献血者红细胞意外抗体检出率、反应强度和特异性分析

朱红芹 林红

献血者血液中的意外抗体可导致献血者血型鉴定困难、医院交叉配血不合，甚至可引起溶血性输血反应。《全血和成分血使用》（WS/T 623-2018）中规定血浆及冷沉淀凝血因子的输注原则之一为献血者意外抗体筛查阴性可直接进行ABO相容性输注。意外抗体筛查工作是在血站进行还是在医院进行，并未做出明确规定。现将近3年来本中心无偿献血者意外抗体检出、反应强度和特异性等进行分析，研究制定献血者意外抗体筛查策略，现报告如下。

材料与方法

1 研究对象 2017年01月～2019年12月本中心捐献血液的18～60周岁无偿献血者作为研究对象，共201741人捐献血液，血液标本294321份。

2 仪器与试剂 伽利略Galileo NEO全自动血型仪（美国Medson公司），光学显微镜(日本Olympus公司)，卡式孵育箱（瑞士DiaMed公司）、卡式离心机（瑞士DiaMed公司）。抗-A、抗-B（美国Immucor公司、长春博德生物技术有限公司、上海血液生物医药有限公司）、抗-AB(荷兰Sanquin公司)、ABO试剂红细胞（美国Immucor公司、上海血液生物医药有限责任公司）；抗-D (美国Immucor公司、上海润普生物医药有限责任公司、美国BioRad公司)、抗-C、抗-E(英国Millipore公司)、D2(荷兰Sanquin公司)、D3(美国Immucor公司)、D4（上海血液生物医药有限责任公司）；筛选细胞、国产谱细胞、抗-M、抗-N、抗-P1、抗-H、抗-IgG、C3d（上海血液生物医药有限责任公司）；进口谱细胞（美国Medson公司、荷兰Sanquin公司）；微柱凝胶卡（西班牙Diagnostic Grifols公司、瑞士DiaMed公司）等，所有试剂均在有效期内使用。

3 方法

3.1 血型定型方法：使用伽利略全自动血型仪U型微板法进行ABO血型正、反定型（加O型标准红细胞）、RhD定型。

3.2 意外抗体确认和抗体特异性鉴定方法：确认RhD阴性、ABO正反定型不符、O细胞凝集及医院反馈有意外抗体的血液标本，使用筛选细胞和/或谱细胞试管法盐水立即离心（IS）、4℃增强、37℃孵育、间接抗球蛋白试验（IAT）确认及鉴定。对检出特异性意外抗体的红细胞进行抗原确认，通过自身对照排除自身抗体存在。

4 统计学处理 方法应用SPSS 23. 0软件进行统计学分析。计数资料比较采用卡方检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

1 不同性别意外抗体的检出率比较 2017～2019年共有201741人次（重复献血多次只算1人次）献血，587人检出意外抗体，检出率0.29%。男性献血者意外抗体检出率为0.22%，与女性献血者0.40%相比，差异具有统计学意义（χ2=48.325，P＜0.05）。RhD阴性献血总人数1272人，检出意外抗体20人，检出率1.57%；同样地，女性意外抗体检出率（3.16%）高于男性献血者的0.52%，差异有统计学意义（χ2=13.659，P＜0.05），见表 1。

表1 总献血人群及RhD阴性献血人群意外抗体的检出率统计（人）

2 不同年龄段献血者意外抗体的检测率比较2017～2019年共采集294321人次献血者血液，共检出意外抗体623例次，检出率0.21%，见表2。其中年龄小于25岁年轻献血者意外抗体检出率最高（0.27%），超过56岁年长献血者的意外抗体检出率最低，不同年龄组献血者意外抗体检出率比较，具有统计学意义（χ2=40.012，P＜0.05）。

表2 不同年龄段献血者的意外抗体检出情况（人次）

表3 意外抗体特异性及反应强度统计（例次）

3 抗体特异性及反应强度分析 对检出的623例意外抗体的特异性及反应强度进行统计，见表3。检出的623例意外抗体中，自身抗体2例，同种抗体375例，包括ABO血型系统11例，H血型系统1例，Rh血型系统18例，MNS血型系统115例，P血型系统205例和Lewis血型系统25例。其中，P、MNS和Lewis血型系统共计占全部检出的同种抗体的92.00%（345/375）。另外有246例意外抗体未鉴定出特异性，并且反应强度为1+以下比例为66.26%（163/246）。

讨 论

献血者抗体筛查的必要性一直是有争议的话题。江苏省血液中心一直对全部RhD阴性献血者标本进行抗体筛查，并从2012年开始使用全自动血型仪进行ABO、RhD定型，反定型时增加O型细胞，增加了意外抗体的检出几率。我们对近3年来检出的意外抗体进行了回顾性分析，发现本地区意外抗体在检测频率、特异性和实验反应强度方面均有不同于其它地区的特点。

按人统计检出率为0.29%，按人次统计检出率为0.21%，均高于文献报道的漯河0. 07%[1]、南阳0.05%[2]、苏州 0.084%[3]、安 阳 0.196%[4]、 低 于泰州0.37%[5]、广州0.48%[6]。这可能与献血人群的地域分布、遗传多样性、不同筛查方法等有关。从性别来看，女性献血者意外抗体检出率0.40%明显高于男性献血者检出率0.22%，同样地，RhD阴性女性献血者意外抗体检出率远高于男性献血者，这与泰州、广州、石家庄[5-7]等地情况一致，女性意外抗体检出率高于男性已成为共识。这种情况与女性自身产生红细胞抗体的能力强于男性，妊娠增加免疫应答有关[8]。因此，为了降低输血反应，有些国家女性献血者的血浆不输注给受血者[9]。

在检出意外抗体的587名献血者中有237名为长期坚持献血的重复献血者，仅有1次检出意外抗体的重复献血者为196人。每次献血均被检出抗体的献血者有26人，其他重复献血者不能每次均被检出，可能与反应强度低，O细胞凝集不明显，筛查时全自动血型仪未判断阳性有一定的关系，也可能与献血者抗体的持续、消逝时间有关。除了抗-A1、抗-B，同一献血者重复检出的抗体特异性并不相同，由于抗体存在时间的差异，同时不同批次筛选细胞所携带的抗原种类也不相同，也是影响抗体是否检出以及特异性不一致的另一个原因，限制了对献血者抗体持续、消逝时间的探究。而有研究数据显示，在确定的最常见特异性中，发现抗-D最持久，而抗-M最短暂[10]。

从表2不同年龄段献血者的意外抗体检出情况分析，18～25岁人群的检出率最高，56～60岁人群检出率最低，这与文献报道漯河地区[1]、周口地区[11]检出率随年龄增长而升高不一致，与海南地区报道的检出率相一致[12]。这可能与筛查方法有关，虽然统计了医院反馈的意外抗体阳性样本，但单采血小板ABO同型输注不进行ABO配型，有可能存在意外抗体未被发现；也可能与本中心献血者人群以青年18～35岁为主，导致这个年龄段检出率增高；也可能与统计方法有关，重复检出者多集中在18～35岁，因这部分献血者在不同年龄献血，未进行扣除。

对抗体的特异性进行分析，表3显示检出Rh血型系统抗体18例，反应强度2＋以上比例为77.18%，其中17例为女性。红细胞上Rh复合物存在丰富的抗原表位，免疫原性仅次于ABO系统，Rh抗原强度为D＞E＞C＞c＞e。本中心对所有确认RhD阴性献血者，均须使用筛选细胞筛查意外抗体，如筛查阳性，须对红细胞进行两次洗涤处理，才能发往医院供患者使用。

对红细胞上A/B抗原水平明显低于常见表达水平（如A3或Ax）的样本采用吸收放散实验方法确认，检出ABO血型系统抗体11例。检出1例类孟买型，该献血者正反定型不符，与抗-H试剂不凝集，经意外抗体筛查和验证检出抗-H抗体，经吸收放散试验未检出B抗原，鉴定Lewis血型为Le（a-b+），PCR-SSP分析，基因型为B101/O02，判断该献血者为Bmh类孟买血型。类孟买血型较为罕见，国内相关报道也以个案为主。检出1例抗-Mur，反应较弱，4℃增强试验才能检出，抗-Mur能够引起严重的溶血性输血反应和新生儿溶血病（HDN），被认为是有临床意义抗体。

抗-P1一般为冷抗体，血凝反应很弱，大部分P2均有抗-P1[13]，本调查也显示确定特异性的各类抗体中，抗-P1中反应强度≤1+，占比最大（38.05%），罕见抗-P1引起溶血性输血反应和HDN的报道。本调查中Lewis系统以抗-Leb为主（90.9%），多为冷抗体，37℃没有临床意义。偶见Lewis系统抗体在37℃有活性且引起溶血性输血反应的报道[14]。间接抗球蛋白试验阳性的抗-M引起HDN[15]。因此，对这部分抗体以及未确定特异性的抗体需要进行37℃间接抗球蛋白试验。抗-M、抗-P1、Lewis抗体及未鉴定出特异性共计590例，其中220例间接抗球蛋白试验阳性，对这部分37℃反应的抗体需要引起关注。

医院反馈的交叉配血不合血液均为RhD阳性血液共计24例，经鉴定5例IgG型抗体：抗-E，抗-Ce，IgM型抗体中14例具有37℃活性。分析3种途径数据提示，导致反定型O细胞凝集的意外抗体主要为盐水反应性抗体，如抗-M、抗-P1、抗-Leb，结合医院反馈的均为RhD阳性血液，如用反定型O细胞作为意外抗体的筛查方法容易遗漏一部分具有临床价值的抗体，存在局限性。有报道木瓜酶法[16]、单特异性的抗人球蛋白试剂[17]、适用于血型仪的Capture-R法[18]，可增加IgG型抗体的检出率，同时避免检出临床意义不大的IgM型抗体。

《全血及成分血质量要求》没有明确规定血液中不能含有意外抗体，而部分医院参照《全血和成分血使用》对患者使用的血浆及冷沉淀凝血因子进行意外抗体筛查。为了保障患者用血安全，IgG型抗体和一部分37℃反应具有临床意义的IgM型抗体均有检出的必要性。另一方面，因同一献血者的血浆和冷沉淀凝血因子同时发到同一医院的概率极低，医院如对血浆及冷沉淀凝血因子全部进行筛查，必将导致同一献血者的血液被重复筛查。

我国血站提供临床医院的血液制剂未区分性别，因此需要考虑对所有献血者血液进行意外抗体筛查，尤其是女性献血者的血液。使用筛选细胞进行意外抗体筛查及谱细胞进行确认，费用较高，为避免血站和医院重复进行意外抗体筛查，增加患者负担，建议由血站对献血者血液标本进行意外抗体筛查和确认，并对意外抗体筛查和确认方法进行验证和遴选，以提高具有临床意义抗体的检出率。另一方面，可参照已经成功开展的传染病标志物筛查反应性献血者归队方案，屏蔽筛查出的具有临床意义意外抗体的献血者，在一定的屏蔽期后，依据拟捐献血液品种，确定筛查节点。如捐献单采血小板及血浆，需先筛查后采集；捐献全血可先采集，单独筛查。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突