免疫球蛋白A肾病临床特征及外周血T细胞亚群、Th22变化研究

李 仪， 叶伟标， 冼丽英， 戴绍文， 莫玉前， 刘国辉

东莞市人民医院 肾内科，广东 东莞 523059

免疫球蛋白A(immunity globulin A，IgA)肾病是临床上常见的免疫肾小球肾疾病，以肾小球系膜区IgA沉积为主要特征，临床表现复杂，其发病机制目前尚未清楚。有研究认为，该病发病的主要原因是机体免疫清除功能受损、黏膜含量抗原清除存在缺陷，与细胞免疫紧密相关[1-4]。本研究旨在探讨IgA肾病患者的临床特征及外周血T细胞、Th22变化。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取自2015年2月至2017年2月东莞市人民医院收治的87例IgA肾病患者纳入B组。纳入标准：符合《IgA肾病临床诊治指南》[5]中有关IgA肾病的诊断标准；临床资料完整。排除标准：伴有过敏性紫癜、类风湿性关节炎等继发性IgA肾病；伴有影响肾功能疾病，如高血压、其他型肾炎等；有肾移植史；重要脏器疾病；研究前90 d内服用过激素或免疫抑制剂。选取同期60例健康者纳入A组。本研究经医院伦理委员会批准。所有研究对象均签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 分离外周血单核细胞 采集所有受试者清晨空腹静脉血4 ml，抗凝后，在试管中加入5 ml DMEM培养基均匀混合，以3 000 r/min离心30 min，得到外周血单核细胞，再加入10 ml DMEM培养基混匀，以2 000 r/min离心10 min。用含10%胎牛血清的DMEM培养基进行细胞重悬并计数，再将细胞浓度调整为1×106个/ml，分别装入流式细胞管中(每管含1×106个细胞)备用。

1.2.2 外周血中T细胞检测 分别取同型对照管、试验管内400 μl抗凝后静脉血，于常温条件下加入10 μl Anti-CD4(PerCP)、10 μl Anti-CD25(APC)，避光30 min；于每个流式细胞管内加入3 ml溶血素，静置20 min，加入1 ml磷酸缓冲液洗涤，离心10 min后除上清液，加入1 ml Fixation/Permeabilization Solution 固定、通透，静置90 min，加入2 ml Permeabilization Buffer，离心除上清，滴入10 μl AntiFOXP3-PE，对照管内加入10μl AntilgC-PE，常温30 min，固定后上流式细胞仪检测。

1.2.3 检测Th细胞亚群 取10 μl外周血单核细胞悬液，加入10 μl的0.2%台盼蓝，用显微镜观察细胞状态并计数。剩余外周血单核细胞悬液以2 000 r/min离心10 min，采集细胞，通过DMEM培养基重悬细胞，调整细胞浓度为1×106个/ml后，置入流式细胞管内。在常温条件下，设对照管与试验管，每管中加5 μl anti-CD4(FITC)后，避光静置30 min，用磷酸缓冲液洗涤细胞后，2 000 r/min离心10 min，弃上清，滴入600 μl固定、透化溶液，避光30 min；加入5 ml配伍后的BDPerm/Wash洗涤，离心除上清液，于试验管中滴入5 μl anti-IFN-y-FITC、ani-L-9-PE、anti-IL-4-APC，对照管内加入2 μl anti-IgG1-PE、2 μl anti-IgG1-APC，避光40 min，固定后上流式细胞仪检测。

2 结果

2.1 两组临床特征比较 A组与B组男性比例、年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)。B组尿素氮>7 mmol/L、高血压、腰痛比例高于A组，肾小球过滤率>60 ml/min比例低于A组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组一般资料比较/例(百分率/%)

2.2 两组外周血T细胞、Th22细胞比较 B组CD3+、CD4+、CD8+、Th22高于A组，CD4+/CD8+低于A组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组外周血T细胞、Th22细胞比较

3 讨论

IgA肾病属于原发性肾小球疾病。IgA肾病临床表现呈多样性，包括蛋白尿、尿素氮>7 mmol/L、血尿等临床特征[6]。本研究结果显示，B组100.00%患者检出血尿，其中发作性肉眼血尿占51.72%、持续性镜下血尿占48.28%，82.76%患者检出蛋白尿，19.54%患者血肌酐>132 μmol/L，37.93%患者有高血压，36.78%患者有腰痛，6.90%患者有腹痛。有研究表明，镜下血尿伴蛋白及蛋白尿为IgA肾病患者常见的临床表现，若病情持续发展未得到有效控制，可发展为慢性肾衰竭，从而出现高血压、腹痛等并发症[7]。IgA肾病发病机制尚不明确，但已证实与人体免疫因素相关。有研究表明，淋巴细胞与肾疾病的发生及病情进展存在一定关系[8]。另有研究通过病理学证实，在肾中均有淋巴细胞，并浸润于肾小球、肾间质[9]。T淋巴细胞亚群以CD4+、CD8+、CD4+/CD8+表示，若上述免疫临床指标出现异常，则提示T细胞亚群失去平衡，细胞因子发生异常，导致免疫功能失调。本研究结果显示，B组CD3+、CD4+、CD8+、Th22均高于A组，CD4+/CD8+低于A组，提示IgA肾病患者发病可能与T淋巴细胞有关。另有研究根据IgA肾病患者临床特征水平将患者分为中高危组与低危组，对其外周血Th细胞亚群水平进行探讨，结果表明，患者外周血T细胞亚群CD4+细胞水平明显升高，且CD4+/CD8+比值也增加[10]。

综上所述，IgA肾病患者临床特征可表现为血尿、蛋白尿、肾小球过滤率下降等，伴外周血CD3+、CD4+、CD8+、Th22升高，CD4+/CD8+降低。