CD10、CD133和CD157在胃癌组织中的表达及其临床意义

郑国强，朱献斐

（义乌市中心医院 病理科，浙江 义乌322000）

胃癌是一种常见的恶性肿瘤，好发于老年人。随着人们生活水平的改善及老龄化加剧，胃癌发病率呈上升趋势，严重影响老年人生活质量，威胁其生命安全[1]。胃癌早期症状没有特异性，发病较为隐匿，大部分患者就诊时已处于晚期，失去最佳治疗时机[2]。目前，胃癌发病因素尚未完全明确，其发病是多基因变异积累的过程，是遗传因素和环境因素共同作用的结果[3-4]。寻找合适的肿瘤治疗靶点，对探索新的治疗方法具有重要意义。CD10、CD133 和CD157 作为肿瘤-间质相互作用的参与因子，可调节细胞的生长和分化，导致细胞间信号通路改变，与肿瘤生物学行为关系紧密，具有成为肿瘤药物治疗新靶点的潜力。近年来研究普遍认为，癌组织中CD10、CD133 和CD157 的表达与多种肿瘤的恶性生物学行为和不良预后有关，认为其对恶性肿瘤具有诊断价值[5-6]。目前，尚未见CD10、CD133、CD157 与胃癌的相关性研究。本研究探讨CD10、CD133 和CD157 在胃癌组织中的表达及其临床意义，为临床诊断和治疗提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年3月—2019年3月在义乌市中心医院行手术治疗患者的胃癌组织标本105 例，并取距肿瘤边缘≥5 cm 的正常组织作为癌旁组织。其中，男性67 例，女性38 例；年龄65～83 岁，平均（73.42±6.57）岁；肿瘤直径：＞5 cm 46 例，≤5 cm 59例；肿瘤部位：胃窦73例，贲门-胃底-胃体32例；肿瘤临床分期：Ⅰ期、Ⅱ期32例，Ⅲ期、Ⅳ期73例；浸润深度：T1、T221 例，T3、T484 例；分化程度：低分化68 例，高、中分化37 例；淋巴结转移70 例。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准①所有标本经术后病理学证实；②术前未接受抗肿瘤治疗；③临床资料和随访资料完整。

1.2.2 排除标准①合并其他组织恶性肿瘤；②重要脏器严重异常。

1.3 主要试剂

DAB 显色试剂盒购自北京柏奥泰科技有限公司，生物素标记山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）购自上海联硕生物科技有限公司，CD10 单克隆抗体、CD133 单克隆抗体和CD157 购自上海联硕生物科技有限公司。

1.4 免疫组织化学染色法

采用免疫组织化学染色法测定癌组织和癌旁组织中CD10、CD133 和CD157 蛋白的表达。取石蜡标本切片3 μm，烤片60 min，将标本经二甲苯、梯度乙醇脱蜡至水，枸橼酸钠缓冲液修复。采用3%双氧水处理，PBS 溶液洗涤5 min/次，共3 次。血清封闭30 min 后甩去血清，加入CD10 一抗（1∶200）、CD133 一抗（1∶200）和CD157 一抗（1∶500）4℃过夜；加入生物素标记山羊抗兔IgG 二抗，置于37℃条件下孵育30 min，PBS溶液洗涤3次，5 min/次。采用DAB 试剂盒显色，苏木精复染，切片、脱水、封片后于显微镜下观察。

1.5 结果判定

结果由本院2 位经验丰富的病理科医师以双盲法阅片。评分标准包括染色程度和染色范围（染色细胞占百分比）。染色强度：无染色为0 分，淡黄色为1分，黄褐色为2分，褐色为3分。染色范围：无染色为0 分，≤25%为1 分，＞25%～75%为2 分，＞75%～100%为3 分。最终得分=染色强度×染色范围评分。0～1 分为阴性（-），2 分为弱阳性（+），3～5 分为阳性（++），6～9 分为强阳性（+++）。

1.6 随访

采取门诊复诊、电话、微信、上门等多种方式进行随访，每月随访≥1 次，自患者入院随访至2020年9月30日，以患者死亡作为随访终点事件，计算患者总生存期。总生存期为患者随访开始至任何原因死亡的时间。

1.7 统计学方法

数据分析采用SPSS 25.0 统计软件。计数资料以率（%）表示，比较用χ2检验；采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，比较用Log-rank χ2检验；影响因素的分析用Cox 回归模型，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 癌组织和癌旁组织中CD10、CD133 和CD157蛋白的表达

癌旁组织中CD10、CD133 和CD157 蛋白表达很少。癌组织中CD10 蛋白主要表达于细胞膜中，呈淡黄色、棕黄色颗粒；CD133 蛋白主要表达于细胞膜，呈褐色颗粒；CD157 蛋白主要表达于细胞核和胞浆，呈淡黄色甚至褐色。见图1～3。

图1 CD10蛋白的表达 （免疫组织化学染色×200）

图2 CD133蛋白的表达 （免疫组织化学染色×200）

图3 CD157蛋白的表达 （免疫组织化学染色×200）

2.2 癌组织与癌旁组织中CD10、CD133 和CD157蛋白表达阳性率比较

癌组织与癌旁组织中CD10、CD133 和CD157蛋白表达阳性率比较，经χ2检验，差异均有统计学意义（P＜0.05），癌组织CD10、CD133 和CD157蛋白表达阳性率均高于癌旁组织。见表1。

表1 癌组织与癌旁组织中CD10、CD133和CD157蛋白表达阳性率比较 [n=105，例（%）]

2.3 不同临床病理特征患者的CD10 蛋白表达阳性率比较

不同性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、临床分期、浸润深度和分化程度患者的CD10 蛋白表达阳性率比较，经χ2检验，差异无统计学意义（P＞0.05）；有淋巴结转移与无淋巴结转移患者的CD10 蛋白表达阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），有淋巴结转移患者的CD10 蛋白表达阳性率高于无淋巴结转移患者。见表2。

表2 不同临床病理特征患者的CD10蛋白表达阳性率比较 例（%）

2.4 不同临床病理特征患者的CD133蛋白表达阳性率比较

不同性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、临床分期、浸润深度和分化程度患者的CD133 蛋白表达阳性率比较，经χ2检验，差异无统计学意义（P＞0.05）；有淋巴结转移与无淋巴结转移患者的CD133 蛋白表达阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），有淋巴结转移患者的CD133 蛋白表达阳性率高于无淋巴结转移患者。见表3。

表3 不同临床病理特征患者的CD133蛋白表达阳性率比较 例（%）

2.5 不同临床病理特征患者的CD157蛋白表达阳性率比较

不同性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、临床分期、浸润深度和分化程度患者的CD157 蛋白表达阳性率比较，经χ2检验，差异无统计学意义（P＞0.05）；有淋巴结转移与无淋巴结转移患者的CD157 蛋白表达阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），有淋巴结转移患者的CD157 蛋白表达阳性率高于无淋巴结转移患者。见表4。

2.6 CD10、CD133 和CD157 蛋白表达对患者生存时间的影响

随访至2020年9月30日，中位生存时间35 个月。CD10、CD133 和CD157 蛋白表达阳性患者累积生存率优于蛋白表达阴性患者（χ2=5.271、4.892 和6.719，P=0.016、0.023 和0.003）。见图4～6。

2.7 影响胃癌患者预后的因素

2.7.1 单因素分析各变量赋值情况见表5。经单因素Cox 回归分析，结果显示年龄[=1.783（95% CI：1.324，2.743）]、临床分期[=1.435（95%CI：1.089，2.453）]、浸 润 深 度[=1.682（95% CI：1.197，2.789）]、淋 巴 结 转 移[=2.435（95% CI：1.627，3.829）]、CD10 阳性表达[=1.546（95% CI：1.021，2.109）]、CD133 阳性表达[=1.820（95% CI：1.243，3.256）]和CD157 阳 性 表 达[=2.091（95%CI：1.498，3.791）]是影响胃癌患者预后的因素（P＜0.05）。见表6。

2.7.2 多因素分析以单因素Cox 回归分析中差异有统计学意义的因素为自变量（年龄、临床分期、浸润深度、淋巴结转移、CD10 阳性表达、CD133 阳性表达和CD157 阳性表达）做逐步多因素Cox 回归分析，引入水准为0.05，剔除水准为0.10。结果显示：年龄[=1.628（95% CI：1.218，2.940）]、临床分期[=1.982（95%CI：1.435，3.495）]、浸润深度[=2.653（95%CI：1.782，4.213）]、淋巴结转移[=3.287（95%CI：1.989，5.456）]、CD10 阳性表达[=2.081（95% CI：1.297，3.241）]、CD133 阳性表达[=1.768 （95% CI：1.190，2.879）]和CD157 阳性表达[=2.463（95%CI：1.797，4.165）]是影响胃癌患者预后的独立危险因素。见表7。

表4 不同临床病理特征患者的CD157蛋白表达阳性率比较 例（%）

图4 不同CD10蛋白表达患者的生存曲线

图5 不同CD133蛋白表达患者的生存曲线

图6 不同CD157蛋白表达患者的生存曲线

表5 赋值表

表6 胃癌预后因素的单因素Cox回归分析参数

表7 胃癌预后因素的多因素Cox回归分析参数

3 讨论

胃癌是严重危害人类健康的一种恶性肿瘤，具有较高的发病率和病死率[7]。肿瘤细胞的转移、浸润和生长主要是细胞外基质、间质细胞及肿瘤细胞共同作用的结果[8-9]。而肿瘤的生物学特性主要由抑癌基因和癌基因调控，同时依赖于间质形成的微环境[10-11]。寻找有效的诊断和治疗胃癌的方法尤为重要。

CD10 蛋白作为肿瘤-间质相互作用的一种参与因子，主要与细胞表面糖蛋白金属酶结合，该蛋白具有中性肽链内切酶的功能，并且在肿瘤发生、发展中具有重要作用[12]。CD10 蛋白主要通过调节局部肽浓度，介导细胞对激素产生应答，因此许多肽敏感细胞或激素敏感细胞及相应的肿瘤均表达CD10 抗原[13]。CD10 蛋白能调节细胞的生长和分化，从而改变细胞间的信号通路[14]。本研究结果显示，癌组织中CD10 蛋白表达阳性率高于癌旁组织，由此可见胃癌患者CD10 蛋白高表达；有淋巴结转移患者CD10 蛋白表达阳性率高于无淋巴结转移患者，且淋巴结转移为影响胃癌患者预后的重要因素，因此CD10 蛋白表达与淋巴结转移和预后密切相关。

CD133 是戊聚糖跨膜糖蛋白，相对分子质量为120 000 kD。CD133 蛋白最初被认定为造血干细胞的特异性标志[15]。近年来，有研究发现CD133 的表达与胃肠道肿瘤的临床病理特征及预后有关，且随着CD133 表达升高，肿瘤的淋巴结转移发生率升高，浸润深度加深，分化程度降低[16-17]。缺氧与肿瘤的转移、进展关系密切，其能够通过上皮-间充质转化过程调控关键因子，影响肿瘤进展。CD133可通过促进肿瘤细胞的葡萄糖摄取过程，引起缺氧，诱导缺氧诱导因子1α 的产生，刺激肿瘤血管形成，从而提高肿瘤细胞的侵袭、转移能力。上述机制在肿瘤细胞血管形成及能量代谢过程中均发挥重要作用[18-19]。本研究结果显示，癌组织中CD133 蛋白表达阳性率高于癌旁组织，由此可见胃癌患者CD133 蛋白高表达；有淋巴结转移患者CD133 蛋白表达阳性率高于无淋巴结转移患者，且淋巴结转移为影响胃癌患者预后的重要因素，因此CD133 蛋白表达与淋巴结转移和预后密切相关。

CD157 作为多功能分子，具有胞外酶和细胞受体的双重活性，可与其他跨膜分子相互作用，介导胞内信号转导。有研究显示，CD157 参与卵巢癌、风湿性关节炎等多种疾病的发生、发展[20]。本研究结果显示，癌组织中CD157 蛋白表达阳性率高于癌旁组织，由此可见胃癌患者CD157 蛋白高表达；有淋巴结转移患者CD157 蛋白表达阳性率高于无淋巴结转移患者，且淋巴结转移为影响胃癌患者预后的重要因素，因此CD157 蛋白表达与淋巴结转移和预后密切相关。

综上所述，CD10、CD133 和CD157 在胃癌组织中高表达，且与淋巴结转移和预后密切相关。