兽医实验室抗体检测结果影响因素分析及注意事项

张伯杰，刘文天，张会春，王俊强，李焕婷

（天津市宝坻区农业发展服务中心，天津 301800）

近年来，国家增加了对动物疫病的重视，不断提升基础设施建设水平，并且农业部门也连续促进兽医实验室考核工作，提升了全国县级以上的兽医实验室设备水平。抗体检测工作的开展，能够快速检测出一些畜禽的疾病，根据结果能够提出相应的治疗方法，进一步提升治疗的效果。但是在开展抗体检测过程中，样品因素、人为因素等会造成检测结果失真，无法为治疗提供有效的依据。因此，相关部门要优化兽医实验室抗体检测环节，提高检测准确性。

1 兽医实验室抗体检测的必要性

随着生存环境的不断恶化，各种疾病的发生率也越来越高，畜禽业动物疫病类型也变得复杂，不再是单一感染，混合型感染加继发性感染多，很多疾病的临床表现与剖检结果类似，如果不能准确找出病因，将无法达到良好的治疗效果[1]。实验检验利于中兽医明确疫病类型，从而采取针对性的治疗，不仅能减少治疗成本，还能提高治疗效果。兽医实验室开展抗体检测工作就是为了将治疗的被动状态变为主动。常见的检测方法有血清学检测、ELISA检测等，基本原理都是根据抗原抗体的特异性结合酶标物，催化检测样本，使其发生反应显色，根据显色的深浅判断结合酶的多少。其中ELISA 检测的类型分为间接法、双抗夹心法以及竞争法，不同的方法适合不同的抗体检测工作，需要根据实际情况选择。

2 兽医实验室的现状

2.1 实验技术人员较少

目前，我国大部分县区的兽医实验室的工作人员都是兼职的身份，具有较强的流动性，且缺乏相应的专业知识与技术，实验室工作人员较为短缺，部分动物抗体检测工作甚至无法正常开展。部分实验室中只有2 名工作人员身兼数职，无法以实验工作为主，加上多种因素的影响，实验室的工作人员没有学习与进修的机会，工作人员的能力不能满足新时期兽医工作的需求。

2.2 兽医实验室经费不足

很多地方对兽医实验室的经费投资力度不够，导致部分兽医实验室出现经费不足的情况[2]。一些地区虽然在表面上将动物抗体检测的经费列入了支持范畴，但是实际用来建设兽医实验室的经费较少，实验室的设备与仪器不能及时更新，设备采购年限较长，在设计运用中可能会出现故障与问题，部分实验室还会出现缺少试剂的情况，无法保证抗体检测的准确性与可行性，阻碍抗体检测工作的顺利开展。

2.3 缺乏严格的管理制度

兽医实验室的抗体检测工作属于专业性较强的实验，只有建立健全相应的管理制度才能提高检测结果的可信度。这就需要管理人员从实验室的实际情况出发，制定合理的管理制度，提高工作人员的责任心与使命感，进一步提升实验室工作人员的能力。同时，还要做好培训工作，保证兽医实验室工作的顺利开展，提高抗体检测结果的准确率。

3 影响兽医实验室抗体检测结果的因素以及注意事项

3.1 免疫因素

3.1.1 实验物种因素

兽医实验室需要以物种综合情况为依据对实验物种进行合理选择，实际选择时不仅要对实验物种的遗传疾病进行准确评估，还要对其营养状况进行全面判定，是否受免疫抑制剂的影响也是实验物种选择需要关注的重点。待确定好实验物种且正式研究前，需要依靠人工方式对其进行一定时间的饲养，对其在实验过程的正常死亡提供保证，避开其他客观因素的影响。除上述情况外，若没对实验物种的遗传疾病进行判定，在抗原抗体进行接种时其免疫应答会受到不同程度的影响。

3.1.2 实验疫苗因素

免疫应答体现质量，实验室选取疫苗的使用年限及质量有很大关系。基于此，相关负责人在选购实验疫苗过程中要确认疫苗来源是否合理、生产厂家是否正规，尤其是所选购生产厂家是否是国家相关部门检验并通过审核，这这对免疫应答非常重要[3]。假冒伪劣的疫苗品种经常流通在相关市场，这类实验疫苗具有较低的选购成本，但非常不利于做抗体研究，甚至会给兽医实验的整体结果带来严重影响。除以上需要注意的外，还要保证实验过程选择变量的单一性，切忌不能将多种疫苗同时注入实验物种中，这种错误的行为不仅影响实验结果的准确性。

3.2 样品因素

3.2.1 样品采集时间

研究人员给实验物种注射一定时间的疫苗后，要借助数据测量结果对疫苗作用的最高阈值及最低阈值进行确定。如果实验物种疫苗达到最高阈值，研究人员应将作用时间及时记录，然后结合其他类型不同的疫苗最高阈值进行仔细比对。通常情况下，疫苗活性和抗体产生速度成正比，活性越高实验体内的抗体产生速度会越快，若实验疫苗活性被灭，抗体产生的时间就会被拉长。

3.2.2 样品采集方法

在检测实验抗体时，首先要进行血清样本的采集工作，采集对象需要是已经接种疫苗的实验物种。如果采集针对的实验物种没有生命体征，则该血清样本采集无效。采集样本的方式不仅要专属、特定，还要借助专用设备进行物质分离，并保证采集全程无菌，还要保证研究人员动作的规范性。

3.2.3 对样品的处置及保管

由于凝血因子的存在会导致所采血清样品极易发生凝固[4]。基于此，为了保证采集质量，避免发生变质，实验人员经常会将特殊化学试剂添加到所采的血清样本中，并对其进行专业的物理处理。需要注意的是，抗凝剂不能直接添加到样本中，应根据添加要求规范操作。待工序全面完成以后，应将所采样品放置在离心管中进行低温或冷冻保存，离心管要提前高温消毒方可使用。由于实验样品的保存期非常有限，需要对其及时利用。

3.2.4 样品分装

兽医研究人员在进行实验时需要保持严谨的工作态度，这也是科学实验的重要前提。为了预防交叉感染问题发生，分装血清样本过程中，务必使用独立且符合应用标准的试剂滴管进行严格操作。离心管及注射器需要和血清样本一一对应，离心管和注射器必须是一次性操作，不能重复使用。

3.3 实验室因素

3.3.1 对实验器械的检测

实验器械的使用质量及结构直接影响着实验测量的最终结果，任何兽医实验都是如此[5]。如果选用了误差较大的测量设备，或者灵敏度较低的仪器，会给实验结果带来不同程度的偏差，尤以抗体检测最为明显，如果器械使用质量不佳，会直接干扰最终的实验数据。

3.3.2 对实验试剂的检测

虽然兽医实验室选购的试剂厂家都是正规且通过验收标准的，但在对实验试剂进行实际生产时，每个厂家会使用不同的成分元素，因此，实验试剂最终成品还是会存在某方面的不同，在具体实验中，研究人员需依据自身的实际需求，合理选择试剂，以保证实验开展的顺利性。

3.3.3 实验室温度

实验室温度如何同样影响着抗体实验的检测结果。因此，在抗体检测实验时，研究人员需要避免温差较大问题出现。通常实验温度要求在25℃左右为最佳，如果抗体实验中发生温差较大现象，势必会对抗原抗体的反应结果带来直接影响，或快或慢都会降低实验结果的严谨性，甚至出现实验数据差异较大的结果。

3.4 人为操作因素

3.4.1 加样操作

不同类型的抗体检测技术，适用于相应的动物传染性疾病抗体检测。在实际检测过程中，加样环节是血清抗体检测的重要步骤，也会直接影响试验研究的结果[6]。因此，在进行添加样品过程中，要保证样品的均匀性，避免出现气泡，并且要做到定量加入，一般的剂量控制在50 μl 左右，轻轻地将样品加入被检样品孔。另外，还需要注意样品检测前要完全解冻，提前将需要使用的样品拿出来，在室温下完成解冻，混合均匀后在检测。

3.4.2 孵育时间

采用ELISA 抗体检测方法时，被检样品完成加样后需要进行孵育，能够使被检样本与所包被抗原或抗体进行充分结合，在此过程中要做好温度与时间的控制。不同类型抗体检测时，要严格按照说明书的要求进行孵育，以此防止抗原或抗体活性丧失后，造成检验样品与抗体形成抗原复合物，影响实验的结果。

3.4.3 洗板次数因素

ELISA 检测相关抗体时，完成加样与孵育后要进行洗板，常见的洗板方法有两种，即手工洗板与机器洗板。在进行洗板过程中，洗涤的次数要在一定标准内，洗涤次数过多会将反应结合的复合物清洗掉，洗涤次数较少会出现洗涤不干净的现象，造成二抗稀释液的残留，影响实验结果。另外，在进行洗涤后还要注意拍板，将多余的洗涤液甩出去，保证实验的准确性。

3.4.4 结果判定

在进行抗体检测实验过程中，完成显色反应后要停止加入终止液，将酶标板放在酶标仪上，限定15 min 内读取结果，保证设定的波长和试剂说明书一致。另外，需要注意的是，酶标板在使用前需要预热15～30 min，空白版自检2次后才能检测样品。

4 提高兽医实验室开展抗体检测结果准确性的策略

4.1 加强对实验室工作人员的技术培训

在进行抗体检测过程中，为了保证检测结果的准确性与有效性，需要对兽医实验室的工作人员进行培训[7]。为此，兽医实验室的管理人员要建立完善的培训制度，根据实验室的具体情况，制定合理的技术培训计划，帮助工作人员掌握先进的实验方法与操作要点，规范工作人员的操作流程，进一步提升工作人员的素养与综合能力。同时做好实验人员的思想工作，使其树立严谨的工作态度，提高工作的责任心，高质高量的完成抗体检测工作，保证检测结果的准确性。另外，还要制定完善的考核标准，保证实验人员持证上岗，提升实验室的检测水平。

4.2 制定完善的监督管理制度

兽医实验室开展抗体检测工作中，要根据实验类型挑选准确率高、操作简单的方法，严格按照相关流程进行检测，保证器材使用的规范性，按照相应的标准添加试剂，并且要严格控制实验室的环境，及时处理实验肥料，减少出现实验误差的概率，保证实验的准确性。同时，建立健全完善的监督管理制度，有利于保证兽医实验室抗体检测工作的规范性[8]。在现有制度的基础上进行完善与创新，严格按照管理制度规范与落实各项工作，还可以将实验室监督管理纳入实验室人员绩效考核中，在加强监督力度的基础上，促进实验室检测水平的提升。

4.3 加强实验室的硬件设备

兽医实验室在实际运行过程中，需要有一定的硬件设施作为支撑，才能提高检测结果的准确性。这就需要相关政府部门的支持，加大对兽医实验室的资金支撑，为检测工作的开展奠定基础。政府部门要结合实验室的具体情况进行规划，明确科室人员的职责，实现精细化分工，保证检测工作高效进行，并且要更新实验室的硬件设置，注重日常维修与管理，保证设备正常运行，达到更高的检测效率与质量。

4.4 加大对实验环节的控制

首先，在进行抗体检测过程中，样本是检测的基础，实验室需保证样本的准确性与有效性。在采样过程中，使用专业化水平较高的设备，按照一定的标准进行采样，实现快速采样与存储，为实验室检测提供便利。

其次，选择合适的实现试剂。不同的检测项目，适合的检测试剂不同，选择便于存储并且具有较高稳定性的试剂，确保试剂的有效性。

最后，严格控制实验环境。只有将实验温度与湿度控制在一定范围内才能达到最佳的实验检测效果。

5 结束语

在兽医实验室开展抗体检测过程中，影响检测结果的因素较多，如免疫因素、样品因素、实验因素以及人为因素等。针对不同的因素可采取相应的应对措施，重点是做好样品收集与存储工作，不断提升工作人员的素质，使其形成严谨的科学态度，并做好实验室仪器维修与保养工作，减少不良因素的影响，确保检测结果的准确性，推动畜禽养殖业的长远发展。