中药驱螨软膏剂癣螨灵的制备及质量评价

李思琪，程嘉奇，何先林，李龙娇，薛小腧

(1.重庆三峡职业学院，动物科技学院，重庆 404155； 2.重庆幼儿师范高等专科学校，重庆 404047)

螨病在西南地区是动物体表高发寄生虫病，据报道，西南地区养殖场内螨病的感染率高达60%以上[1]。螨病的感染将导致动物体表大面积脱毛，皮肤瘙痒，动物表现剧烈不安，食欲不振，会在各处进行摩擦，导致皮肤损伤。从而对动物生长、发育、繁殖造成极大危害以及养殖户的养殖成本带来影响。传统治疗药物多为化学治疗药，长期使用过程中，能导致蓄积中毒，并且引发动物产品安全性问题，从而迫切需要新药品的研发，降低西南地区螨病的感染率[2]。

在中医上，螨虫病被称为疥癣、疥疮，是一种人与动物常见皮肤病。中医认为疥癣的感染虽在体表，但与内在脏腑、气血有密切关系。若脏腑功能失调，经络不利，气血壅滞，湿、热、虫三邪乘机侵入，就会引起局部病变[3]。《黄帝内经》中提出风为百病之长，皮肤为人体防御外界的第一道屏障。故风邪是皮肤病感染的第一个致病因素。《素问·阴阳应象大论》中明确指出了出汗后，毛孔打开、腠理疏松、湿邪侵袭肌肤所致容易引起皮肉经脉疾病，所以湿邪也是导致疥癣发生的一个重要因素[4]。除此以外，肺火和心燥，导致气血津液丧失，也会引起皮肤病问题。而螨虫病因为瘙痒，动物常不停挠擦，皮肤会有溃烂，结痂，甚至皮肤出血，坏死等病理现象出现，故也需修复皮肤屏障。因此，在选用驱螨中药中，主要以杀虫抑菌、祛风、润燥除湿、清热解毒、活血生肌、润滑皮肤作为中药筛选理论。

考虑到规模化养殖动物数目众多，外敷法方便实施，能节约人力成本，并且制备工艺条件较为简单，便于推广。因此，在选用制备方法时，主要以软膏剂作为制备剂型。本试验中以苦参、百部、大风子、蛇床子、老鹳草、羊毛脂、凡士林等为主要处方，并进行软膏剂型的开发，以研制出一种易于涂抹、透气性好、疗效确切、性质稳定的中药软膏剂型。同时，根据《中华人民共和国兽药典》(2015版)关于软膏制剂的质量要求，对癣螨灵软膏剂的制剂工艺、质量标准、制剂稳定性等进行了科学研究，为临床动物螨病防治提供新型安全有效药物治疗奠定了试验依据。

1 材 料

1.1 药品与试剂 苦参、百部、大风子、蛇床子、老鹮草均购自北京同仁堂药业公司；硬脂酸、单甘脂、凡士林、羊毛脂、液状石蜡、氮酮、甘油、三乙醇胺、尼铂金乙酯、丁二醇均购自山东优索化工科技有限公司；无水乙醇购自天津大茂化学试剂厂。

1.2 实验动物 选取健康兔只16只，雌雄各半，体重(2.5±0.2)Kg；豚鼠6只，雌雄各半，体重(250±30)g，均由重庆医科大学实验动物中心提供。

1.3 实验仪器 磁力搅拌器购自上海医械机厂；旋转蒸发仪购自北京莱博泰仪器股份有限公司；纯水仪购自华创有限公司；电子恒温水浴锅购自力辰科技有限公司；电子天平购自上海蒲春有限公司。

2 制备方法

2.1 中药组方比例 前期通过正交试验数据分析，在中药组方比例为大风子：百部：苦参：蛇床子：老鹮草1∶1∶1∶1∶1(低比例组)，1∶2∶2∶2∶2(中比例组)，1∶2∶2∶3∶3(高比例组)时，药物浸膏得出率最高，成分析出值最大，且无毒性。通过将三组比例在临床感染疥螨兔上分组治疗比较，发现按照大风子10份，苦参、百部20份，蛇床子、老鹮草30份的组方，临床疗效最佳，皮肤愈合快，具有较高安全性。具体数据见下表1。

表1 复方制剂不同比例对兔疥螨病临床治疗效果对比试验结果Tab 1 Comparative test results of different ratios of compound preparations in the clinical treatment of rabbit scabies

2.2 中药浸膏制备 将五种中药按照组方称取，分别打成粉，过40目筛，将苦参、百部、老鹮草浸泡于蒸馏水中4 h，而大风子、蛇床子具有挥发油成分，浸泡于乙醇中更利于成分析出，分别浸泡于65 %乙醇中4 h。按1∶1比例分别稀释煎煮3次，每次1 h，过滤，合并滤液，用1倍量无水乙醇，水提醇沉，静置过夜。待分层后，取其上清液，置于旋转蒸发仪上，85 ℃浓缩至半流体稠膏(50%)，然后将半流体稠膏置于80 ℃水浴锅中加热至稠膏。稠膏性状以玻棒取浓缩药液滴于干燥牛皮纸上，滴膏呈现珠状，不扩散。测定相对密度为1.2～1.3 g/mL。具体中药浸膏制备方法见图1。

图1 中药成分提取流程图Fig 1 Flowchart of extracting traditional Chinese medicine ingredients

2.3 中药软膏剂基质制备 制备中药浸膏成分分析，油类成分较重，故癣螨灵软膏采用O/W剂型作为基质。按文献方法[5]称取硬脂酸120 g、单甘脂35 g、凡士林25 g、羊毛脂60 g、液状石蜡60 g、水溶性氮酮20 mL(2%)、甘油35 g作为油相，三乙醇胺4 g、尼铂金乙酯1 g、丁二醇70 mL(7%)，1000 mL蒸馏水作为水相。将油相成分混合置于容器内，水浴加热至完全融化，并于水浴锅70 ℃内保温；将三乙醇胺、尼铂金乙酯、丁二醇加入蒸馏水中，加热至完全溶解。将水相缓慢倒入油相中、用磁力搅拌器搅拌均匀直至冷凝，置于冰箱5 ℃冷藏备用。

2.4 中药软膏剂处方 称取中药浸膏25.0 g，软膏剂基质100 g作为软膏比例。将软膏剂基质取出，80 ℃水浴融化，搅拌均匀后加入中药浸膏，边加边玻棒搅拌，至乳化完全，放置常温凝固即得。

3 质量检测评价

3.1 稳定性检查

3.1.1 离心试验 将中药软膏剂放入离心管中，3000 r/min离心30 min后，取出观察有无分层及破乳现象。

3.1.2 耐寒试验 将中药软膏剂置于离心管内，置于-20 ℃冰箱24 h后，观察有无分层破乳以及色泽、均匀性改变等现象。

3.1.3 耐热试验 将中药软膏剂置于离心管内，置于50 ℃恒温箱6 h，观察有无分层破乳、霉败以及色泽、均匀性改变等现象。

3.1.4 加速试验 将中药软膏剂装入器皿内，置于温度(45±2)℃、相对湿度为75%的恒温培养箱中，连续放置3个月，定期考察、观察有无分层破乳、霉败以及色泽、均匀性改变等现象。

3.1.5 pH值检查 抽取中药软膏剂，用pH酸度计测定酸碱值。

3.1.6 粒度检查 将软膏剂在玻片上涂抹薄片，置于显微镜下观察。

3.2 中药软膏剂安全性研究 取体重(2.5±0.2)Kg白色健康家兔16只，雌雄各半，分为空白对照组1、空白对照组2、完整皮肤给药组、破损皮肤给药组。每组家兔耳部及颈部舔不到区域除毛，空白对照组2和破损皮肤组家兔在除毛区域用一次性刀片钝性刮破表皮组织，直至轻微渗血为止。每组家兔脱毛区均匀涂抹中药软膏剂，每天涂药2次，每次涂抹1 g。空白对照组1和2涂生理盐水2 mL作为阴性对照，并分笼饲养，连续用药7 d，并在除去药物后48 h内观察皮肤有无红斑和水肿现象，按照表2进行强度刺激、过敏和毒副反应评价[6]。

表2 皮肤刺激及毒副反应评价表Tab 2 Evaluation of skin irritation and side effects

同时，实验开始及结束24 h内，1周后分别称取每组家兔体重，分析不同组增重情况，主要公式如下：a.平均日增重(g)=(实验末平均体重-实验初平均体重)/实验天数。

4 结果与分析

4.1 稳定性试验结果 由表3和图2可知，本品外观性状为浅棕色，质地细腻，手感良好，易于推开和涂抹，稳定性良好，镜检下未见大颗粒存在。基本符合《中华人民共和国兽药典》(2015版)有关软膏项的要求。

表3 软膏剂质量标准分析表Tab 3 Ointment quality standard analysis

图2 癣螨灵软膏稳定性实验结果图Fig 2 Test results of the stability of Xian Manling ointment

4.2 动物安全性试验结果 刺激性试验结果：完整皮肤给药组受试兔未见充血和水肿，破损皮肤给药组受试兔皮肤未出现水肿，仅表现出轻微红斑，红斑在6 h内均消褪。

毒副作用结果：在试验1周内，受试兔精神良好，采食、尿液及粪便均正常，未见中毒或异常症状。

日增重结果：用药1周内，四组家兔体重变化均不显著(P>0.05)，且停药一周后，每组家兔体重没有下降。

5 讨论与结论

螨病通过接触传播，常引起畜禽大批量发病，甚至引起大面积死亡，严重影响畜牧业的健康发展。目前螨病的疫苗仍处于研究阶段，药物防治螨病仍是主要方式[7]。化学类药物如有机磷类、拟除虫菊酯类药物有一定治疗效果，但这些药物本身对动物有较大毒性。而抗生素类药物如伊维菌素、多拉菌素等，化学稳定性强，很难被分解，长时间残留在畜产品中，会导致动物及消费者食物中毒[8]。因此筛选具有杀螨活性的天然药物，并进一步制成外用制剂，表现出较高研究价值。

本软膏剂组方经过前期筛选[9]和离体驱螨实验观察[10]，所萃取的大风子液、苦参液、百部液、蛇床子液及混合液对离体螨虫均有一定杀灭作用，表明该制剂组方切实可行。在此基础上，加入活血为主的老鹮草，具有活血生肌及促进创面早日愈合功效，通过前期动物实验确定药物组成比例，所组结果表明，该中药混合液的临床疗效治愈率高，皮肤损伤愈合良好，确有临床疗效，但治愈率仍然未达到80%以上，且治愈所需时间较长，仍需进一步优化制备工艺以提升临床疗效。

鉴于在临床生产中使用喷剂耗费时间较多，且每日需用药3～5次，不利于在规模化畜禽养殖生产中使用，本研究利用羊毛脂和凡士林制作软膏剂，具有润泽保湿作用，减少创面刺激和维持创面安静，有利于创面愈合。本试验中软膏剂由中药萃取液和适当基质混合而成。基质为软膏的赋形剂，对软膏的质量和疗效发挥都具有重要影响[11]。软膏基质分为水溶性，油脂性和乳剂型基质[12]。本研究根据癣螨灵的主要药物成分及适应证以及根据前期基质筛选，最终选择乳剂中O/W剂型作为选择基质。

中药制剂虽有相对安全性，但中药成分十分复杂，部分成分可能引发过敏或毒副作用[13]。而软膏剂作为外用制剂，临床用药前毒理学评价主要考察其对皮肤刺激性[14]。但癣螨灵主要针对螨虫病例，螨虫感染临床典型病变就是皮肤破溃，结痂。因此，本试验中考虑到软膏剂涂敷皮肤破溃处，是否会从皮肤破溃处大量进入血液出现全身毒副作用，故通过构建家兔的皮肤破损模型,确定了各试验组家兔体重变化组间对比不显著，全身症状无异常，未出现毒性反应；同时，皮肤测试结果，只有破损皮肤组有轻微刺激表现，但在6 h内消退完全，与文献报告破损皮肤使用外用制剂的轻微刺激表现相一致[15]。由此可知，癣螨灵软膏剂具有较好的稳定性，良好的安全性，无明显毒副反应，具有深入研发前景。