一例杂交鲇腐皮病的细菌分离鉴定和药敏试验

杂交鲇养殖始于20世纪80年代，多为种间杂交，目前主养种类有大口鲇与鲇正反交、怀头鲇♀×鲇♂、胡子鲇♀×革胡子鲇♂。因其生长速度快、适应能力强、肉质优良等特点，受到广大民众的喜爱，在全国各地均有养殖。2019年11月，市场购回的杂交鲇养殖期间发生了腐皮病，死亡率高达100%。本文就该病例进行了病原的分离鉴定和菌株的药敏试验。

一、临床检查

1.体表观察 病鱼体表有褪色斑，并有大小不等、形状各异、边缘粗糙的溃疡灶。溃疡灶边缘组织红润，伴有充出血症状，腹部膨大，蛀鳍且鳍条基部有出血点，肛门红肿。

2.镜检 剪取鳃丝，刮取黏液制备水压片进行显微镜检查，未发现寄生虫。

3.剖检 打开腹腔，腹腔内有大量淡黄色腹水，肝脏、脾脏、肾脏边缘钝圆肿大，并伴有出血，肠道充出血，少数病鱼胃肠道异常膨大，内有大量液体和气体。

二、实验室检查

1.菌株培养 无菌条件下，使用接种环从病鱼肝脏、脾脏、肾脏等组织中接菌于TSA培养基，置于30℃恒温培养箱中培养24小时。24小时后取出TSA培养基进行观察，均可见两种不同的菌落。一种菌落呈圆形蜡状隆起，边缘完整，直径1毫米左右，表面光滑，乳白色且不透明，有光泽，数量较多；另一种菌落呈圆形微隆起，边缘整齐，直径为0.2～0.5毫米，表面光滑湿润，乳白色且半透明状，数量较少。分别挑选两种细菌单菌落接种于TSB培养基中，置于30℃振荡培养箱中培养24小时用于菌株鉴定和药敏试验。使用试剂盒分别提取两种细菌基因组DNA，采用细菌16S rRNA通用引物进行PCR扩增，获得与阳性对照预期片段大小一致的单一条带，并送样生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序。获得序列与NCBI数据库blast比对，两种细菌分别与维氏气单胞菌和拟态弧菌高度相似。

2.敏感药物筛选 通过实验室药敏试验，结果显示混合细菌对复方新诺明、新霉素、恩诺沙星、卡那霉素和丁胺卡那霉素敏感；对奥格门汀和氨苄西林耐受。

三、病因分析

本次患病杂交鲇临床症状主要为体表多处溃疡灶并伴有出血，腹部肿大，柱鳍且鳍条基部有出血点，肛门红肿，腹腔内有大量淡黄色腹水，肝脏、肾脏钝圆肿大并伴有出血。关于维氏气单胞菌感染水产养殖动物的报道，秦国民等(2008)从养殖的患病锦鲤中分离出维氏气单胞菌，其临床症状主要有鳞片大面积脱落，体表多部位出血，肛门出血，血样腹水，肠道胀气，肝脏肿大，质脆并有出血。黄小丽等(2009)在斑点叉尾感染维氏气单胞菌的报道中，病鱼主要表现为皮肤溃烂，腹部极度膨大，肛门红肿，胸鳍、腹鳍和臀鳍及其基部充血、出血，腹腔有大量淡黄色或带血的腹水，肝、肾肿大伴有出血点，胃肠道严重出血。董靖等(2017)报道，杂交鲇感染维氏气单胞菌后皮肤多处大面积溃疡，脏器出血。本次患病杂交鲇症状与上述报道症状相似，提示杂交鲇的死亡，维氏气单胞菌存在不可忽视的作用。

从患病杂交鲇肝脏、脾脏、肾脏等组织分离出拟态弧菌。目前不乏关于拟态弧菌感染鲇鱼的报道。Y.Gen等(2014)从鲇鱼、南方鲇以及中国的正川鲇发生的一种死亡率极高(80%～100%)的流行病诊断中分离出拟态弧菌，其病理特征主要有全身皮肤褪色，体表出现大面积溃疡并伴有出血，肝脏出血、肿胀、坏死。同样，韩帅等(2015)报道拟态弧菌感染的南方鲇临床特征为体表出现褪色斑，背部、腹部肌肉出现明显的长方形溃疡灶，臀鳍与尾鳍基部出血，肝肿大斑点状出血，脾、肾肿大，呈暗红色，部分病鱼腹腔内可见少量淡黄色腹水。在陈成等(2017)研究中，黄颡鱼感染拟态弧菌后也出现相似症状，主要表现为皮肤褪色，体表溃烂呈方形或椭圆形溃疡灶，伴有出血，肝、脾、肾肿大出血，腹腔有一定量的淡红色腹水。本次患病杂交鲇体表有明显的褪色斑，少数个体溃疡灶为矩形，提示拟态弧菌在本次杂交鲇的疾病发生过程中可能发挥一定作用。

综上分析可见，维氏气单胞菌和拟态弧菌是鲇鱼养殖中重要的致病菌，而本病例中存在维氏气单胞菌和拟态弧菌混合感染的情况，其临床症状以急性败血症为主。单一感染和混合感染在症状上难以区分，这给临床疾病诊治带来难度。根据体外药物混合药敏筛选结果，可考虑选择敏感药物盐酸恩诺沙星拌料连续投喂5～7天，鉴于病鱼全身多器官广泛性出血，可考虑拌料投喂维生素K，同时外用聚维酮碘溶液或溴氯海因粉等消毒剂对水体进行消毒，加强池塘日常管理工作。