines[J].Anticancer Research，2018，38（2）：1201-1207.

[17]雷珊，曾智銳，薛燕，等.LINC00152在胰腺癌中的表达及临床意义[J].实用医学杂志，2019，35（9）：1429-1432.

[18]程元甲，张爽，张虹，等.AJCC第8版乳腺癌预后分期系统在三阴型乳腺癌预后评价中的临床意义[J].中华外科杂志，2019，57（4）：299-304.

[19]张志丽，刘青德，张煦，等.长链非编码RNAlinc00152在乳腺癌中的表达及其与淋巴结转移的关系[J].中华实验外科杂志，2019，36（3）：565-566.

[20] Roswall P，Bocci M，Bartoschek M，et al.Microenvironmental control of breast cancer subtype elicited through paracrine platelet-derived growth factor-CC signaling[J].Nature Medicine，2018，24（4）：463-473.

（收稿日期：2020-05-12） （本文编辑：姬思雨）