8-isoprostane、SOD、AOA、NF-κB及iNOS在复发性流产病人中的表达研究

汪 莉，石慧芬，江海英，刘金霞，陈 茵

复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)指的是连续发生2次或2次以上的自然流产,其也是临床最常见的病理妊娠疾病，可对病人身心和生育健康造成巨大的危害[1]。关于该疾病的发病机制临床尚无明确定论，但有研究[2-4]表明，RSA中能够识别病人病因的仅占1/2，主要包含母体生殖道异常、免疫功能异常、内分泌异常、染色体异常、生殖道感染及子宫解剖因素等。但仍有1/2病人发病原因不明。因此，本研究分析8-异构前列腺素(8-isoprostane)、超氧化物歧化酶(SOD)、血浆总抗氧化能力(AOA)、转录因子-κB(NF-κB)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在RSA中表达及影响，以探究不明原因RSA发病的相关机制,以期能为该疾病预防和治疗提供有效的参考。现作报道。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择我院2018年6月至2019年10月收治的119例不明原因RSA病人作为研究对象，分为不明原因RSA病人60例作为研究对象(病例组)，进行正常妊娠分娩妇女59例作为参照对象(对照组)，病例组纳入标准：(1)连续发生早期自然流产3～10次者；(2)女方生殖道未出现器质性改变者；(3)生殖道内分泌正常者；(4)无生殖道感染者；(5)抗子宫内膜抗体、抗心磷脂抗体等呈阴性者；(6)夫妻双方染色体正常者；(7)病人及家属对该项研究均知情同意，且签署知情同意书。排除标准：(1)合并存在心、肝、肾功能障碍者；(2)合并存在其他可能影响本研究结果的疾病者。对照组纳入标准：(1)正常早孕孕妇；(2)病人及家属对该项研究均知情同意，且签署知情同意书。排除标准：(1)合并存在心、肝、肾功能障碍者；(2)合并存在其他可能影响本研究结果的疾病者。2组病人的年龄与体质量指数差异均无统计学意义(P>0.05)(见表1)，具有可比性。

表1 2组病人一般资料比较

1.2 方法 血液指标检测：对照组在分娩20 min内，病例组在流产后20 min内抽取病人10 mL静脉血，采用3 000 r/min离心10 min后，留取血清保存于-60 ℃冰箱中待检，采用双抗体夹心法检测8-isoprostane水平，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测SOD、AOA水平和NF-κB、iNOS含量。

绒毛蜕膜组织相关指标检测：收集对照组分娩后和病例组流产后的蜕膜组织，采用0.9%氯化钠溶液反复冲洗，漂洗干净后，在4 ℃环境中采用10%甲醛将绒毛蜕膜组织固定24 h，使其使其脱水干净，再采用石蜡将其制成包块，并制备厚度为4 μm左右的石蜡切片，然后对切片标本采用免疫组织化学SP法进行染色，最后，采用ELISA法对各组绒毛蜕膜组织中的8-isoprostane、SOD、AOA水平和NF-κB、iNOS含量进行检测[5]。

1.3 观察指标 比较2组病人血液和绒毛蜕膜组织中的8-isoprostane、SOD、AOA等氧化应激指标及NF-κB、iNOS水平。

1.4 统计学方法 采用t(或t′)检验。

2 结果

2.1 2组血液中8-isoprostane、SOD、AOA、NF-κB和iNOS水平比较 2组病人血液中AOA水平差异无统计学意义(P>0.05)，不明原因RSA病人血液中8-isoprostane、NF-κB和iNOS水平均高于正常妊娠妇女(P<0.01)，血液中SOD水平低于正常妊娠妇女(P<0.01)(见表2)。

表2 2组血液中8-isoprostane、SOD、AOA、NF-kB和iNOS水平比较

2.2 2组绒毛蜕膜组织中8-isoprostane、SOD、AOA、NF-κB和iNOS水平比较 2组病人绒毛蜕膜组织中AOA水平差异无统计学意义(P>0.05)，不明原因RSA病人绒毛蜕膜组织中8-isoprostane、NF-κB和iNOS水平均明显高于正常妊娠妇女(P<0.01)，SOD水平明显低于正常妊娠妇女(P<0.01)(见表3)。

表3 2组绒毛蜕膜组织中8-isoprostane、SOD、AOA、NF-κB和iNOS水平比较

3 讨论

近年来，我国RSA发病率呈明显的上升趋势，该疾病不仅会引发孕妇病人出现连续自然流产现象，同时还会引发其停经后出现阴道出血、腹痛等症状，从而对病人身心和生育健康造成严重的影响[6]。要预防RSA的发生和采取有效的方案对病人进行治疗，就需对其致病原因进行明确[7]。然而，临床研究表明，导致RSA的致病因素十分复杂，RSA中能够识别病人病因的仅占1/2，主要包含母体生殖道异常(如母体子宫畸形、子宫肌瘤、宫颈机能不全或存在Asherman综合征等)、免疫功能异常(主要包含自身免疫和同种免疫)、内分泌异常(包含黄体功能不全、高泌乳素血症、多囊卵巢综合征、糖尿病、甲状腺疾病等)、染色体异常(包含胚胎染色体异常和罗伯逊易位、平衡易位等夫妻染色体异常)、生殖道感染(多指由解脲支原体、沙眼衣原体感染引起的宫颈炎或子宫内膜炎)等，但仍有1/2病人发病原因不明[8-9]。

文献研究[10]表明，不明原因自然流产发生和孕妇机体内的氧化应激反应密切相关。氧化应激指的是体内氧化和抗氧化作用失衡，倾向于氧化作用，并产生大量氧化中间物[11]。并且，我国已有不少研究[12-13]证实，氧化应激参与了血管内皮损伤，而血管形成是决定胚胎着床与否、良好供血与否以及孕妇病人妊娠成功与否的关键。若孕妇病人早期发生了氧化应激，可引发其血管内皮细胞受损和引发其机体出现炎性反应，这样便会增加其机体炎性反应介质释放和激活中性粒细胞，产生大量氧化自由基，从而易导致氧自由基聚集和细胞壁浸润，最终促进动脉粥样硬化斑块的形成，而大量中性粒细胞被激活又可导致氧化自由基剧增，从而进一步加重孕妇病人机体的氧化应激反应，进而会降低孕妇妊娠过程中抗氧化系统功能，使其发生自然流产[14-15]。人体氧化应激反应包含8-isoprostane、SOD、AOA等多项氧化应激指标。本研究中，分别对60例不明原因RSA病人及59例正常妊娠妇女行血液和绒毛蜕膜组织中8-isoprostane、SOD、AOA等氧化应激指标及NF-κB、iNOS水平检测，结果显示，2组病人血液和绒毛蜕膜组织中AOA水平对比无显著差异，不明原因RSA病人血液中8-isoprostane、NF-κB和iNOS水平显著高于正常妊娠妇女，不明原因RSA病人血液中SOD水平显著低于正常妊娠妇女，不明原因RSA病人绒毛蜕膜组织中8-isoprostane、NF-κB和iNOS水平显著高于正常妊娠妇女，不明原因RSA病人血液中SOD水平显著低于正常妊娠妇女，说明不明原因RSA病人与正常妊娠妇女血液和绒毛蜕膜组织中的 8-isoprostane、SOD、NF-κB和iNOS表达存在显著差异，提示这些指标可能是引发不明原因RSA发生的危险因素。

在上述影响指标中，8-isoprostane过度表达可抑制Th2细胞分泌和促进T淋巴细胞增殖，并促使Th细胞转化为Th1细胞，从而会导致母胎界面细胞因子网络失衡，引发胚胎植入失败，进而会引发孕妇病人出现非正常流产[16-18]。另外，临床研究[19-20]表明，孕妇妊娠时，其机体SOD水平升高能维持氧化和抗氧化平衡，若SOD水平降低则会导致氧化和抗氧化失衡，从而易导致孕妇难以维持正常妊娠而发生自然流产。NF-κB可参与胚胎早期发育和调节胚胎着床过程，若母胎界面NF-κB表达过度，则易诱发其下游的IFN-γ及TNF-α过度表达，从而易诱发病人发生自然流产。iNOS与孕妇病人机体免疫调节具有直接影响关系，一般情况下，iNOS基因不表达，只在多种细胞因子和内毒素刺激下，才可发生翻译、转录和表达。若其正常表达可发挥有效的免疫功能调节作用，而在妊娠免疫耐受中免疫调节作用能促进孕妇机体Th1/Th 动态平衡得到有效维持，从而能维持其正常妊娠，若iNOS基因表达不正常，则会导致Th1/Th失衡，从而难以维持母胎微环境稳定，进而易引发其发生自然流产。

综上所述，不明原因RSA病人血液和绒毛蜕膜组织中的8-isoprostane、SOD、NF-κB和iNOS表达与正常妊娠妇女具有明显差异，因此，其可作为预测不明原因RSA发生的重要因子。