血清miR-150 检测对冠心病患者PCI 术后发生不良心血管事件的预测价值

胡圣，薛金红，张成，李美佳，申静静

天津市第五中心医院，天津300450

《中国心血管病报告2018》报道，我国现有冠心病患者近1 100 万例，城市、农村冠心病病死率分别为 113.46/10 万、118.74/10 万例［1］。经皮冠状动脉介入治疗（PCI）是目前临床治疗冠心病最主要的手段，通过开通罪犯血管使冠状动脉缺血后重新获得血液再灌注，挽救濒死心肌，改善心脏功能［2］。但研究显示，PCI 术后患者极易发生不同程度的主要心血管不良事件（MACE），严重影响治疗效果，增加患者再住院率和病死率［3］。寻找有效手段辅助临床早期预测冠心病患者PCI 术后发生MACE 的风险具有重要意义。研究显示，微小RNA（miRNA）参与了心血管疾病的发病，其中miR-126、miR-133 等参与了冠心病发病过程，并与冠状动脉狭窄密切相关［4-5］。miR-150 属miRNA 家族成员，作为抑癌基因参与了非小细胞肺癌发病过程［6］。目前关于miR-150 在冠心病中作用的相关研究较少。本研究通过检测冠心病患者血清miR-150水平，探讨其对冠心病患者PCI术后发生MACE的预测价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择 2017 年 1 月—2020 年 1 月本院收治的冠心病患者153例，均行急诊PCI术。纳入标准：①符合《稳定性冠心病诊断与治疗指南》［7］；②首次发作且发作至入院时间<72 h；③年龄18～75岁；④满足急诊PCI 手术指征，且无手术相关禁忌证；⑤纳入研究前未接受抗凝药物治疗及抗血小板药物治疗；⑥PCI术后随访时间至少6个月。排除标准：①心脏瓣膜病、心肌病、风湿性心脏病、心力衰竭等可能影响本研究结果的心脏疾病；②妊娠期及哺乳期；③肝、肾功能障碍；④急、慢性炎症反应性疾病；⑤风湿性关节炎等自身免疫性疾病；⑥恶性肿瘤；⑦精神疾病。根据冠心病患者PCI术后6个月内有无发生 MACE 将其分为 MACE 组（n=31）和非MACE 组（n=122）。并于同期随机选取80 例年龄、性别与冠心病患者匹配的健康体检者为对照组。本研究得到医院伦理委员会批准，各组均签署知情同意书。

1.2 血清miR-150 检测 采集冠心病患者PCI 术前、对照组体检当日空腹肘静脉血5 mL，置于含EDTA 抗凝试管中室温下静置1 h，以3 000 r/min 转速离心10 min，离心半径12 cm，留取上清液置于-70 ℃冰箱中保存。采用实时荧光定量PCR 法。用德国凯杰公司提供的TRIzol Reagent 试剂盒提取血清中miR-150 的总RNA，用美国ABI 公司提供的Tapman MicroRNA RT 试剂盒反转录合成cDNA，miR-150 上游引物序列5'-TTCACCT ACAGCAC⁃GCTTGT-3'、miR-150 下游引物序列 5'-TTGGGATG⁃GAGGGAGTTTAC-3'；U6 为内参基因，上游引物序列5'-CTGCTTCGGCAGCACA-3'、下游引物序列5'-TGGTGTCGTGGAGTCG'-3'。构建 20 μL 反应体系：Tapman Master Mix 10 μL、Tapman miRNA assay Mix 1 μL、cDNA 1.5 μL、上下游引物各2 μL，无酶蒸馏水3.5 μL。反应条件：50 ℃预变性2 min，95 ℃预变性 10 min、95 ℃变性 15 s、60 ℃退火 1 min，40 个循环。采用2-△△CT法计算目的基因相对表达量。

1.3 资料收集 人口学资料：收集各组人口学资料，包括性别、年龄、BMI、既往史（高血压史、糖尿病史、高血脂史）、血压（收缩压、舒张压）；冠心病病情：梗死部位、疾病类型、病变严重程度等；实验室指标：采用日立7600 全自动生化分析仪检测FPG、TC、TG、HDL-C、LDL-C；采用超声心动图测定左室射血分数（LVEF）

1.4 随访 PCI 术后对冠心病患者进行定期随访，至少随访6 个月，方式包括门诊就诊、打电话，随访内容包括病情复发情况、MACE 发生情况，其中MACE 包括非致死性心肌梗死、再发心绞痛、支架内再狭窄、心力衰竭、心源性死亡等。

1.5 统计学方法 采用SAS9.4统计软件。计量资料以±s表示，多组独立样本比较采用方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验；计数资料比较采用χ2检验；冠心病患者PCI 术后MACE 发生的影响因素采用多元Logistic 回归分析；绘制受试者工作特征（ROC）曲线，并计算曲线下面积（AUC），评估血清miR-150 对冠心病患者PCI 术后发生MACE 的预测价值。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组临床资料比较 MACE 组男20 例、女11例，年龄（61.23±5.57）岁，BMI（22.79±2.60）kg/m2，有高血压史17 例、糖尿病史13 例、高血脂史19 例，收缩压（133.22 ± 15.08）mmHg、舒张压（82.56 ±10.24）mmHg，梗死部位：前壁梗死10例、下壁梗死7例、前间壁梗死11例、正后壁梗死3例，冠心病类型：不稳定型心绞痛12 例、心肌梗死19 例，病变严重程度：轻度病变9例、中度病变16例、重度病变6例；非MACE 组男 69 例、女 53 例，年龄（60.29 ± 6.34）岁，BMI（23.31 ± 2.46）kg/m2，有高血压史43 例、糖尿病史 31 例、高血脂史 52 例，收缩压（127.64 ± 15.58）mmHg、舒张压（78.79 ± 11.31）mmHg，梗死部位：前壁梗死37 例、下壁梗死28 例、前间壁梗死35 例、正后壁梗死22例，冠心病类型：不稳定型心绞痛89例、心肌梗死33例，病变严重程度：轻度病变69例、中度病变39例、重度病变14例；对照组男49例、女31例，年龄（60.86 ± 5.90）岁，BMI（23.38 ± 2.07）kg/m2，有高血压史28 例、糖尿病史20 例、高血脂史37 例，收缩压（125.82 ± 16.67）mmHg、舒张压（78.90 ±11.28）mmHg。三组性别、年龄、BMI、高血压史、糖尿病史、高血脂史、收缩压、舒张压比较差异无统计学意义（P均>0.05）；MACE组、非MACE组梗死部位比较差异无统计学意义（P均>0.05）；MACE 组、非MACE 组冠心病类型、病变严重程度构成比比较差异有统计学意义（P均<0.05），与非MACE 组比较，MACE 组心肌梗死比例高，病变更严重。三组FPG、TG、HDL-C 比较，差异无统计学意义（P均>0.05）；三组TC、LDL-C、LVEF、miR-150 相对表达量比较差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较，MACE组、非 MACE 组 TC、LDL-C 高，LVEF、miR-150 相对表达量低（P均<0.05）；与非MACE组比较，MACE组TC、LDL-C 高，LVEF、miR-150 相对表达量低（P均<0.05）。见表1。

表1 各组实验室指标、LVEF及miR-150表达比较（±s）

表1 各组实验室指标、LVEF及miR-150表达比较（±s）

注：与对照组比较，*P<0.05；与非MACE组比较，#P<0.05。

组别MACE组非MACE组对照组n 31 122 80 FPG（mmol/L）6.24±0.92 6.11±1.05 6.08±1.14 TC（mmol/L）4.65±1.13*#4.08±1.16*3.67±1.09 TG（mmol/L）1.75±0.82 1.62±0.89 1.70±0.75 HDL-C（mmol/L）0.87±0.29 0.93±0.25 0.85±0.29 LDL-C（mmol/L）2.94±0.51*#2.20±0.57*2.01±0.60 LVEF（%）49.33±10.12*#62.79±9.82*75.81±10.57 miR-150 0.27±0.09*#0.64±0.11*0.75±0.12

2.2 冠心病患者MACE 发生的影响因素 以冠心病患者PCI 术后6 个月内是否发生MACE 为因变量（发生=1，不发生=0），以2.1中有统计学意义的变量为自变量，采用逐步回归法（α入=0.05，α出=0.10），构建多因素Logistic 回归模型，结果显示，心肌梗死、冠状动脉中度病变、冠状动脉重度病变、TC 升高、LDL-C 升高是冠心病患者PCI 术后MACE 发生的独立 危 险 因 素（OR分 别 为 1.660、1.235、1.640、1.225、1.211，P均<0.05），LVEF升高、miR-150升高是冠心病患者PCI 术后MACE 发生的保护因素（OR分别为0.925、0.732，P均<0.05）。见表2。

表2 冠心病患者PCI术后发生MACE的影响因素分析

2.3 miR-150 对冠心病患者 PCI 术后 MACE 发生风险的预测价值 绘制ROC曲线评估血清miR-150对冠心病患者PCI 术后6 个月内MACE 发生风险的预测价值，结果显示，miR-150 预测冠心病患者PCI 术后 MACE 发 生 的AUC为 0.882（95%CI：0.832～0.933，P=0.000），最佳截断值为0.37，约登指数为0.71，此时的灵敏度、特异度分别为83.87%（26/31）、86.89%（106/122），正确率为86.27%（132/153）。

3 讨论

2018 年美国心脏协会报告显示，冠心病是心血管疾病患者死亡的首位病因［8］。PCI 是改善冠心病患者预后的重要手段，但研究表明，冠脉血管的平滑肌细胞重塑、缺血再灌注损伤等会增加PCI 术后MACE 发生风险，并进一步引发恶性心血管临床结局或者远期多脏器功能衰竭等，增加患者病死率［9］。早期预测冠心病患者PCI 术后MACE 发生风险，对制定溶栓、抗凝以及再次介入等针对性治疗措施具有重要参考价值。心肌酶谱以及冠状动脉介入造影检查等是评估PCI 后MACE 发生风险的常见方法，但灵敏度较低［10］。寻找其他灵敏度、特异度高的生化指标辅助预测冠心病患者MACE发生风险有重要临床意义。

miRNA 是进化过程中的内源性非编码小片段RNA，具有高度保守性，通过转录、基因沉默等在细胞的增殖、分化、凋亡、修复以及新陈代谢过程中发挥调控作用［11］。研究证实，miRNA 对高温、强酸、强碱等异常条件均不敏感，可在血液中稳定存在，并在多种疾病发生发展过程中存在差异性及特异性表达［12］。研究显示，miRNA 异常表达参与了心血管疾病的发生发展［13］。刘静等［14］发现，miR-140-3p、miR-142-5p 在冠心病患者中表达异常，并与心血管结局及死亡密切相关。王娓娓等［15］的研究显示，心肌缺血再灌注损伤后的心肌细胞中miR-140 低表达，抗凋亡治疗后其表达上调，由此证实miR-140 可作为评估心脏疾病治疗效果的指标。徐测梁等［16］研究表明，miR-142-5p 参与了急性冠脉综合征的心肌炎症和心肌损伤过程，可作为临床诊断该疾病的重要指标。GAO 等［17］研究发现，miR-126 通过参与血管生成、内皮细胞损伤等过程而引发急性心血管病变。miR-150 是位于人体第19 号染色体上的RNA 家族单链小分子，长度为22 个核苷酸，在淋巴结和脾脏中特异性表达，参与了肝细胞分化、免疫系统发生等生理过程。研究显示，miR-150 异常表达参与调控乳腺癌、肺癌等发病过程，并与临床病理特征密切相关，可作为反映恶性肿瘤进展及评估病情严重性的重要指标［18］。ZHANG 等［19］研究表明，miR-150 表达下调与心肌纤维化和心室重构密切相关。关于miR-150 与冠心病患者PCI术后发生MACE 的关系，目前研究尚不多见。

本研究发现，冠心病患者TC、LDL-C 水平升高，LVEF、miR-150水平降低，并且MACE组上述指标异常程度较非MCAE 组更明显。同时，MACE 患者心肌梗死比例高于非MACE 组，冠脉病变程度较MACE 组严重。上述结果提示MACE 患者存在不同程度脂代谢紊乱及心功能损伤。采用Logistic 回归校正可能的混杂因素后，心肌梗死、冠状动脉中度和重度病变、TC升高、LDL-C升高是冠心病患者PCI术后MACE发生的独立危险因素。其中心肌梗死患者MACE 发生风险是不稳定型心绞痛患者的1.660倍。心肌梗死患者存在较为严重的心肌细胞坏死，并且冠状动脉血管缺血程度较为显著，因而PCI 术后患者更易发生MACE。冠状动脉病变程度越严重，患者发生MACE的风险也越高，较轻度病变患者而言，中度和重度患者OR分别为1.235、1.640。提示冠脉病变越严重冠心病患者动脉粥样硬化程度越高，斑块破裂风险大，进一步加重心肌缺血。冠心病患者TC升高和LDL-C升高提示患者存在血脂异常，而血脂改变又可导致血管粥样硬化，形成斑块，并进一步破裂形成血栓，堵塞血管，诱发心力衰竭等MACE。本研究中，TC、LDL-C 每升高 1 mmol/L，MACE 发生风险分别增加1.225、1.211 倍。因此，临床尤其需注意血脂升高的冠心病患者。这类高危人群的血脂水平需控制在合理范围，以降低MACE的发生率，改善患者预后。此外，结果还显示，LVEF升高和 miR-150 升高是 MACE 保护因素，LVEF 升高提示心功能得到改善，患者病情恢复较好。miR-150每升高0.1，MACE 发生风险降低26.8%，可能是因为miR-150 表达下调可抑制抑炎因子表达，增强促炎因子表达，激活炎症反应，导致促炎细胞因子水平升高，加重患者病情。ROC 曲线分析结果表明，miR-150 能预测冠心病患者发生MACE 的风险，从而指导临床早期发现高危人群，尽早采取针对性干预措施。

综上所述，血清miR-150 在冠心病患者中表达降低，可作为PCI术后预测MACE发生的指标之一。