基于HPLC主要成分含量分析的安徽地产半夏质量评价

刘宏　张颖　秦亚东

摘要：目的：利用高效液相测定全国主要产区半夏中的琥珀酸、胸苷、腺苷、鸟苷及肌苷含量，依此为依据，评价安徽地产药材半夏质量，并建立和优化半夏质量评价方法。方法：Agilent SB-C18色谱柱，甲醇-0.1%乙二胺水溶液，梯度洗脱，流速0.8mL·min检测波长249nm，进样量10μl，柱温为25℃。结果：不同产地半夏琥珀酸、胸苷、腺苷、鸟苷及肌苷含量差异大，安徽产半夏上述成分含量较高且相对均衡。结论：安徽地产药材半夏质量优良，可以作为优质种质资源进行培育和栽培;同时，该方法稳定可靠，简便易行，可用于半夏质量控制。

关键词：半夏;安徽;成分;含量

中图分类号：R917 文献标识码：A

随着现代中国社会老龄化的到来，社会对中药材及中成药的需求越来越大，中药对一些慢性病及疑难杂症往往有一些独到的疗效，也越来越引起社会的广泛关注，而中药饮片的质量无疑最为关键，野生资源减少，种植产品占比增加，而种植产品质量往往与产地、种源、采收加工的规范性密切相关，其中不同产地的质量评价尤为重要。

半夏，来源于天南星科植物半夏Pinellia ternata（Thunb.）Breit.的干燥块茎。半夏性温、味辛，有一定毒性，具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结的功效。现代药物分析证明，半夏中主要含有鸟苷、肌苷、胸苷等多种核苷类成分，还有有机酸、生物碱、黄酮、氨基酸类等成分，且不同产地、加工炮制品，各类成分含量差异较为明显。现代药理研究表明，半夏主要有镇咳祛痰、止呕的功效，此外，在胃溃疡、凝血、抗肿瘤、抗氧化、抗菌、扛癫痫等方面也有一定效果。半夏药材在全国分布极为广泛，甘肃、河北、安徽、贵州、新疆、湖北、江西均有分布，其中以甘肃西和县产量最高，约占全国产量的三成，但野生资源日益匮乏，一些优良品种甚至难寻踪迹，安徽作为半夏的历史产区，历来品质较好，如阜南和颍上的“颍半夏”，贵池的“汇半夏”，舒城的“舒半夏”，特别是阜南焦坡的“焦半夏”，历史上都非常有名，本文试图从半夏中四种主要核苷类成分胸苷、腺苷、鸟苷、肌苷及一种有机酸琥珀酸的含量出发，与全国主产区半夏质量进行对比，对安徽地产半夏的质量做出评价。

1仪器与试药

1.1仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪（G4212B型DAD检测器，G1312B型二元泵，G1367E型自动进样器，G1322A型脱气机）;Discovery DV215CD分析天平（美国奥豪斯公司）;Sigma 2-16KL高速冷冻离心机（德国Sigma公司）;KQ250型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;XL-130多功能粉碎机（永康市小宝电器有限公司）。

1.2试药

对照品：胸苷（批号：101215-201401），购自中国食品药品检定研究所，腺苷（批号：200305）、鸟苷（批号：200917）、肌苷（批号：200814）、琥珀酸（批号：200411）、均购自北京北纳创联生物技术研究院。甲醇为色谱纯，购自美国TEDIA公司，乙醇、盐酸、乙二胺为分析纯，水为娃哈哈纯净水。

八个样品为贵池野生品种（S1）、舒城种植品种（S2）、阜南种植品种（S3），以上三个品种为自采品种，甘肃野生品种（S4）、甘肃种植品种（S5）、河北种植品种（S6）、贵州野生品种（S7）、湖北野生品种（S8）均购自亳州药材市场。以上品种经安徽中医药高等专科学校赵宝林教授鉴定为Pinellia ternata（Thunb.） Breit.的块茎。

2方法与结果

2.1色谱条件

Agilent SB-C18色谱柱（4.6mm×250mm，1.5μm）;流动相A为甲醇，B为0.1%二胺水溶液，梯度洗脱。0～10min，B相99.9%～99%;10～15min，B相99%～95%;15～25min，B相95%～90%;25～35min，B相90%～82%;35～45min，B相82%～70%;45～60min，B相70%～50%。流速0.8mL·min，检测波长249nm，进样量10μl，柱温为25℃。在上述色谱条件下，5种对照成分均可以得到很好的分离，分离度均大于1.5，理论塔板数均大于10000，见图1及图2。

2.2溶液制备

2.2.1供试品溶液制备

取上述八个品种半夏，粉碎，过60目筛，分别精密称取约2.5g，置于具塞锥形瓶中，以质量分数0.5%的盐酸乙醇（70%）溶液（500ml乙醇+166.5ml水+17ml浓盐酸）50ml为溶剂，精密称定质量，超声提取45min（ 250W，40KHz），放置片刻，再次精密称定质量，用上述溶剂补足减失的质量，摇匀，放置30min，取上清液适量，离心10分钟（10000转/分钟），上清液经0.22um微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

2.2.2对照品溶液制备

分别精密称取胸苷8.2354mg，腺苷8.6485mg，鸟苷9.0124mg，肌苷8.8321mg，琥珀酸15.2314mg，置于10ml容量品中，加70%甲醇溶解并定容至刻度，作为对照品贮备液。取上述对照品贮备液各1.0ml，转移至100ml容量瓶中，分别加甲醇稀释至刻度，经0.22um微孔滤膜过滤，即可获得各对照品溶液。

2.2.3混合对照品溶液制备

取2.2.2項下的对照品贮备液各1ml，转移至100ml容量瓶中，混合后加甲醇定容至刻度，摇匀，经0.22um微孔滤膜过滤，即得。

2.3方法学考察

2.3.1线性关系和线性范围考察

取2.2.2项下五种对照溶液，分别取2.0、1.5、1.0、0.5、0.25、0.1ml，加甲醇0、0.5、1.0、1.5、1.75、1.90ml，制成各标准溶液的梯度浓度进样溶液，按照2.1项下方法进行试验，每个样品进样3次，计算各成分峰面积平均值，再以溶液质量浓度为横坐标，吸收峰峰面积为纵坐标，建立回归方程，表明各成分在各自浓度范围内均具有良好的线性关系，结果见表1。

2.3.2精密度试验

取2.2.3项下的混合对照品溶液，按照2.1项下的方法进行试验，进样量10ul，平行试验6次，分别记录各成分峰面积，计算峰面积的相对标准偏差（ RSD，n=6），琥珀酸、肌苷、鸟苷、腺苷、胸苷的RSD分别为1.21%、0.58%、1.04%、0.63%、0.84%，表明仪器精密度良好。

2.3.3重复性试验

取安徽省贵池县所产野生半夏（S1）品种，按照2.2.1项下方法，平行制备6份供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24小时测定，计算琥珀酸等上述五种化合物色谱峰面积，计算RSD，琥珀酸、肌苷、鳥苷、腺苷、胸苷的RSD分别为1.54%、1.05%、2.25%、1.73%、0.95%，1.69%，表明该方法稳定性良好。

2.3.4加样回收率试验

取安徽贵池野生品种6份，每份2.5g，按照2.2.1制备提取液，取试液10ml，加入2.2.2项下的对照品贮备液各50ul，混合均匀，测定各成分加样回收率，结果见表2。

2.4样品有效成分含量测定

对上述8批次不同产地半夏中琥珀酸、肌苷、鸟苷、腺苷及胸苷的含量进行测定，每批平行测定六次，取各成分峰面积平均值，代入回归方程，最后根据提取液体积，计算出不同产地半夏中五种成分的含量，结果见表3。

3结果与讨论

经过研究发现，不同产地各成分含量差别非常大，最高最低含量相差倍数为：琥珀酸5倍左右，肌苷6倍左右，鸟苷约3倍，腺苷19倍，胸苷约8倍。其中贵州所产半夏，肌苷和腺苷含量明显低于其他产地，但琥珀酸含量最高，湖北野生品种腺苷含量最高，其他成分含量也不错。甘肃所产两个品种的各成分含量比较均衡，目前市场上甘肃产半夏占比较大，从试验结果上也得到了验证。而安徽的三个产区，琥珀酸和腺苷的含量明显高于甘肃产半夏，肌苷和胸苷含量略低与甘肃产半夏，鸟苷的含量低于甘肃产半夏，且五种成分的含量在8个产地中也相对均衡，说明安徽地产半夏具有很好的种植前景，其品种可以作为半夏的优质种质资源加以研究和培育。研究还表明，野生品种相对于种植品种，各成分含量最高的品种大多数为野生品种，但由于取样数量相对较少，该结果是否具有代表性，是否表明半夏药材在种植过程中会产生品质下降，有待扩大试验批次和产地进一步研究。

本试验所用的色谱条件比较简单，通用性强，测定方法简单快捷，试验结果稳定性好，也为半夏药材种植、采收、炮制加工、存储时进行质量检测提供了一个新的选择。

作者简介：刘宏，男，副教授，主要从事中药有效成分研究;张颖，女，副教授，主要从事中药成分分析研究。