稀释液和温度对猪精液保存效果的影响

黄龙艳 潘越博 王玺年 吴孝杰

摘  要：为了获得猪精液最佳的保存效果，本试验采用不同的稀释液和保存温度对猪精液的保存效果进行了研究。试验结果：Ⅰ组稀释液的稀释保存效果最好，精子活力、有效存活时间、总存活时间及生存指数分别为0.75、98.5 h、129.8 h、75.9 h，除精子活力与其他组间差异不显著（P>0.05）外，其他指标差异极显著（P<0.01）;Ⅰ组稀释液在17 ℃条件下保存时，精子活力、存活时间和生存指数等指标最高。

关键词：猪精液稀釋液;精子活力;存活时间;生存指数

中图分类号：R913+S859.1 文献标志码：A 文章编号：1001-0769（2020）07-0019-03

1  试验材料

1.1 精液来源

试验用长白种公猪15头，18～24月龄，身体健康，性欲良好，生产成绩优秀，体质健壮结实，遗传性能稳定，且无任何遗传疾病。人工采集公猪精液，选择精子活力在0.8以上，且气味、色泽正常的精液稀释保存。

1.2仪器设备

控温冰箱、伟力精液分析仪、恒温水浴箱、电子秤、烧杯、量筒、高压消毒锅、生化培养箱、干燥箱、双蒸仪、磁力搅拌器和pH测定仪。

1.3 稀释液配方

稀释液配方见表1。

2  试验方法

2.1 试验用品的消毒

为了尽可能实现无菌操作，试验所用的玻璃器械均用干燥箱进行干燥消毒，金属器械用高压锅蒸汽消毒，新鲜鸡蛋洗净外壳后用75%酒精消毒。

2.2 稀释液的配制

准确称量葡萄糖、碳酸氢钠、二水柠檬酸钠、氯化钠、氨基乙酸、氨苯磺胺和EDTA并转移至消毒过的量杯中，加100 mL双蒸水搅拌稀释;将稀释液过滤、分装到消毒过的玻璃瓶中，盖好瓶塞并用纱布将其包裹后高压蒸汽消毒10 min～15 min，将溶液冷却至室温，按比例加入新鲜卵黄、新鲜牛奶和抗生素并搅拌混匀，测定pH后密封保存。

2.3 精液处理及保存

首先，按国家标准采集精液，测定并记录精液pH和精子活力;然后，将同一头猪采集的合格精液分成4份，分别用4种稀释液按1∶3进行稀释;第三，将每种处理分成2份，快速测定其中一份的精子活力;第四，将精子活力最高的稀释精液分成4份，分别置于15 ℃、16 ℃、17 ℃和18 ℃的环境中保存36 h;第五，测定精子活力、生存指数等指标，记录相应数据。

2.4 数据处理

首先统计15个样本的预定测试指标，并计算各指标的平均值，然后利用Х2检验对数据进行独立分析，最终确定组间的差异显著性。

3 试验结果

3.1 精液稀释效果

如表2所示，4种稀释液稀释后精子的生存指数、总存活时间、有效存活时间和精子活力均以Ⅰ组稀释液效果最好，分别为75.9 h、129.8 h、98.5 h和0.75;但稀释后的生存指数、总存活时间、有效存活时间，Ⅰ组与Ⅱ组之间差异不显著（P>0.05），与其他组间的差异极显著（P<0.01）;精子活力四组间差异不显著（P>0.05）。

3.2 稀释精液保存温度

为了测试稀释精液的最佳保存温度，对Ⅰ组稀释液在不同温度下精子的总存活时间、有效存活时间、生存指数和活力进行试验。结果表明：稀释精液于17 ℃恒温环境中保存效果最佳，精子的生存指数、总存活时间、有效存活时间和活力分别为72.9 h、125.9 h、97.7 h和0.66（表3）。

3.3 抗生素的作用

试验结果表明，在稀释液中加入适量林肯霉素和庆大霉素可延长精子抗菌时间，提高抗菌效果，并且不易产生耐药性。

4 结果分析

4.1 稀释液成分全面，用量适宜

在所设计的稀释液配方中，Ⅰ组稀释液的常温保存效果最好。因为该稀释液含有精子所需要的营养物质、缓冲物质和抗生素等，所以Ⅰ组稀释液适于精液保存，有助于提高精子活力。

4.2 Ⅰ组稀释液保存效果比Ⅱ组好的原因

在稀释液配方中，虽然Ⅱ组稀释液中能量物质葡萄糖的添加比Ⅰ组多，但缓冲物质柠檬酸钠和EDTA的添加量少，导致Ⅱ组稀释液稀释后的精子活力和存活时间等指标降低，影响稀释效果。

4.3 成分越单一，精液稀释保存效果越差

虽然Ⅲ组稀释液含有缓冲物质、营养物质和抗生素，Ⅳ组稀释液含有卵黄、牛奶和抗生素，但这两种稀释液不符合精液稀释液组成要求，在生产中通常只适用于现配现用。

4.4 精子活力越高，精液稀释保存效果越好

精子活力在0.8以上时稀释保存效果较好，保存温度为17 ℃时可以使精子的物质能量需求与代谢处于动态平衡，酶的活性也很强，从而能维持精子活力，延长精液保存时间，提高母猪的受胎率和产仔数。

值得一提的是，影响精液稀释和保存的因素有很多，机理也非常复杂，一些细微因素和原理有待进一步研究探讨。

作者简介：黄龙艳（1972— ），女，助理兽医师，从事畜禽良种繁育与研究工作;E-mail：1318925701@qq.com

通信作者：潘越博