羊肚菌母种培养基比较试验

冉永红 马琳静 谢淑琴 张 旦 魏镛频

（1定西市农业科学研究院，甘肃定西 743000；河南省南阳市农业科学院，河南南阳 473002）

羊肚菌（Morchella）是一类名贵的食药用真菌，因其高蛋白、低脂肪，富含氨基酸和维生素，味道鲜美而深受人们欢迎[1]。彭璐等[2]研究表明，新疆天山山脚下葡萄园中采集的羊肚菌分离菌株适宜在黄豆芽-玉米粉-黄豆粉培养基上生长。黄冕等[3]研究表明，胡萝卜和黄豆粉培养基培养尖顶羊肚菌母种，可缩短制种周期，且母种质量好。孟俊龙等[4]人工栽培小羊肚菌试验表明：M2（马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，KH2PO43 g，MgSO40.5 g，杨树根际土25 g，蛋白胨2 g，水1 000 mL）为最佳母种培养基。任爱梅等[5]对采自甘肃省的一株野生羊肚菌进行分离培养试验，结果表明：菌丝在PDA 培养基上生长最快，在综合PDA 培养基上菌落干重最高。杜忠伟等[6]对采自吉林省延边朝鲜族自治州的一株羊肚菌菌株培养结果表明：该菌株菌丝在黄豆芽培养基上生长最好，其次是PDA 培养基。侯军等[7]研究表明，不同的羊肚菌品种（菌株），在不同的培养基上，其菌丝的形态、颜色等各异。为此，笔者进行了11 个母种培养基培养一株六妹羊肚菌（甘肃人工栽培羊肚菌菌株）的比较试验，以期为当地区羊肚菌母种培养基选用提供参考。

1 材料与方法

1.1 供试材料

（1）供试菌株：甘肃省科学院生物研究所保藏的六妹羊肚菌菌株，编号M61。

（2）供试培养基

试验设计了11 个母种培养基配方。配方1：马铃薯50 g，葡萄糖5 g，琼脂5 g，磷酸二氢钾0.25 g，蛋白胨0.25 g；配方2：马铃薯50 g，葡萄糖5 g，琼脂5 g，磷酸二氢钾0.5 g，硫酸镁0.125 g，蛋白胨0.25 g；配方3：马铃薯50 g，葡萄糖5 g，琼脂5 g，木屑12.5 g；配方4：马铃薯50 g，葡萄糖5 g，琼脂5 g，麸皮12.5 g；配方5：葡萄糖5 g，琼脂5 g，磷酸二氢钾0.115 g，磷酸氢二钾0.25 g，硫酸镁0.125 g，蛋白胨0.5 g，酵母粉0.5 g；配方6：葡萄糖5 g，琼脂5 g，磷酸二氢钾0.25 g，蛋白胨0.25 g，酵母粉0.125 g，玉米粉2.5 g；配方7：葡萄糖5 g，琼脂5 g，酵母粉1 g，麦芽膏2.5 g，羊粪粉5 g；配方8：马铃薯25 g，葡萄糖5 g，琼脂5 g，腐殖土25 g；配方9：葡萄糖5 g，琼脂5 g，蛋白胨0.25 g，酵母粉0.125 g，新鲜松针60 g；配方10：苹果50 g，葡萄糖5 g，琼脂5 g，磷酸二氢钾0.25 g，蛋白胨0.25 g；配方11：生梨50 g，葡萄糖5 g，琼脂5 g，磷酸二氢钾0.25 g，蛋白胨0.25 g，纯净水250 mL，pH自然。

培养基配制方法。配方1、配方2、配方3、配方4：马铃薯去皮、切块，各取50 g 分别加纯净水400 mL 煮25 min，用4层纱布过滤，取滤液后对应移至1 号、2 号、3 号、4 号锥形瓶中，加纯净水定容至250 mL，再加入其他组分，用玻璃棒边搅拌边加热，使之完全溶化后待用。配方5：加250 mL 纯净水至5 号锥形瓶中，加入其他组分，用玻璃棒边搅拌边加热，使之完全溶化后待用。配方6：将玉米粉加入400 mL 纯净水煮25 min，用4层纱布过滤，取滤液后移至6号锥形瓶中，加纯净水定容至250 mL，加入其他组分，用玻璃棒边搅拌边加热，使之完全溶化后待用。配方7：将羊粪粉加入400 mL 纯净水煮25 min，用4 层纱布过滤，取滤液后移至7 号锥形瓶中，加纯净水定容至250 mL，加入其他组分，用玻璃棒边搅拌边加热，使之完全溶化后待用。配方8：将腐殖土加入400 mL 纯净水煮25 min，用4 层纱布过滤，取滤液后移至8 号锥形瓶中，加纯净水定容至250 mL，加入其他组分，用玻璃棒边搅拌边加热，使之完全溶化后待用。配方9：将新鲜松针加入400 mL 纯净水煮25 min，用4层纱布过滤，取滤液后移至9号锥形瓶中，加纯净水定容至250 mL，加入其他组分，用玻璃棒边搅拌边加热，使之完全溶化后待用。配方10、配方11：将苹果和梨去皮、去芯、切块，分别加纯净水400 mL 煮25 min，用4 层纱布过滤，取滤液后对应移至10号、11号锥形瓶中，加纯净水定容至250 mL，加入其他组分，用玻璃棒边搅拌边加热，使之完全溶化后待用。将上述1～11号锥形瓶放入高压灭菌锅中灭菌，灭菌条件：121 ℃，0.1 MPa，30 min。培养基温度冷却至50 ℃时，在纯净工作台中倒入90 mm 平皿中，每个平皿倒20 mL培养基，冷却后备用。

1.2 试验方法

1.2.1 菌种制备

参照任爱梅等方法[5]，将已活化好的试管斜面菌种接种至90 mm 的PDA 培养基平板上，20 ℃避光恒温培养4 d（96 h），用6 mm 打孔器取菌丝体块，分别接种于上述11个母种培养基平板上。

1.2.2 菌丝体培养特征观察

参照董雪方法[8]，将上述转接菌丝体块的11 个母种培养基平板置20 ℃避光恒温培养。每隔24 h观察菌丝长势、气生菌丝密度以及菌丝颜色，当菌丝体即将长满并未长满平皿时，以接种块为中心用刻度尺测量菌落直径（mm）。设3 个重复，每个重复随机测量3次，取平均值。计算菌丝日均长速：

1.2.3 菌丝干重测定

参照董雪[8]及谢放等[9]方法，菌丝体培养4 d（96 h）时，连同母种培养基一同放入盛有蒸馏水的烧杯中，加热至培养基完全熔化，用玻璃棒挑出菌丝后蒸馏水漂洗3次，滤纸吸收多余的水分，于电热鼓风干燥箱中105 ℃烘至恒重后称重，取3个重复。

1.2.4 菌核培养特征观察

参照郑磊等[10]及刘福阳等[11]方法，每隔24 h 观察记录母种培养基上菌核形成的时间；培养20 d（480 h）时，观察记录菌核分布区域、菌核颜色变化和菌核数量。

2 结果与分析

2.1 供试母种培养基上培养羊肚菌（M61）菌丝体特征

由表1、图2 可知，供试母种培养基上羊肚菌菌丝体培养结果存在较大差异。配方8菌丝体平均长速最快，配方4次之，配方5最慢；配方2菌丝干重最高，配方1 次之，配方7 最低。菌丝长势最好的是配方4、配方6、配方8、配方11，配方9 最差。配方7 气生菌丝稠密，气生菌丝稀疏的是配方6、配方8、配方11，配方4、配方10 气生菌丝较密，配方1、配方2、配方3、配方5 气生菌丝浓密。菌丝形态最好的是配方8、配方10、配方11，配方4、配方6次之，最差的是配方1、配方9。

综上所述，菌丝生长最好的培养基为配方8、配方11，配方4、配方6次之，配方9最差。

表1 供试母种培养基培养羊肚菌（M61）菌丝体结果

图1 供试母种培养基培养羊肚菌（M61）菌丝体特征（20 ℃，培养4 d）

2.2 供试母种培养基上羊肚菌（M61）菌核形成及生长发育情况

由表2、图2 可知，配方2、配方10、配方11 同一天产核，且产核最早，其次配方1、配方3、配方6、配方9，配方5 产核时间最晚，配方8 没有产核。配方11 产核数量最多，颗粒状菌核密集分布于整个平皿。配方2、配方10 产核数量次之，其中配方10 颗粒状菌核密集分布于整个平皿，而配方2 片状菌核分散分布于接种块周围。配方5 产核数量最少，杏黄色点状菌核分散分布于接种块周围。从羊肚菌菌核形成特征来看，配方11最佳，其次是配方10，配方8不产核。

表2 供试母种培养基上羊肚菌（M61）菌核形成及生长发育

图2 供试母种培养基培养羊肚菌（M61）20 d时的菌核状态（培养温度20 ℃）

3 小 结

试验结果表明，供试11个母种培养基对羊肚菌（M61）菌丝生长和菌核形成有显著影响。菌丝长势强，气生菌丝少，菌核形成能力强且颗粒状密集分布于整个培养基为优质菌种表观特征。基于此，配方11（生梨50 g，葡萄糖5 g，琼脂5 g，磷酸二氢钾0.25 g，蛋白胨0.25 g，纯净水250 mL，pH 自然）为试验六妹羊肚菌最佳母种培养基。