核酸检测与酶免检测平行筛查血液在基层血站的应用效果

李鹏飞

（长春市中心血站，吉林 长春 130000）

0 引言

输血传播病原体筛查是保障血液和血液制品安全的重要的手段，能够对输血相关传染病进行控制和预防，受到了全球医学研究领域的广泛关注[1-2]。随着医学技术的进步和发展，基层血站试剂材料质量得到了明显提高，但由于传统的酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）（简称酶免）存在检测“窗口期”、抗体抗原蛋白结构变性问题，影响诊断结果的可靠性，因此有必要探讨更加科学的检测方法。核酸检测（Nucleic acid amplification testing，NAT）是一种新兴的检测方法，主要针对RNA或DNA进行检测，可减少“窗口期”、“病毒变异”等原因引发的漏检情况，与酶免检测形成互补，能够有效降低输血传播疾病风险，保障输血安全[3-4]。为了探讨筛查血液传播疾病的有效方法，本文就核酸检测与酶免检测平行筛查血液在基层血站的应用效果进行了研究。

1 资料与方法

1.1 资料来源。选取本基层血站2019年1月至2019年10月无偿献血者101959例。献血者男51973例，女49986例；年龄18-54岁，平均（30.28±2.16）岁。献血者血液采集时留取酶免检测和核酸检测两份血标本。

1.2 方法。采集血标本后保存在恒温冰箱中，温度设置2-8℃，采样4 h后在低温下行离心处理，离心后在72 h内进行核酸检测。采用全自动加样仪（DECAN）和全自动酶免分析仪（FAME）进行酶免检测，对于乙肝表面抗原（Hepatitis B surface antigen，HBsAg）、HIV抗体1型和2型（HIV antibody types 1 and 2，抗-HIV-1/2）、丙型肝炎病毒抗体（Hepatitis C virus antibody，抗-HCV）阴性样本，再采用全自动核酸提取仪（STAR）、实时荧光定量PCR仪（ABI7500）实施核酸检测，检测试剂源于上海科华生物工程股份有限公司。

1.3 观察指标。①统计检测结果。②对核酸检测阳性标本展开分项定量检测、乙肝血清学补充试验检测，统计血清学模式。

1.4 统计学分析。将参与研究101959例无偿献血者的相关数据录至SPSS 23.0，以t检验定量资料（），以χ2检验定性资料（%、n），P＜0.05，表明有差异。

2 结果

2.1 核酸检测与酶免检测结果分析。101959例无偿性献血者的血标本经酶联检测阳性标本数779例，阳性检出率0.76%（779/101959），其中阴性标本经核酸检测后阳性标本数59例，阳性检出率0.058%（59/101180），详见表1。

表1 核酸检测与酶免检测结果分析（n，%）

2.2 分项定量和乙肝血清学补充试验结果。59例核酸检测阳性标本经分项定量检测后，发现定量测定HBV DNA阳性43例，HCV RNA阳性11例，HIV RNA阳性5例但重复检测均为阴性。43例定量测定HBV DNA阳性标本进行乙肝血清学补充试验，经酶免筛查HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb，最终确认阳性标本31例，不确认12例，确认阳性率为72.09%，31例标本乙肝血清学模式详见表2。

3 讨论

临床中艾滋病、乙型肝炎、丙型肝炎等疾病均可通过血液途径传播，威胁人体生命健康。传统的酶免法在血液筛查中应用广泛，但受病毒抗原、抗体蛋白结构变异等因素影响，导致“窗口期”漏诊情况时有发生，而应用核酸检测技术能够直接通过使用分子诊断技术进行病原体核酸检测，可提高血液传播疾病的筛查水平，与传统的血清学检测方式形成互补优势，降低输血传播疾病漏诊风险[5]。相关报道显示，核酸检测能有效缩短病毒检测窗口期，检出隐匿性病毒感染、病毒变异株等，保障血液安全[6-7]。王庆敏等[8]实践后发现，核酸检测与酶免检测可形成互补，减少输血感染风险，可行性良好。赵红娜等[9]对184095份标本研究后发现，核酸检测可在受检者病毒感染后数天内有效检出血标本中含有的微量病毒核酸，缩短“窗口期”，降低漏诊风险。

表2 乙肝血清学补充试验结果

经本文研究发现，酶免法筛查HBsAg、抗-HCV、抗-HIV-1/2后发现，阳性检出率为0.76%，但经核酸检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV-1/2阴性者发现，阳性检出59例，阳性检出率0.059%。分析后可知，临床中使用核酸检验可利用核酸扩增检测技术，在分子诊断原理的基础上对病原体核酸展开测定，主要包括核酸提取、扩增和检验3个环节，并以病毒RNA或DNA为对象进行检测，从酶免检测阴性标本中筛选出“隐匿性”感染病例、“窗口期”病例，有效排除经输血途径传播的病毒性病症，提高用血安全性。本文研究发现，对于59例核酸检测阳性献血者的血标本实行分项定量、乙肝血清补充试验检测后，确认HBV感染31例。分析后发现，乙型肝炎是国内流传广泛的常见传染性病症，通过输血感染的乙型肝炎病例呈上升趋势，在血液筛查中应用核酸检测能够与酶免检测形成互补优势，发现HBV感染病例，同时通过乙型肝炎血清试验检查、分项定量检测，可进一步明确HBV感染患者的血清学模式，为基层血站明确患者病情提供重要参照。但在本次研究中仍有12例未能确认的HBV感染病例，初步分析导致此类情况发生的原因如下：操作人员操作不当；标本送往实验室检测途中血样保存、运输不当；提取、扩增检测属于两项独立的开放式模块，中间存在人工操作步骤，有人为干扰因素；受仪器状态、实验室环境、检验人员操作水平等方面因素的影响。比如，当待检环境温度过高时，会导致血标本中含有的核酸物质分解；送检标本病毒被稀释或原袋血浆内保养液对低病毒载量的稀释；血标本内病毒颗粒呈泊松分布，发生病毒浓度不均匀情况；在检测样本中存在隐匿性肝炎、变异病毒株；采血、血样保存和检验操作中发生血样污染、仪器污染等情况；部分献血者血浆中抗原抗体处于高表达状态，病毒载量极低，影响检测结果。

综上所述，核酸检测与酶免检测平行筛查两种方法可以相互补充，预防血液传播的病毒性疾病，降低输血传播疾病残余风险，保障输血安全，具有重要的临床应用与推广价值。但在实际应用中，核酸检测对实验操作、标本处理、实验室环境等方面的要求较为严苛，因此仍需规范实验室检验程序，保障检测结果的可靠性。