不同灸温的调脂控炎效应及与瞬时受体电位通道香草酸亚型1 的关系研究

李梅，于建娟，王耀帅

艾灸疗法在寒性病症及代谢性疾病的治疗、抗炎免疫及养生保健等方面，相较针刺更显优势。有研究表明[1]，调控炎症反应是灸法的基本效应平台，其对炎症反应的4 个基本通路，即致病因素[2]、传感器[3]、炎性介质[4]及靶器官[5]均具有调节作用，可以干预炎性反应的起始、中间及终末各个环节。皮肤是灸法作用的直接部位，研究表明皮肤组织中分布着感受不同温度的蛋白受体（瞬时感受器电位，TRP）家族。TRP 家族的TRP 亚家族成员有TRPV1、TRPV2、TRPV3 及TRPV4，其中TRPV1 可以调节小直径的神经元对热刺激的反应，可以被43℃以上的热刺激激活，目前考虑其是热痛感受器的分子结构基础。45℃是热刺激引起痛感的平均临界值，也是人体组织被热刺激损伤的起始温度[6]。本研究将38 ℃及45 ℃作为控制条件，来探讨不同艾灸温度对高脂血症小鼠血脂和血清炎症因子的影响，并进一步明确艾灸调脂控炎的机制。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 实验动物 实验动物购自于北京维通利华实验动物有限公司，取8 周龄健康雄性C57BL/6 小鼠40只，体质量（20±2）g，相同的生存环境（温度24 ～26℃，湿度45%～55%），进食进水，适应性喂养1周。参考小鼠高脂血症模型造模法[7]，高脂饲料投喂8 周造模，完成后开始进行实验干预。

1.2 实验试剂及器材 胆固醇（TC）及三酰甘油（TG）检测试剂盒（南京建成生物工程研究所），肿瘤坏死因子-（TNF- ）、白介素-10（IL-10）、白介素-6（IL-6）及TRPV1检测试剂盒（南京凯基生物科技发展有限公司），直径0.5cm 艾条（南京艾颜堂艾绒有限责任公司），WZ-23000RX 无纸记录仪（杭州凌硕检测仪器有限公司），Allegra X-22 系列多功能台式高速离心机（上海天美生化仪器设备工程有限公司），ELx800酶标仪（美国Bio Tek 公司），VXE380 型超低温冰箱（Thermo公司），其他有移液器、眼科镊、EP 管及电子称等。

1.3 分组及方法 正常对照组（n=10）：继续投喂普通饲料，与实验组同样抓取、固定，但不做艾灸治疗。

模型对照组（n=10）：造模成功后，继续投喂高脂饲料，与实验组同样抓取、固定，但不做艾灸治疗。

38 ℃温和灸组（n=10）：继续投喂高脂饲料，治疗时将小鼠仰卧位固定于固定器上，消毒神阙穴（小鼠腹正中线胸骨柄上缘至外生殖器上3/4 与下1/4 交界处）皮肤，待其安静后，使用直径为0.5 cm 的清艾条进行治疗。每天温和灸10 min，共2 周。治疗时，将艾条垂直悬于穴位上方8 ～12 mm 处，40 ～60 s弹灰1 次。每次治疗时使用人工控制无纸记录仪监测温度。通过调整艾条与皮肤的距离和间隔弹灰保持施灸温度在（38±1）℃。见封二彩图1。

45 ℃温和灸组（n=10）：继续投喂高脂饲料，干预方法与38 ℃温和组相似，在艾灸刺激时，将局部皮肤施灸温度保持在（45±1）℃。见封二彩图2。

1.4 血清制备 治疗结束后，禁食12 h 后（不禁水）行单侧眼球摘除取血，常规条件下3000r/min离心15min后取上层血清置于EP 管中，放置在―20℃的冰箱中待测。

1.5 指标检测 使用TC及TG试剂盒，采用酶标仪比色法检测相关血脂含量。使用IL-6、IL-10、TNF-及TRPV1 检测试剂盒采用双抗体夹心法检测相关的血清炎性指标的水平。

1.6 统计方法 数据采用SPSS 22.0 软件分析，计量资料采用均数±标准差表示，多组间比较采用F检验，多重比较采用LSD-t 检验。P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清TC 及TG 含量变化 治疗后，4 组小鼠血清TC 及TG 含量差异均有统计学意义（均＜0.05）。 其中模型对照组TC 及TG 含量最高，然后从高到低依次为38 ℃温和灸组、45 ℃温和灸组及正常对照组（t≥2.43，均P ＜0.05）。见表1。

2.2 血清IL-6、IL-10、TNF- 及TRPV1 含量变化与正常对照组相对比，模型对照组血清IL-6、IL-10及TNF- 含量均明显升高（t≥4.72，均P ＜0.05）。与模型对照组比较，38℃温和灸组血清IL-6、IL-10、TNF- 及TRPV1 含量变化差异均无统计学意义（t≤0.36，均P＞0.05）；45 ℃温和灸组血清IL-6 及TNF- 含量明显降低，IL-10 及TRPV1 含量明显升高（t≥13.52，均P ＜0.05）。见表2。

3 讨论

高脂血症是引发动脉粥样硬化的危险因素[8]。炎症是机体组织对有害刺激（感染、出血、创伤等）所产生的复杂生理、病理反应，是引起人体很多重要疾病的共同通路[9]。炎症反应与脂质代谢相互影响，相互作用[10]，参与了高脂血症的发生及发展过程，包括炎症细胞的聚集、活化及增生。在高脂血症病理过程中炎症因子的分泌，可以进一步形成动脉粥样硬化。因而，高脂血症及动脉粥样硬化也越来越被认为是一种炎性疾病[11]。

艾灸是中医学的重要疗法，火是艾灸的刺激源。《灵枢》有云：“火气已通，血脉乃行”，可见温热刺激是艾灸达到“刺激在外，调节在内”的功效基础，是艾灸最基本的特点。灸温是施灸强度的一个表现形式，合适的灸温可以调动机体的神经内分泌等调节机制进而防病治病。笔者认为适宜灸温的长期干预可以通过改善炎症反应达到“未病先防，既病防变”的效果。

表1 4 组小鼠血清TC 及TG 含量变化 mmol/L

表2 4 组小鼠血清IL-6、IL-10、TNF- 及TRPV1 水平变化

本研究结果显示，38 ℃组和45 ℃组均可降低血清TC 及TG 含量，45 ℃组疗效更优。相对于38 ℃热刺激，持续的45 ℃热刺激不仅可以降低血脂水平，还可以有效降低血清中IL-6 及TNF- 水平，提高IL-10 水平，抑制机体的炎症状态。可见合适温度的热刺激是艾灸调脂控炎取效的关键因素。TRPV1 主要在皮肤、角化细胞、舌、三叉神经节、背根神经节、脊髓及大脑等组织中表达，可以被43℃以上的温热刺激所激活。45 ℃这一起效温度与TRPV1 通道激活阈值相契合，结合45℃艾灸刺激能明显提升高脂血症小鼠TRPV1 通道蛋白的表达，推测TRPV1 通道可能是艾灸调脂控炎效应的关键通道。本实验结果与新近调脂控炎机制研究结果[12-13]相符。

综上所述，不同艾灸温度对高脂血症小鼠调脂控炎效应不同，45 ℃调脂控炎效应优于38 ℃，TRPV1 通道可能与艾灸调脂控炎效应有关。