温阳散纤汤对博来霉素诱导的小鼠肺间质纤维化的保护作用

朱晓龙，邱念念，狐启贵

（贵州中医药大学第一附属医院呼吸科，贵州 贵阳 550001）

特发性间质肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是一种由多种原因引发的以两肺弥漫性间质纤维化为特征的疾病，导致患者弥散功能降低，最终心肺功能衰竭致死[1]。IPF发病率呈上升趋势，且致死率高，无有效根治措施，成为全球共同关注的医学热点问题。祖国医学将IPF归为“肺痹”“肺痿”范畴，认为其为本虚标实之证，痰浊、瘀血为其病理因素[2-3]。有研究显示，以温阳为主治疗IPF疗效显著[4]，本研究探讨温阳散纤汤对博来霉素诱导的小鼠肺间质纤维化的保护作用，旨在为临床治疗特发性间质肺纤维化提供依据，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 105 只C57BL/6 小鼠购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号：SCXK（湘）2016-0002。

1.2 实验试剂与仪器 温阳散纤汤（广东一方制药有限公司，批号：0139573621629）；盐酸博来霉素（北京索莱宝科技有限公司，批号：801G023）；甲基泼尼松龙（MACKLIN，批号：C10125981）；显微镜(CX41，OLYMPUS)。

1.3 动物造模、分组及给药[5]75只小鼠制作成实验模型：小鼠4%水合氯醛麻醉后，取仰卧位固定于操作台上，颈部剃毛并用碘氟消毒后，沿颈部正中做1 cm切口，钝性分离气管前组织暴露气管，然后迅速向小鼠气管内注入5 mg/kg博来霉素0.2～0.3 mL，注射后使小鼠直立并左右旋转，以使博来霉素在肺组织内均匀分布，最后在无菌条件下缝合皮肤。另取15只小鼠以同样方法向气管内注入0.3 mL 0.9%氯化钠溶液溶液，为假手术组。将造模成功小鼠随机分为5 组，即模型组，“温阳散纤汤”低、中、高剂量组，阳性组，另外设正常对照组（无任何外界刺激处理），每组15 只。温阳散纤汤组在造模后第2天，每天以5.663、11.325、22.650 g生药/kg小鼠体质量灌胃，阳性组以甲强龙15 mg/kg小鼠体重腹腔注射，每天1次，共4周。正常对照组、假手术组及模型组灌以等体积的0.9%氯化钠溶液，每天1 次，共4 周。实验结束后取小鼠左肺组织用于HE染色实验。

1.4 HE 染色 取出组织流水冲洗数小时，经70%、80%、90%各级乙醇溶液脱水，纯酒精、二甲苯等量混合液15 min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ各放置15 min（至透明为止）。石蜡包埋，切片。将石蜡切片进行烤片，然后脱蜡，水化。将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色3 min，盐酸乙醇分化液分化15 s，稍水洗，返蓝液返蓝15 s，流水冲洗，伊红染色，流水冲洗，脱水，透明，中性树脂封片，镜检。

2 结果

2.1 模型建造并分组取样 C57BL/6肺间质纤维化小鼠模型构建成，见图1。

图1 小鼠造模图Figure 1 Model drawing of mice

2.2 HE 染色检测各组小鼠肺组织病理变化 正常组小鼠肺间隔正常，无炎症因子浸润；假手术组小鼠肺组织结构与正常组类似；模型组小鼠肺间隔增宽，肺泡结构被破坏、肺泡炎症明显，大片炎症细胞浸润；温阳散纤汤低、中、高剂量组小鼠肺间隔厚度有所改善，炎症反应减弱，肺泡结构较为完整；阳性组小鼠结构肺间隔厚度正常，肺泡结构完整度较好，炎性细胞浸润程度低，见图2。

3 讨论

图2 各组大鼠肺组织病理变化（HE染色，×200）Figure 2 Pathological changes of lung tissue in each group(He staining,×200)

中医药能有效改善IPF 患者临床症状，降低患者死亡率，并提高患者生存质量。温阳散纤汤是本研究的临床经验方，以补骨脂、熟地黄、黄精、淫羊藿、黄芪、麦冬为主方，具有补益肺肾，扶正固本，养阴生津之功效，再佐以川芎丹、参当、归地龙，兼具活血化瘀通脉之疗效，诸药合用，共奏益肺活血、纳气平喘，扶正祛邪之功效。以往研究显示，此方剂中单药对肺纤维化具有显著改善作用，如黄芪甲苷可通过降低VEGF、VEGFR2 基因表达水平，发挥抗肺纤维化作用[6]。黄芪糖蛋白抑制小鼠肺纤维化的发展，其作用机制可能与降低肺组织中TGF-β1表达有关[7]。地龙可通过与靶蛋白TGF-β1结合从而抑制α-SMA 的表达以延缓肺纤维化进程[8]。地龙通过抑制NF-κB 活性，下调TGF-β1 表达，抑制胶原合成进而抑制博来霉素诱导的大鼠IPF[9]。丹参酮ⅡA通过iNOS通路调控下游炎性因子释放，从而缓解小鼠肺纤维化[10]。提示复方中药对于IPF小鼠具有改善作用。

IPF主要经历3个阶段：早期机体启动炎症/免疫反应阶段，多种致病因素损害肺泡上皮细胞及血管内皮细胞；中期阶段，多种炎症细胞浸润并释放大量炎症因子，加重组织损伤，并引发肺间质增生；晚期阶段，大量成纤维细胞生成、胶原聚集、细胞外基质代谢紊乱并以反馈形式加重炎症反应，导致肺泡正常结构功能被异常的修复重建。

综上所述，抑制肺组织炎症反应对于肺纤维化的改善具有重要意义，温阳散纤汤能显著抑制肺组织炎症反应，进而改善IPF小鼠肺组织结构与功能。