中药材鉴定中应用显微鉴定技术的研究进展

杨 军

植物类中药的品种相对复杂，植物类入药部位多种多样，包括根、茎、叶、花、果实，中药材也有动物药和矿物药，但中药材缺少专属性强的特征，在鉴别上存在一定难度[1]。中药材往往需要经过加工后才能入药，炮制和加工过程导致药材外表特征已经发生改变，通过肉眼很难辨别真伪，另外中药还会制作成多种剂型，中药材已经完全改变外部特征[2]。随着我国中药学事业的发展，通过显微鉴别有利于鉴别植物组织和细胞之间的不同之处，填补了中药材鉴别的空白。

1 显微鉴定概述

显微鉴定为中药传统鉴定方法之一，已经被《中华人民共和国药典》所记载，用于中药材和成方制剂的鉴定。显微鉴定技术是通过光学系统或电子光学系统设备，对肉眼不能分娩的微小形态结构和特征进行鉴别的技术手段。中药按照来源可分为动物药、植物药、矿物药，其中植物药能够有较多品种用于显微鉴定[3]。中药的显微特性主要包括各种细胞及细胞内部结果，细胞内通过显微镜能够观察到内容物包括菊糖、淀粉粒、挥发油、结晶、脂肪油等，同时也能够观察到组织碎片和非动物组织等[4]。花类药材的显微特征为具有花粉粒，根茎类药材的显微特征具有毛茸和气孔，根茎类药材的显微特征为具有导管，动物类药材的显微特征能观察到骨碎片和肌肉纤维，种子类药材显微特征为种皮栅状细胞。药材经过捣碎或磨粉后，药材本身原有的性状特征发生改变，给肉眼鉴别真伪带来困难[5]。将粉末药材制成丸、散、膏、丹后更难以辨别其真实性。随着我国药学技术的不断发展，对中药材特别是中药制剂的鉴别提出了新的要求。显微鉴别更适用于性状相似不容易区分的药材，主要包括生药粉末鉴别和显微组织切片鉴别方法，通过显微镜对药材进行观察[6]。显微鉴定步骤为切片、表面装片、解离组织片、粉末制片、观察、记录、绘图，在制片过程中因鉴别不同内容选择不同试剂，观察较薄、透明的样品多会使用稀甘油或蒸馏水，观察较厚不透明的组织多会使用水合氯醛以增加其透明度和透光度[7]。在显微鉴别观察时应观察组织碎片、细胞内含物，如需要对其长度或直径进行测量，可选用显微测微尺以微米为单位测量。

2 显微鉴别在中药鉴定中的应用

显微鉴别通过光电子系统对人眼难以观察的微小细节进行观测，对不同中药加以区分，在不断实践中将显微鉴别分为2类：组织结构与粉末鉴定、半显微性状鉴别[7]。

2.1 组织结构与粉末鉴定除了使用普通的光学设备，还可借助高精尖的设备，例如激光共聚焦扫描显微镜、扫描电镜联用仪、原子力显微镜等，通过以上设备发挥长处，起到准确鉴别药物的效果。激光共聚焦扫描显微镜，将激光扫描装置、计算机、荧光显微镜相结合，通过激光或紫外线对检测对象的内部结构进行细胞探查，以获得更为清晰的三维图像，使观察人员更为清晰地观察到内部结果[8]。通过激光共聚焦扫描显微镜对小檗碱和苦参碱的动态进行测定，能够判断苦参碱通过剂量依赖促进钙内流，但不具有促进该释放的作用。小包间细胞的内流钙浓度变化明显，通过降低小檗碱浓度来抑制豚鼠心肌细胞电压依赖性钙通道，以刺激细胞的钙释放。扫描电镜联用，为X射线和扫描电镜联用设备，可通过宏观到微观，粗糙到表面的观察，以解决定位困难问题。原子力显微镜在物理原子学理论基础上设计的分析仪，通过激光源发出的激光束，经悬臂反射发生位移来鉴别药物的分子聚集体和内部细胞情况。

2.2 半显微性状鉴别通过显微识别和常规性状识别相结合形成的一种新的鉴别方式，与显微鉴别比较该种方式操作相对简单。半显微性状鉴别通过肉眼进行初步性状鉴别，对无法确定的部分通过放大镜、扫描仪、显微镜等设备进行细微外观观察，从而达到鉴别的目的[9]。利用半显微性状鉴别不用改变药材外貌，对药材本身不造成伤害，特别是对种子类和动物类药材具有重要价值。

3 常用的显微鉴定

3.1 中药材粉末鉴定中药材在研磨成粉末后失去外部特征，不能通过性状来完成鉴别，需要借助显微镜观察微观结构特征，以完成对药材真伪进行鉴别。典型中药材粉末鉴别为天南星的粉末显微鉴定，比较粉末显微特征的区别以鉴别药材的真伪。也有研究通过对中药桑白皮、黄柏、厚朴、土荆皮、秦皮、紫荆皮、木棉皮、茯苓、猪苓等皮类中药材和菌类中药材中后含物进行显微鉴定以区别药材真伪。药材粉末通过显微鉴定有一定的技巧，例如皂角子在显微鉴定下能够观察到皂角子特有的显微特征[10]。《中华人民共和国药典》收载的5种海马粉末通过显微鉴别，能够观察到特有的显微特征，例如横纹肌显微、皮肤碎片和骨碎片特征等。对羚羊角、穿山甲、珍珠、地龙、海马等珍稀药物粉末进行显微特征研究能够明确附注显微特征图。有研究结果显示通过对鹿茸茸毛进行显微鉴别分析，可有效区分鹿茸正品、混用品、代用品，对评价鹿茸质量有重要作用。

3.2 中药材后含物鉴定后含物为植物细胞在代谢过程中产生的物质，其不具有生命活性。后含物的性质和形态通常与植物种类有关，中药材后含物也可作为鉴别的重要依据。后含物多为脂肪、蛋白质、糖类、液泡盐类、有机化合物等，对中药粉末通过显微鉴定检索信息表中物质以鉴别中药种类。石细胞多在根被组织和厚生表皮中存在较多，并且具有一定的稳定性，可鉴别不同科属[11]。草酸钙结晶、淀粉粒形态在显微鉴定中均有重要意义。草酸钙结晶体不是所有的植物都具有，在含有该成分的植物中会呈现出不同的大小和形态，可根据草酸钙结晶体的显微特征作为鉴别中药的依据。

3.3 地方用药和民族药物的鉴别地方用药和民族药物多为少数民族地区用药，建立在少数民族传统医药理论，药物只生长在本民族地区，有明显地域性。各民族医药独立发展并保持本民族特色，许多药物均存在共同点。响铃草为云南白族特有药材，根据其显微特征制定了显微鉴定标准，通过显微构造简图对地上部分和翼首草根进行切面绘制，具体描述了草酸钙和细胞显微特征，可根据显微图谱进行鉴别[12]。鸭嘴花属植物在进行显微鉴别中发现其横截面存在维管束，两端存在多层纹的石细胞、薄壁细胞、草酸钙方晶等结构。小叶黑柴胡、银州柴胡、锥叶柴胡进行了鉴别，其横截面可见淀粉颗粒，为显微鉴定提供了依据。

4 显微鉴定专属性特征

多基源药材鉴别可用显微鉴定进行，《中华人民共和国药典》中大部分药材均可通过外部特征和性状进行鉴别，但药材被粉碎成粉末后很难通过外部特征进行区分，需要借助显微镜开展显微鉴别[13]。不同用药部位的鉴别也可通过显微鉴别方法，例如三七为五加科植物，在入药时使用的部位分别为根和茎，在三七炮制过程中可分为支根、主根、根茎，三者的差别可通过显微鉴别进行判定，以辨别三七粉末的优劣。对于具有显微特征的专属性药物可通过显微鉴别进行分析，在显微视野下种皮表皮细胞含有半球形、球形的草酸钙晶体，薄壁细胞可出现三角形间隙，存在网状纹理及柄单细胞[14]。

5 小结

中药材是疾病治疗和卫生保健的重要物质，显微鉴别对中药鉴别真伪和药物属性具有重要意义。中药材质量不达到标准会直接影响中药材的临床使用价值，为了保证中药临床使用的安全性，必须对其质量进行严格管控[15]。中药质量主要体现在临床疗效中，中药质量会受到生物基因特征、形态特征及理化特征影响，结合以上相关因素可对中药品质及疗效加以判断。随着中药鉴定技术的不断发展，中药质量标准也在逐步提高，利于中药走向国际化。