IL-35及Th2细胞因子水平与呼吸道合胞病毒毛细支气管炎的关系*

廖廷彦，刘 柳，王力勇

(湖北省枣阳市第一人民医院儿科，湖北襄阳 441200)

毛细支气管炎(以下简称毛支)为临床常见的下呼吸道感染性疾病之一，其病原体主要为呼吸道合胞病毒(RSV)，约占50%，并以毛细支气管、肺泡、肺间质发生炎症为病理基础，致黏膜下充血，引起水肿。婴幼儿因免疫力较差，成为该疾病主要发病群体，若患儿未得到有效治疗，可引发哮喘，严重威胁生命安全[1-2]。根据分泌细胞因子不同，CD4+T细胞可分为Th1、Th2等亚群。据多数临床研究显示，RSV毛支患儿存在Th1/Th2失衡，其中Th2细胞因子主要包括白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13，但其具体机制仍存在争议[3-4]。此外，IL-35作为新的抗炎/免疫抑制细胞因子，在细胞内感染及炎症过程中起着重要的调节作用，并参与多种自身免疫病、肿瘤等疾病发生、发展[5]。目前关于IL-35在RSV毛支中研究甚少。本研究通过检测患儿的IL-35、Th2细胞因子水平，并与体检健康儿童作对照，探讨各因子在疾病中作用机制，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2016年4月至2019年8月本院收治的RSV毛支患儿168例作为观察组。纳入标准：(1)所有患儿经诊断符合RSV毛支诊断标准[6]；(2)临床多伴有咳嗽、发热、哮鸣音、湿性啰音等症状；(3)近2周内无服药史；(4)患儿家属知晓本研究并签订知情同意书。排除标准：(1)非因RSV所致毛细支气管炎患儿；(2)合并先天性心脏病、心律不齐等心血管疾病患儿；(3)免疫缺陷及凝血功能障碍患儿；(4)肝、肾等功能严重异常患儿；(5)精神疾病及临床资料不完整患儿。观察组男91例，女77例；年龄2～16个月，平均(6.83±1.04)个月。另选取体检健康儿童157例作为对照组，男84例，女73例；年龄1～15个月，平均(6.67±1.32)个月。两组受试儿童性别、年龄等基本资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经本院伦理委员会批准。

1.2肺功能指标检测 应用北京麦邦光电仪器有限公司MSA99肺功能仪检测呼吸频率(RR)、每千克体质量功能残气量(FRC/kg)、到达潮气呼气峰流速时呼出的气量/潮气量(%V-PF)、潮气呼气中期流速/潮气吸气中期流速(ME/MI)、呼出75%潮气量时的呼气流速/潮气呼气峰流速(25/PF)等肺功能指标。

1.3细胞因子检测 观察组于确诊后第2天清晨(对照组于体检当日)空腹采取静脉血3 mL，3 000 r/min离心10 min(离心半径10 cm)，并取上清液置于-80 ℃冰箱保存待检。应用酶联免疫吸附法检测IL-35水平，另检测IL-4、IL-5、IL-13等Th2细胞因子水平。IL-35、IL-4、IL-5、IL-13试剂盒购自南京森贝伽生物科技有限公司，并严格按照试剂盒说明书检测。采用美国BD公司FACS CantoⅡ流式细胞仪及配套试剂盒检测CD4+T细胞亚群水平。

2 结 果

2.1两组基本资料比较 观察组RR、FRC/kg、CD4+高于对照组，%V-PF、ME/MI、25/PF低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1、图1。

表1 两组基本资料比较

注：A、B分别为观察组、对照组CD4+T细胞亚群流式细胞图。

2.2两组IL-35与Th2细胞因子水平比较 观察组IL-35水平显著低于对照组，而IL-4、IL-5、IL-13水平显著高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组IL-35与Th2细胞因子水平比较

2.3CD4+与Th2细胞因子水平相关性 CD4+与IL-4、IL-5、IL-13水平呈正相关(r=0.367，P=0.032；r=0.311，P=0.038；r=0.405，P=0.021)。见图2。

2.4IL-35与Th2细胞因子水平相关性 IL-35水平与IL-4、IL-5、IL-13水平呈负相关(r=―0.432，P<0.05；r=―0.404，P=0.022；r=―0.399，P=0.029)。见图3。

2.5影响RSV毛支发生因素的Logistic多元回归分析 以RSV毛支是否发生为因变量(是=0，否=2)，以IL-35、IL-4、IL-5及IL-13水平为自变量进行Logistic多元回归分析(均为实际值赋值)。结果显示IL-35、IL-4、IL-5、IL-13水平均为影响RSV毛支发生的独立危险因素。见表3。

注：A、B、C分别为CD4+与IL-4、IL-5、IL-13的相关性。

注：A、B、C分别为IL-35与IL-4、IL-5、IL-13的相关性。

表3 影响RSV毛支发生因素的Logistic多元回归分析

3 讨 论

近年来RSV毛支发病率随生活方式的改变、工业化进程的加快呈逐年上升趋势，严重威胁患儿身心健康[7]。目前关于该疾病的发病机制尚不清楚，多认为与神经免疫机制、免疫损害等因素有关。当前对获得性免疫相关因子的研究较多，机体受呼吸道合胞病毒感染后，可促使炎性细胞释放炎性介质，进而加重患儿病情，引发哮喘，影响患儿预后效果[8-9]。对此，研究相应免疫因子对临床诊断、治疗具有重要意义，便于观察病情进展状况，调整治疗措施。

相关研究指出，IL-35是EB病毒诱导基因3蛋白与IL-12p35亚基所组成的异源二聚体，属于IL-12细胞因子家族，参与体内的免疫应答过程，与肿瘤、糖尿病、胶原诱导性关节炎等多种疾病的发生、发展相关[10-11]。因IL-35是由调节性T细胞(Treg)特异性分泌，而Treg作为机体内一种具有免疫抑制功能、低反应性的T细胞亚群，在维持肿瘤免疫、微生物感染、机体免疫平衡等方面发挥重要的调节功能，所以IL-35可使T细胞增殖活化，产生细胞因子，对免疫系统、免疫反应发挥负向抑制作用。同时，IL-35在变态反应性疾病中也受到当前临床研究的关注，当IL-35表达较低时，可参与过敏性哮喘、毛细支气管炎等发生，相关研究指出IL-35可以产生长效的免疫抑制，有效降低机体过敏性炎性反应的发生率，并且在疾病的控制与改善的过程中发挥重要的调节作用，推测其具有潜在治疗价值[12-13]。

T细胞作为体内起免疫调节作用的细胞成分之一，其中CD4+被抗原激活后所释放的细胞因子在RSV毛支发病中具有重要意义，可分为Th0、Th1、Th2等亚群，Th0可在不同因素作用下向Th1或Th2细胞分化[14-15]。Th2细胞产生IL-4、IL-5、IL-13等细胞因子，同时在多种因素作用下，Th1、Th2间相互调节并维持平衡，当机体受到细菌、病毒感染，则可导致Th1/Th2两者失衡[16-17]。既往研究显示，Th1/Th2失衡是导致RSV毛支发生的主要机制之一，并且以Th2水平升高为主，主要表现为IL-4、IL-5等细胞因子分泌显著增加[18]。拮抗IL-4致使B细胞合成免疫球蛋白E(IgE)、免疫球蛋白G4(IgG4)功能明显减弱，并在Th0分化过程中起重要作用，因患儿机体内IL-4分泌过多，IgE、IgG4数量也相应增多，可大量释放白三烯、组织胺等炎性介质，引发气道痉挛、阻塞。IL-5可促使淋巴母细胞分化为Th2淋巴细胞，从而形成气道淋巴细胞浸润，这在RSV毛支发病进展中起重要作用[19]。IL-13经研究证实在哮喘炎症过程中发挥主导作用，可促进IgE合成，属于Th2细胞源性最具有代表性细胞因子，与疾病严重程度密切相关[20]。

对患儿肺功能主要指标进行检测，观察组RR、FRC/kg、CD4+显著高于对照组，%V-PF、ME/MI、25/PF显著低于对照组，表明患儿气道功能发生异常。因气道阻塞导致通气、换气功能发生障碍，并且因分泌物增多，炎性改变降低气道顺应性，增加阻力，各指标均可作为观察病情变化的敏感指标。对IL-35、Th2细胞因子进行检测，结果显示观察组IL-35水平显著低于对照组，而IL-4、IL-5、IL-13水平显著高于对照组，表明RSV感染可使Th2细胞因子释放及表达明显增多。因IL-35不仅可影响多个T细胞亚群分化，还可通过巨噬细胞有效抑制促炎症细胞因子产物，也是机体中一种重要保护性因子，因此，在临床中可作为评估RSV毛支控制水平的参考指标之一。但患儿IL-35水平明显下降，IL-4、IL-5、IL-13等因子大量释放，从而使Th2细胞因子呈升高状态，其中IL-4作为Th2细胞产生的特征性细胞因子，促进体液免疫应答，并致使IgE产生，最终引发患儿反复喘息。IL-5能够使嗜酸性粒细胞水平增加。此外，IL-13水平增高可导致该疾病反复发作，对Th2细胞因子进行检测，便于为患儿提供有效治疗，预防喘息反复发作。本研究结果显示，CD4+与IL-4、IL-5、IL-13水平呈正相关，因T细胞是机体与抗原唯一直接发生反应的细胞，结果表明患儿体内T抑制细胞功能不足，尤其是CD4+水平明显升高，其在一定程度上也反映Th2细胞因子水平发生相应变化，临床治疗需兼顾抗病毒与调节机体免疫功能，从而积极预防哮喘发生。本研究还显示，IL-35水平与IL-4、IL-5、IL-13水平呈负相关，进一步表明IL-35是Treg发挥免疫负调控的主要细胞因子之一，两者之间存在一定联系，但其具体机制仍需深入探究。此外，IL-35、IL-4、IL-5、IL-13水平均为影响RSV毛支发生的独立危险因素，因此，临床对IL-35、Th2细胞因子进一步研究，可有望成为治疗RSV毛支的靶点。但本研究所选取的样本数量偏少，后期研究可在扩大样本数量基础上对IL-35的作用机制进一步研究，提高临床研究准确性。

4 结 论

RSV毛支患儿IL-35水平下降，Th2细胞受病毒感染后，可明显增加IL-4、IL-5、IL-13等分泌，且IL-35水平与IL-4、IL-5、IL-13水平呈负相关，从而为临床治疗RSV毛支提供了新思路，可通过应用Th1/Th2平衡调节剂治疗以改善患儿气道炎症，并预防向哮喘方向转变。