老年不同级别宫颈病变患者Treg、IFN-及IL-4水平变化及其临床意义

周晓涵，宁玉梅，马军

宫颈癌是全球女性发病率较高的恶性肿瘤，其中90%以上的宫颈癌患者会合并人乳头瘤病毒（HPV）感染。以往研究认为HPV 感染多发生于性生活活跃的中青年女性群体，但近些年发现老年人HPV 的感染率呈上升趋势，并在老年宫颈病变中起到关键影响，危及患者生命健康安全[1]。HPV 的持续感染能否引起宫颈病变与患者的自身免疫状态及激素分泌水平等呈相关性，患者自身免疫系统在HPV介导的致癌作用中起到关键作用[2]。本研究旨在探讨老年不同级别宫颈病变患者调节性T 细胞（Treg）、免疫因子-干扰素（IFN- ）及白细胞介素-4（IL-4）水平的变化及其临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2019 年3 月至2020 年5 月浙江中医药大学第二临床医学院收治的92 例老年宫颈病变患者为研究组，按不同级别分为宫颈癌组39例、宫颈上皮内瘤变（CIN）组34 例（CINⅠ级14 例、CINⅡ级9 例、CIN Ⅲ级11 例）和宫颈炎组19 例，并选取同期40 例健康体检者为对照组。纳入标准：（1）研究组患者经病理检查确诊为宫颈病变，且均未接受过放化疗；（2）所有受检者及家属自愿签署知情同意书；（3）临床资料完整。排除标准：（1）免疫系统疾病；（2）严重心脏、肝肾功能异常；（3）合并恶性肿瘤；（4）合并感染性疾病。对照组40 例健康体检者年龄60 ～82 岁，平均（69.4±7.3）岁；平均体质量指数（BMI）（20.72±2.13）kg/m2。研究组92 例年龄60～81岁，平均（69.2±7.2）岁；平均BMI（20.21±2.18）kg/m2。

1.2 方法 患者入院后于清晨空腹下抽取外周静脉血10 ml，置于－80 ℃冰箱中待检。使用FACS CantoⅡ型流式细胞仪检测Treg 细胞水平，将待检样血使用肝素钠抗凝，抗凝完成后加入CD3、CD4、CD8 抗体10 l，混合摇匀完成后将其放至室内避光处，20 min 后加入800 l的红细胞裂解液，混合摇匀后继续于室内避光处放置10 min，待溶血完成后加入1000 l的PBS缓冲液洗涤2 次，采用Diva 分析软件进行结果分析。使用离心机将样品管以3000r/min 离心10min，采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清IFN-和IL-4 水平；上述操作均由同一实验员严格按照操作规章及试剂盒说明完成，试剂盒购自上海康朗生物科技有限公司。

1.3 统计方法 采用SPSS 19.0 统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差表示，多组比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t 检验；采用Pearson 相关分析变量间的相关性。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组Treg 细胞、IFN- 及IL-4 水平比较 宫颈癌组Treg 细胞水平高于CINⅠ、CINⅡ、CIN Ⅲ级组、宫颈炎组和对照组，且CIN Ⅲ级组Treg 细胞水平高于宫颈炎组和对照组（均P ＜0.05）；宫颈癌组IFN- 水平低于宫颈炎组和对照组（均P ＜0.05）；宫颈癌组IL-4 水平高于CINⅠ、CINⅡ、CIN Ⅲ级组、宫颈炎组和对照组，且CIN Ⅲ级组IL-4 水平高于对照组（均P ＜0.05）。见表1。

2.2 Treg 细胞与IFN- 及IL-4 水平的相关性 Treg 细胞与IFN- 水平呈负相关（r=－0.302，P ＜0.05），Treg 细胞与IL-4 水平呈正相关（r=0.391，P＜0.05），IFN- 与IL-4 水平无相关性（r=－0.070，P ＞0.05）。

3 讨论

有研究报道，发生宫颈病变后会抑制其细胞的免疫功能，大大降低免疫系统的识别能力及杀伤能力，肿瘤细胞的生长受其异化作用的影响，加快肿瘤细胞的发展及转移[3]。Treg 是能够起到负性调节作用的免疫抑制细胞，其表达以IFN- 和IL-4 为主，通过与多种免疫细胞相互作用，对其活化产生抑制作用。正因如此，Th 细胞失衡与肿瘤免疫关系愈发受到人们重视[4-5]。宫颈病变的发生是由多因素共同作用所致，Treg 介导的肿瘤细胞逃逸机制及Th 细胞的失衡可能是其重要的原因。

Treg细胞是极为重要的肿瘤免疫抑制细胞，是组成肿瘤免疫耐受的关键成分，维持和稳定机体的免疫状态是其主要功能；当患者发生肿瘤时，其机体内的Treg 细胞会显著增多，强烈抑制了机体对肿瘤抗原的免疫应答[6]。本研究结果显示，宫颈癌患者的Treg 细胞水平高于CIN 患者、宫颈炎患者和健康者，且CINⅢ患者的Treg细胞水平高于宫颈炎患者和健康者。这说明Treg 细胞水平能够较好的反应患者的免疫功能状态，是极为重要的参考指标。Treg 细胞的升高过程可能参与了宫颈病变的发展过程，其通过分泌TGF- 、IL-10 等抑制性细胞因子进而抑制树突状细胞，并与巨噬细胞相互作用，以此来参与宫颈病变的免疫躲避[7-8]。

表1 各组Treg 细胞、IFN- 及IL-4 水平比较

IFN- 作为Th1 细胞因子的代表，是极为重要的免疫调节因子，具有抗肿瘤与免疫调节的功能，能够减慢或组织肿瘤细胞的病变转化过程，若IFN- 降低则会导致机体抗肿瘤能力下降[9]。本研究结果显示，宫颈癌患者的IFN- 水平低于宫颈炎患者和健康者。这说明随着宫颈病变级别的不断发展，导致其细胞免疫功能及抗肿瘤能力不断下降，无法对机体细胞的增生进行有效控制，进而使其突变发展至恶性肿瘤。在宫颈病变级别不断发展的过程中，患者的IFN- 水平随之不断下降，但在宫颈炎、CINⅠ级、CINⅡ级及CIN Ⅲ级中无明显差异；这说明IFN- 水平在患者由宫颈炎发展到CIN Ⅲ级的过程中没有发生明显改变，即Th1 细胞起媒介的作用的细胞免疫功能没有受到显著抑制[10-11]。

IL-4 能够对Th1 细胞因子的应答起到抑制作用，并在Th2 细胞的发育过程中起媒介作用，其水平的升高可能是由于肿瘤细胞分泌可溶性因子，导致Th2增强效应发生而造成的，加快了机体Th2细胞的分化，致使Th2 细胞因子的高表达[12]。本研究结果显示，宫颈癌患者的IL-4 水平高于CIN 患者、宫颈炎患者和健康者，且CIN Ⅲ患者的IL-4 水平高于健康者。这说明在宫颈炎向宫颈癌的发展过程中，Th1 细胞向Th2 细胞偏移更明显，局部免疫抑制的发生使得癌细胞更容易逃避免疫系统监视，肿瘤发展更为迅速。通过对Th1 细胞移动至Th2 细胞的进一步研究发现，如果能够阻断肿瘤部位Th1 细胞移动至Th2，会强化细胞免疫反应，有利于免疫系统发挥抗肿瘤作用[13]。

本文结果显示，老年宫颈病变患者的Treg 细胞与IFN- 水平呈负相关，与IL-4 水平呈正相关。其原因在于当Treg细胞水平升高，IL-10 及TGF- 水平会随之升高，进而导致Th1 细胞移动至Th2细胞，抑制Th1 细胞分化的同时，使患者的IFN- 水平降低；IL-10 在Th2 细胞的发育过程中起媒介的作用，能够有效促进Th2细胞因子IL-4水平的升高[14]。Treg细胞、IL-4 及IFN- 三者之间有一定的相关性，这提示Treg 细胞水平的升高在导致宫颈病变免疫异常的同时，还在一定程度上影响了机体Th1 细胞/Th2 细胞的平衡，这说明Treg 细胞、IL-4 及IFN- 一起参与到了宫颈病变的发生及发展中。