威宁县生态养鸡禽流感和新城疫抗体监测及病原检测

皮 泉， 张 霞， 刘显明， 曾秀玲， 刘妍罕， 曾茂芹， 温贵兰， 文 明*

(1. 贵州省动物疫病预防控制中心，贵州 贵阳 550008； 2. 威宁县动物疫病预防控制中心，贵州 威宁 553100； 3. 贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025)

近年来，贵州省委省政府大力支持生态家禽养殖产业发展，明确将“生态家禽”列为助推贵州省脱贫攻坚“一县一业”特色优势产业之一进行发展，将生态家禽养殖作为贵州省脱贫攻坚工作的重点。生态养鸡是从农业可持续发展角度，根据生态学与生态经济学原理，将传统养殖方法和现代科学技术相结合，利用林地、草场、果园、农田、荒山、竹园、河滩等资源进行放养，生产无公害优质鸡。随着生态养鸡规模扩大，养殖时间延长，疫病问题也日益突出。为了解贵州生态养鸡主要疫病(禽流感、新城疫)的免疫状况和感染情况，2020年7月本项目组随机选取威宁县5个生态养鸡场，采集血清样品和棉拭子样品进行禽流感和新城疫免疫抗体监测及病原核酸检测，以期为生态养鸡场主要疫病的防控提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 检测样品选取养殖规模在2 000羽以上的生态养鸡场5个，每场随机抽取鸡血清样品100份，共500份；每场随机采集咽喉、泄殖腔双棉拭子(合并)样品20份，共100份。待检样品冷藏保存，送至贵州省动物疫病预防控制中心兽医实验室检测。

1.2 检测试剂与主要仪器禽流感H5亚型血凝抑制试验抗原(批号20191213)、禽流感H7亚型血凝抑制试验抗原(批号20191225)、新城疫血凝抑制试验抗原(批号20200510)，购自青岛易邦生物工程有限公司公司；禽流感病毒RT-PCR检测试剂盒(批号20191218)，购自哈尔滨国生生物科技股份有限公司；新城疫病毒RT-PCR检测试剂盒(批号ND20191230P)，购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司；病毒RNA提取试剂盒(批号NE0230)，购自北京雷根生物技术有限公司；荧光定量PCR仪(ProFlexTM)，Thermo Fisher公司产品。

1.3 禽流感与新城疫免疫抗体监测制备1%红细胞悬液以及禽流感H5亚型、H7亚型和新城疫4单位抗原悬液。取待检鸡血清样品按照《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T 18936—2003)、《新城疫诊断技术》(GB/T 16550—2008)血凝和血凝抑制(HA-HI)试验测定鸡血清中禽流感H5亚型、H7亚型和新城疫抗体效价。结果判定：HI效价≤23判为阴性；HI效价=24为可疑，需重复试验；HI效价≥25判为阳性。

1.4 禽流感与新城疫病毒核酸检测取鸡咽喉、泄殖腔棉拭子样品，按照病毒RNA提取试剂盒说明书提取总RNA，用禽流感病毒RT-PCR检测试剂盒和新城疫病毒RT-PCR检测试剂盒分别进行禽流感病毒和新城疫病毒核酸检测。结果判定：阳性对照Ct值≤30并出现特定的扩增曲线，阴性对照无Ct值且无特定扩增曲线，表示试验成立。检测样品Ct值≤30并出现特定的扩增曲线判为阳性；检测样品30

2 结果与分析

2.1 禽流感与新城疫免疫抗体监测结果由表1可见：禽流感H5亚型、H7亚型和新城疫免疫抗体平均HI效价分别为26.68、27.04、26.21，但鸡群免疫抗体效价的离散度较大(分别为31.06%、27.48%、25.56%)，表明免疫抗体整齐度较低。平均免疫抗体合格率分别为86.78%、95.64%、92.74%，达到国家农业农村部规定≥70%的要求。

表1 威宁县生态鸡禽流感和新城疫免疫抗体监测统计

2.2 禽流感与新城疫病毒核酸检测由图1、图2可见：100份鸡咽喉、泄殖腔棉拭子样品均未检出禽流感病毒和新城疫病毒特异性核酸，说明生态养殖鸡群无禽流感和新城疫感染。

3 讨论

3.1生态家禽养殖作为贵州省重点发展的农业农村产业革命支柱产业之一，全省各地出现了“经济林+鸡”“果林+鸡”“茶林+鸡”等多种生态养殖模式，但在养殖过程中常发生“重养殖轻防疫、抓发展轻环保、求产量轻安全”等问题。由于生态规模养殖环境消毒难度较大，疫苗免疫困难较多，接触野生动物机会较高，发生疫病的风险较大，因此本项目组选择有候鸟迁徙和栖息地(草海)、生态养殖疫病风险较大的威宁县进行生态鸡主要疫病(禽流感和新城疫)免疫抗体监测与病原核酸检测，以了解生态养鸡场禽流感与新城疫的免疫状况和感染情况。

3.2本次对威宁县5个生态养鸡场进行禽流感和新城疫免疫抗体监测显示：H5亚型禽流感免疫抗体合格率为86.80%，低于2019年周立良[1]对福建省武夷山市鸡场(97.31%)和马卫红等[2]对贵州省惠水县鸡场(92.75%)的检测结果；H7亚型禽流感免疫抗体合格率为95.60%，与福建省武夷山市(97.31%)[1]和贵州省惠水县(93.40%)[2]的检测结果基本一致；新城疫免疫抗体合格率为92.80%，与谢梅等[3]2019年对河北省衡水市鸡场的检测结果相近。在5个生态养鸡场中均未检测出禽流感和新城疫病毒，说明威宁县生态养鸡场未受禽流感和新城疫感染，防控工作做得较好。此外，鸡群H5亚型、H7亚型禽流感和新城疫免疫抗体HI效价的离散度较大，说明生态养鸡场免疫抗体整齐度不高，需要定期开展免疫抗体监测，对免疫抗体HI效价不合格的鸡及时进行禽流感和新城疫补免工作，提高生态鸡群免疫抗体保护力，有效防止禽流感和新城疫野毒感染。