急性白血病患者红细胞生成素及EPOR的表达及其临床意义

董奎良，姚洋，刘娇媛

（大石桥市中心医院检验科，辽宁 营口 115100）

急性白血病属于临床中发生率较高的一种血液系统肿瘤，是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病，临床主要表现为白血病细胞出现异常增殖，凋亡受到阻碍，抑制正常造血[1]。化疗是现阶段临床治疗急性白血病的主要方式，但临床治疗效果不佳，具有较高的复发率和死亡率[2]。有研究[3]结果显示，急性白血病的发生、发展与基因和相关信号通路异常密切相关。本研究主要分析急性白血病患者红细胞生成素（EPO）及红细胞生成素受体（EPOR）的表达及其临床意义，以期为急性白血病的防治提供指导，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取本院2018年2月至2019年7月收治的急性白血病患者80例，其中急性髓系白血病患者（AML组）与急性淋巴细胞白血病（ALL组）各40例，并选择同期收治的40例非血液系统疾病患者作为对照组。AML 组男28 例，女12例；年龄3～44 岁，平均（21.2±2.3）岁。ALL 组男 25 例，女15例；年龄4～43岁，平均（20.6±2.7）岁。对照组男23例，女17例；年龄8～52岁，平均（20.3±3.1）岁。3组临床资料比较差异无统计学意义，具有可比性。纳入标准：急性白血病患者均满足相关的诊断标准；肝肾功能无异常；患者知情同意并签署知情同意书；本研究经本院伦理协会审核批准。排除标准：凝血功能异常者；精神疾病者；意识障碍者；严重肝肾功能异常者。

1.2 方法 ①选择ELISA法对骨髓血浆中的EPO、EPOR水平进行检测：收集研究对象骨髓上清液，置于-80 ℃的环境下保存，根据ELISA试剂盒操作步骤开展相关检测。②采用RTPCR法检测EPO、EPOR的mRNA表达水平：收集研究对象骨髓沉淀，置于-80 ℃的环境下保存，根据RNAis Plus操作步骤提取骨髓RNA，检测其浓度，选择TaKaRa Prime seripttm RT reagen tKit逆转录为cDNA，采用荧光定量PCR法检测mRNA水平。③采用Westernblot法检测EPO、EPOR蛋白表达水平：收集研究对象骨髓沉淀，置于-80 ℃的环境下保存，采用BCA法测定蛋白浓度，配制浓度为5%的浓缩胶和浓度为10%的SDS-PAGE 分离胶，50 μg 蛋白上样电泳，转至 0.2 μm PVDF膜，选择浓度为5%的脱脂奶粉在室温下封闭2 h，一抗4 ℃孵育过夜，然后进行洗膜处理，二抗室温孵育1 h，然后选择ECL显影曝光。

1.3 观察指标 比较AML 组、ALL 组和对照组骨髓血浆中EPO、EPOR水平及其mRNA、蛋白水平表达情况。

1.4 统计学方法 采用SPSS 21.0统计软件进行数据分析，计量资料以“”表示，比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3 组骨髓血浆中 EPO、EPOR 水平比较 ALL 组、AML 组骨髓血浆中的EPO表达明显高于对照组，EPOR表达明显低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；ALL组、AML组骨髓血浆中的EPO、EPOR表达比较差异无统计学意义，见表1。

表1 3组骨髓血浆中EPO、EPOR水平表达比较（）Table 1 Comparison of the expression of EPO and EPOR levels in bone marrow plasma among the three groups()

表1 3组骨髓血浆中EPO、EPOR水平表达比较（）Table 1 Comparison of the expression of EPO and EPOR levels in bone marrow plasma among the three groups()

注：与对照组比较，aP＜0.05

组别ALL组AML组对照组EPOR表达（ng/mL）1.61±0.48a 1.59±0.87a 8.43±1.24例数40 40 40 EPO表达（pg/mL）830.34±261.44a 940.24±330.96a 486.28±57.15

2.2 3 组骨髓血浆中EPO mRNA、EPOR mRNA 水平比较 ALL组、AML组骨髓血浆中的EPO mRNA、EPOR mRNA水平均明显高于对照组（P＜0.05）；ALL 组、AML 组骨髓血浆中的EPO mRNA、EPOR mRNA水平比较差异无统计学意义，见表2。

2.3 3组骨髓血浆中EPO、EPOR蛋白水平表达比较 ALL组、AML 组骨髓血浆中EPO、EPOR 蛋白水平表达明显高于对照组（P＜0.05）；而ALL 组、AML 组骨髓血浆中EPO、EPOR 蛋白水平表达比较差异无统计学意义，见表3。

表2 3组骨髓血浆中EPO mRNA、EPOR mRNA水平比较（）Table 2 Comparison of the levels of EPOmRNA and EPOR mRNA in bone marrow plasma among the three groups()

表2 3组骨髓血浆中EPO mRNA、EPOR mRNA水平比较（）Table 2 Comparison of the levels of EPOmRNA and EPOR mRNA in bone marrow plasma among the three groups()

注：与对照组比较，aP＜0.05

EPOR mRNA 2.76±1.73a 3.02±1.33a 0.81±0.25组别ALL组AML组对照组例数40 40 40 EPO mRNA 3.86±1.17a 4.09±1.76a 0.84±0.14

表3 3组骨髓血浆中EPO、EPOR蛋白水平表达比较（）Table 3 Comparison of the expression of EPO and EPOR protein levels in bone marrow plasma among three groups()

表3 3组骨髓血浆中EPO、EPOR蛋白水平表达比较（）Table 3 Comparison of the expression of EPO and EPOR protein levels in bone marrow plasma among three groups()

注：与对照组比较，aP＜0.05

EPOR蛋白水平表达2.35±0.92a 3.35±1.08a 0.44±0.05组别ALL组AML组对照组例数40 40 40 EPO蛋白水平表达1.46±0.25a 1.42±0.26a 0.72±0.18

3 讨论

本研究结果显示，急性白血病患者EPO、EPOR 均呈高表达，与焦桢等[4]研究结果一致。白血病患者骨髓中的白血病细胞增殖现象较显著，机体处于持续缺氧状态，导致EPO、EPOR分泌出现异常增加；同时，EPO/EPOR参与的JAK/STAT信号通路被激活，导致白血病细胞出现无线增值，而有关其具体的作用机制还应深入探讨[5-6]。相关研究结果显示，在前列腺癌、膀胱移行癌、卵巢癌等肿瘤患者也存在EPO、EPOR高表达；同时，与分级、预后、危险度密切相关，患者恶性程度越严重，表示患者局部缺氧现象越明显，EPO分泌也越显著[7-8]。以上结果表明，通过检测EPO、EPOR 表达可对急性白血病患者的预后进行判断。

本研究结果显示，与对照组比较，ALL 组、AML 组骨髓血浆中的EPO表达明显升高（P＜0.05）；ALL组、AML组骨髓血浆中的EPOR 表达明显降低（P＜0.05）。急性白血病患者EPOR信号通路中的JAK/STAT 途径表现为持续活化状态，导致大量的EPOR转入到细胞内，参与到基因调控中，进而减少血浆中的表达量，然而该论点还应通过深入研究进一步论证[9-10]。

综上所述，急性白血病患者的EPO、EPOR呈高表达，可根据EPO、EPOR表达量对患者预后进行判断。