慢性阻塞性肺疾病患者外周血淋巴细胞亚群及免疫细胞表达变化与肺功能的相关性研究

冯军军，李鑫，邵旦

作者单位： 315200 宁波，宁波市镇海区中医医院

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是呼吸科常见疾病，近年来该病的发病率呈增长趋势[1]。多数学者认为在COPD 的发生及发展过程中，存在不同程度的炎性反应，且T 细胞水平异常及免疫失衡是导致COPD 发生的重要因素[2]。研究表明，T 淋巴细胞是反映机体细胞免疫功能的有效指标之一，CD4+能促进细胞免疫功能的发挥，而CD8+则对细胞免疫功能具有抑制作用，抑制性T 细胞（Treg）及辅助性T 细胞17（Th17）常参与患者的各种自身免疫性疾病和慢性感染性疾病，也在COPD的发病过程中发挥着重要作用[3]。本研究通过检测稳定期与急性期COPD 患者T 淋巴细胞亚群及免疫细胞水平的变化，探讨其与肺功能指标的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2018年10月至2019年10月宁波市镇海区中医医院收治的160例COPD患者，其中稳定期患者（稳定期组）80 例，急性期患者（急性期组）80 例。稳定期组男51 例，女29 例；年龄51～69岁，平均（58.5±7.0）岁。急性期组男48 例，女32例；年龄53 ～69 岁，平均（59.3±7.3）岁。另外选取同期健康体检者95 例作为对照组，其中男68 例，女27 例；年龄54～68岁，平均（60.9±6.1）岁。3 组一般临床资料差异无统计学意义（P ＞0.05）。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：（1）符合中华医学会呼吸病学分会《慢性阻塞性肺疾病诊治指南（2013 年修订版）》[4]中的COPD诊断标准，具有呼吸困难、咳嗽及咳痰等临床表现，经肺功能、CT 等检查确诊；（2）对本研究知情，且自愿签署知情同意书。排除标准：（1）合并非COPD 引起的高血压、糖尿病及其他脏器病变者；（2）其他系统感染、免疫功能异常及恶性肿瘤者。

1.3 方法

1.3.1 淋巴细胞亚群及免疫细胞水平检测方法 采集所有患者晨起空腹血，使用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，取FCM专用试管2 支，分别加入单克隆三色抗体CD4-FITC/CD8-FE 5 l，均加入30 l抗凝血，使用流式细胞检测仪（Cyto-FLEX LX 型，由美国贝克曼库尔特公式生产）检测患者外周血T 淋巴细胞亚群（CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）水平；淋巴细胞分离液分离出外周单核细胞，行表面染色，避光孵育20 min，上机检测Treg及Th17 水平。采用ELISA 法检测所有患者的中性粒细胞及巨噬细胞水平。

1.3.2 肺功能检测方法 所有患者均由同一专职医师行肺功能检测，肺功能测定前24h 需停用口服平喘药物。肺功能测定值以吸入沙丁胺醇200 g，10min后检测数值为标准，检测所有患者第1 秒用力呼气容积占预计值百分比（FEV1%）、用力肺活量占预计值百分比（FVC%）及第1 秒用力呼气容积与用力肺活量比值（FEV1/FVC）。

1.4 统计方法 采用SPSS 19.0 统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差表示，多组比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t 检验；采用Pearson 相关分析。P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3 组淋巴细胞亚群比较 3 组C D4+、CD8+、CD4+/CD8+、Treg 及Th17 水平差异均有统计学意义（均P ＜0.05），急性期组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平均低于稳定期组和对照组（均P ＜0.05），稳定期组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平均低于对照组（均P ＜0.05）；急性期组Th17 水平均高于稳定期组及对照组（均P ＜0.05），Treg 水平均低于稳定期组与对照组（均P＜0.05）；稳定期组Th17水平高于对照组（P＜0.05），Treg 水平低于对照组（P ＜0.05）。见表1。

2.2 3 组中性粒细胞及巨噬细胞水平比较 3 组中性粒细胞及巨噬细胞水平差异均有统计学意义（均P＜0.05），急性期组中性粒细胞及巨噬细胞水平均高于稳定期组及对照组（均P ＜0.05）。见表2。

2.3 3 组肺功能指标比较 3 组FVC%差异无统计学意义（P ＞0.05），急性期组FEV1%、FEV1/FVC 水平均低于稳定期组和对照组（均P ＜0.05），稳定期组FEV1%、FEV1/FVC 水平均低于对照组（均P ＜0.05）。见表3。

2.4 相关性分析 CD4+/CD8+、Treg 水平与FEV1%、FEV1/FVC 水平呈正相关（均P ＜0.05），CD8+、Th17、中性粒细胞水平与FEV1%、FEV1/FVC 水平呈负相关（均P ＜0.05）。见表4。

表1 3 组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、Treg、Th17 水平比较 %

表2 3 组中性粒细胞及巨噬细胞水平比较 %

3 讨论

目前，COPD 的发病机制尚未完全明确，多数研究者认为其发病机制主要与炎症机制及免疫机制等有关[5]。本研究结果显示3组受试者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平差异均有统计学意义（均P ＜0.05），急性期组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平均明显低于稳定期组和对照组，稳定期组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平均低于对照组（均P ＜0.05）。

3 组Treg、Th17 水平差异均有统计学意义（均P＜0.05），急性期组Th17 水平均高于稳定期组及对照组，Treg 水平低于稳定期组与对照组；稳定期组Th17水平高于对照组，Treg水平低于对照组。这说明外周血T 淋巴细胞对COPD 的发病产生作用，且与患者持续的气道炎症及肺泡损伤密切相关。当患者机体发生炎性反应后，为提高机体对细菌的吞噬能力，机体会产生大量的中性粒细胞[6]。而巨噬细胞亦能通过对细胞残片及病原体的吞噬作用，激活淋巴球及其他免疫细胞，对病原体做出反应[7]。且Th17 可通过分泌白细胞介素等炎性细胞因子来募集巨噬细胞及中性粒子，加大炎性反应。本研究结果显示CD4+/CD8+、Treg 水平与FEV1%、FEV1/FVC 水平均呈正相关（均P ＜0.05）；CD8+、Th17、中性粒细胞水平与FEV1%、FEV1/FVC水平均呈负相关（均P＜0.05）。这说明T淋巴细胞亚群相关细胞因子、免疫细胞与肺功能损伤相关，分析原因可能由于患者促炎因子与自身免疫细胞因子比例失衡，导致COPD患者存在长期的慢性炎性反应，损伤上皮细胞，造成气道重塑，最终损伤肺功能。综上所述，COPD 患者肺功能与T淋巴细胞亚群及中性粒细胞水平关系密切，及早发现并调整患者细胞因子及免疫失衡状态，对临床早期治疗COPD 并监测临床效果有指导意义。

表3 3 组肺功能指标比较

表4 T 淋巴细胞亚群及免疫细胞表达与肺功能指标的相关性