“消痘灵”口崩片的处方优化及内外合治药效研究

李泽福，曹凤媚，胡等慧

1.广州中医药大学 第三附属医院，广东 广州 510378；2.北京中医药大学，北京 102488

“消痘灵”水煎液是广州中医药大学第三附属医院的院内制剂，主要由金银花、黄柏、丹参、当归、三颗针等中药组成。该方具有清热燥湿、泻火解毒、养血活血之功效，临床上主要用于治疗痤疮等症，其有效率高达70%左右。现代药理研究表明，方中主药金银花不仅在体外对多种细菌具有明显的抑制作用，而且还能预防再次感染；黄柏、三颗针对病毒有不同程度的抑制作用；丹参中丹参酮能明显抑制皮脂腺的分泌，且对痤疮丙酸杆菌高度敏感；当归能够通过对毛孔的收敛作用及对血管细胞活性的提升机制综合改善皮肤质量，达到对痤疮治疗的目的[1-5]。

“消痘灵”水煎液治疗痤疮具有很好的疗效，但存在携带、储存不便，易霉变，患者耐受性差等缺点。相比于水煎液而言，口崩片作为一种新型速释制剂，具有易储存、易运输及携带、服用方便、口感好、稳定等优点。同时，结合中医“内治治本，外治治标”的理念，口服口崩片结合皮肤擦涂同时给药，能够实现中医“内外同治”增强疗效的目的。因此，本研究筛选“消痘灵”口崩片的处方，考察其内外合治的药效及抑菌能力，以期为医院制剂的创新及临床治疗提供研究思路。

1 材料

1.1 仪器

ZP33型旋转式压片机(海信源制药机械有限公司)；FA2004型分析天平(上海双旭电子科技有限公司)；FT104B型休止角测定仪(宁波海曙瑞柯仪器有限公司)；SY-6D型片剂四用测试仪(上海圣科仪器设备有限公司)。

1.2 试药

羧甲基纤维素钠(CMC-Na，批号：171008)、交联聚维酮XL(PVPP-XL，批号：141006)、羧甲基淀粉钠(CMS-Na，批号：171204)、低取代羟丙基纤维素(L-HPC，批号：161003)均购自安徽山河药用辅料股份有限公司；微晶纤维素(上海昌为医药辅料技术有限公司，批号：P0101F1510)；微粉硅胶(批号：171110)、硬脂酸镁(批号：170228)均购自安徽山河药用辅料股份有限公司；山梨醇(批号：170819)、甘露醇(批号：161222)均购自西安天正药用辅料有限公司；金花消痤丸(昆明中药厂有限公司，批号：271257)；中性福尔马林固定液(10%，北京博奥拓达科技有限公司)。

金银花、黄柏、丹参、当归、三颗针等均为市购，经广州中医药大学第三附属医院李泽福主管中药师鉴定均为正品。

1.3 实验动物

SPF级昆明种小鼠，雄性，5周龄，体质量20～25 g[合格证号：SCXK9(粤)2018-0002]购于广东省实验动物中心。审批单位：广州中医药大学第三附属医院，批号：1903009。

2 方法与结果

2.1 口崩片检测方法

2.1.1硬度测定 取5片已制备的“消痘灵”口崩片置于硬度仪中测定，取其平均值记为口崩片硬度[6]。

2.1.2崩解时限的测定 崩解时限测定方法依据《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)2015年版，以口崩片接触水面开始，至全部颗粒通过筛网的时间止[6]。

2.1.3脆碎度测定 片剂脆碎度测定方法依据《中国药典》2015年版，以未检出断裂、龟裂或粉碎片，质量减失未超过1%为合格[6]。

2.2 “消痘灵”口崩片的制备

2.2.1干膏粉的制备 称取处方量中药，80 ℃水提2次，合并水提液并减压浓缩得浸膏，将适量微粉硅胶加入上述浸膏中，真空干燥得干浸膏，粉碎，过100目筛，得干浸膏粉。

2.2.2口崩片的制备 称取上述干浸膏粉及崩解剂、填充剂、微粉硅胶、硬脂酸镁等辅料适量，混匀，过80目筛，粉末直压法压片，控制片剂硬度为4～7 kg。

2.3 单因素考察

2.3.1崩解剂考察 固定干浸膏粉添加量20%，润滑剂微粉硅胶20%、硬脂酸镁0.5%，填充剂微晶纤维素、山梨醇各20%，片剂硬度4～7 kg，考察不同崩解剂对片剂崩解时限的影响。

结果表明，CMC-Na和CMS-Na崩解时限分别为401、323 s，不符合《中国药典》2015年版规定。L-HPC和PVPP-XL崩解时限分别为189、180 s，崩解效果较优，符合《中国药典》2015年版规定。考虑到生产成本，最终选用L-HPC作为崩解剂进行处方筛选。

2.3.2润滑剂考察 固定干浸膏粉添加量20%，填充剂微晶纤维素、山梨醇，崩解剂L-HPC各20%，片剂硬度4～7 kg。考察润滑剂微粉硅胶和硬脂酸镁对粉末流动性、片剂粘冲程度及崩解时限的影响，结果见表1。

表1 不同润滑剂对粉末流动性和崩解时限的影响

结果表明，微粉硅胶和硬脂酸镁两者以一定的比例(4∶1)混合使用时粉末的流动性好，且崩解时限最优。

2.3.3填充剂考察 固定干浸膏粉添加量20%、润滑剂微粉硅胶2%、硬脂酸镁0.5%、崩解剂L-HPC 20%、片剂硬度4～7 kg，考察不同填充剂对崩解时间影响，结果见表2。

表2 不同填充剂对口崩片崩解时限的影响

由表2可知，不同填充剂混合使用的效果明显优于单一填充剂的使用，以山梨醇和微晶纤维素混合作为填充剂时崩解时限为优，尤其以山梨醇-微晶纤维素比例为1∶3和1∶1为优，兼顾口感，微晶纤维素用量过大增强沙砾感，故选择填充剂为山梨醇和微晶纤维素1∶1。

2.4 Box-Behnken响应面法优选“消痘灵”口崩片的成型工艺

2.4.1实验设计及结果 依据前期单因素试验和预试验，设定将药粉用量(A)、崩解剂用量(B)、微粉硅胶和硬脂酸镁用量比(C)为自变量，口崩片综合评分为评价指标，综合评分按公式(1)计算。考察各因素对口崩片成型工艺的影响，见表3～4。

综合评分=外观×20%+硬度×20%+脆碎度×20%+崩解时限×40%

(1)

表4 Box-Behnken响应面法优选制备工艺实验设计及其结果

2.4.2模型拟合 上述数据用Design-Expert软件分析，并以Y对变量进行模型拟合，得二次多项式回归方程：Y=78.80-4.87A-0.12B+4.50C-1.25AB-1.50AC+2.50BC+0.72A2-6.78B2+4.98C2，r=0.991 1。由表5可知，P<0.01，F=87.10，表明模型差异有统计学意义；失拟项P=0.332 95>0.01，失拟项差异无统计学意义，说明该模型拟合度和可信度均有效，误差小，可以用此模型对“消痘灵”口崩片的制备工艺进行分析和预测。

表5 “消痘灵”口崩片处方响应面结果方差分析

2.4.3响应面优化分析 根据拟合方程，采用Design-Expert V8.0.6.1软件绘制各因素指标变化对“消痘灵”口崩片综合评分影响的等高线图和响应面图，见图1～3。

图1 药粉量-崩解剂量对综合评分影响

图2 药粉量-微粉硅胶∶硬脂酸镁比对综合评分影响

图3 崩解剂量-微粉硅胶∶硬脂酸镁比对综合评分影响

从图1～3可以看出，口崩片综合评分与A和C成正比，与B成抛物线。即在一定范围内，随着A和口崩片用量的增加，综合评分随之增加；随着B的增加，综合评分先增大后减小。

2.4.4优化结果 分析回归模型并结合实际情况，“消痘灵”口崩片的最佳制备工艺为药粉量20%、崩解剂量20%、微粉硅胶-硬脂酸镁为4∶1。

2.5 “消痘灵”口崩片的优化制备工艺

按处方量浸膏粉20%、微晶纤维素20%、山梨醇20%、L-HPC 20%、阿斯巴甜0.50%、微粉硅胶2%、硬脂酸镁0.5%，采用粉末直接压片法压片，片剂硬度为4～7 kg、崩解时限45～54 s、脆碎度0.93～0.98，表面浅棕色，光滑，有光泽，酸甜适中，稍有沙砾感，可接受，片质量0.4 g，浸膏质量分数为10%。

2.6 验证实验

按最优处方配比制备3批“消痘灵”口崩片进行验证。结果所得口崩片片形完整，崩解时限、硬度及脆碎度均符合《中国药典》2015年版要求，具体结果见表6。

表6 “消痘灵”口崩片处方验证实验

2.7 药效学研究

2.7.1实验动物分组及给药 24只雄性昆明种小鼠随机分成对照组、阳性对照组、口崩片内治组、口崩片内外合治组共4组。对照组给予等体积0.9%氯化钠溶液，阳性组给予金花消痤丸270 mg·kg-1·d-1，“消痘灵”口崩片内治组给360 mg·kg-1·d-1(取适量药物粉末用蒸馏水配成溶液)、口崩片内外合治组给予“消痘灵”口崩片的同时配合口崩片水溶液擦涂，其中口服给药量同“消痘灵”口崩片内治组，连续给药14 d。

2.7.2测定方法 给药14 d后，小鼠脱颈椎处死，剔除小鼠腹部的被毛，摘取下侧腹部皮脂腺斑组织，放入8～10倍体积的中性福尔马林组织固定液中，苏木素-伊红(HE)染色切片(苏木素染细胞核、伊红染细胞质)，并在显微镜下观测其组织结构。

2.7.3HE染色结果 如图4所示，对照组小鼠的皮脂腺排列疏松、整齐且部分开口于毛囊，结构完整。而病理情况下，皮脂腺会发生相应变化，体积变大而饱满，数量多且排列紧密。本研究根据各给药组皮脂腺变化情况判断，各组病理状态均有所改善，其中“消痘灵”口崩片内外合治组皮脂腺最小、腺体萎缩程度最重，且排列最疏松；然后依次是“消痘灵”口崩片内治组和阳性对照组。

注：A.空白对照组；B.阳性对照组；C.口崩片内治组；D.口崩片内外合治组。

由以上结果可知，口服金花消痤丸在短时间内无法显著改变小鼠的皮脂腺分泌情况，但“消痘灵”口崩片对皮脂腺组织有一定影响，可使皮脂腺发生萎缩，在一定程度上控制皮脂分泌，且内外合治组的效果更优。

2.8 抑菌实验

2.8.1“消痘灵”口崩片水溶液的制备 取一定量口崩片溶于水，配置成不同质量浓度的口崩片水溶液，其水溶液质量浓度由高到底依次为300、275、250、225、200、175、150、130、100、75、50、25 mg·mL-1。

2.8.2“消痘灵”口崩片最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定 取一次性无菌96孔平底微量培养板4个，分别标记为 A、B、C、D，用来实验糠秕马拉色菌、金黄色葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌和表皮葡萄球菌。采用微量移液枪向各板孔中加入相应的微生物培养液100 μL，从药物稀释液管中各取100 μL，按高质量浓度到低质量浓度的顺序加入到12至1号孔，各浓度做3复孔，培养24～48 h。随后每孔吸取各混悬液0.1 mL接种于固体培养基中，于37 ℃再次培养24～48 h，观察各平板是否有菌落产生。

2.8.3MIC及MBC测定结果 “消痘灵”口崩片水溶液对4种致病菌MIC、MBC实验测定结果见表7。

表7 “消痘灵”口崩片的MIC、MBC测定结果 mg·mL-1

3 讨论

痤疮是一种好发于颜面部的慢性炎症性疾病，临床治疗中，与使用抗生素相比，中药不仅能够提高人体免疫力，发挥非特异性抗菌作用，而且耐药性低。本研究通过对主要痤疮致病菌进行抑菌实验研究，证实了中药复方“消痘灵”口崩片能够有效抑制痤疮丙酸杆菌等4种致病菌的生长，对痤疮具有一定的治疗作用，同时也说明，通过粉末直压法制备口崩片的工艺并未破坏抗菌的有效成分，体现出了中药抗菌的独特优势，值得推广使用。

口腔崩解片是近几年来一种新型速释制剂，其制备工艺主要有粉末直压法、喷雾干燥法、湿法制粒压片等。相比较而言，粉末直接压片法制备工艺简单、成本低廉，同时对处方要求高，尤其是对中药提取浸膏来说，较难实现同时满足流动性、可压性和崩解限度。痤疮患者主体为青少年，服用中药汤剂顺应性差，而口崩片不需要水送服，可以在口腔内迅速崩解，效果与口服液/中药汤剂接近，且口感好，有时尚感，便于接受，且稳定性好，便于储存、运输、携带。

内外同治是在中医理论的指导下，通过内服外用达到治疗病症的目的。一般情况下，采用内外合治法，内治可调摄五脏、清热解毒、化痰散结，外治可消肿排脓、通瘀化滞。本实验中，将中药复方水煎液制备成口崩片，除具有一切口崩片内服的优势外，还能快速溶解于水而外用，起到内外同治的作用。口崩片内服能够祛邪外出、培根固本，改变患者“内环境”，达到阴阳平衡；水溶液外涂不仅可以快速在有损害的部位起效，而且无不良反应，能使外出的丘疹、脓疱消退更快。由此可知，中医内外合治疗法治疗痤疮，不影响机体的整体状况，安全性相对较高，使用也将越来越广泛。