鸡蛋中角黄素液相色谱法测定的比较

李瑞云 华鑫玲

角黄素天然存在于蛋类、肝脏、鱼类等中，主要用作动物饲料添加剂，尤其在蛋类中比较容易残留。之前我们都认为，蛋黄越黄证明鸡蛋品质越好，但实际上这也可能是角黄素的积聚。据部分研究所得，摄取大量角黄素，可导致色素积聚于视网膜，对身体造成极大危害。本文比较了乙腈提取法、乙腈丙酮提取法、石油醚提取法的优劣，从而得到了提取角黄素的最佳条件。

一、实验部分

1.仪器与试剂。试剂：样品基质（鸡蛋）、角黄素标准品、乙腈、丙酮、石油醚、乙腈丙酮提取剂（50：50）。仪器：高效液相色谱仪（安捷伦1200）、高效液相色谱仪（Waters e2695）、组织匀浆机、离心机、氮吹机、电子天平。

2.标准曲线制备。角黄素标准溶液（9.5μg/mL）：准确称取纯度为95%的角黄素标准物质1.0mg于100mL容量瓶，选用乙腈为溶剂溶解标准品，完全溶解后定容、混匀，其中角黄素浓度为9.5μg/mL。标准溶液置于-18℃冰箱中避光保存。

角黄素标准工作液：分别吸取1.00mL、2.00mL、4.00mL、8.00mL、10.00mL角黄素标准溶液于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度。其中角黄素工作液浓度为0.95μg/mL、1.9μg/mL、3.8μg/mL、7.6μg/mL、9.5μg/mL。

3.分析步骤。试样制备：取多个鸡蛋，洗净去壳后用组织匀浆机充分搅拌均匀，放入玻璃瓶中。试样保存：将试样于-18℃避光条件下保存。提取：按表1所示进行提取。

二、结果与讨论

1.线性关系。以标准溶液浓度为横坐标，角黄素峰面积为纵坐标，建立回归方程y=33.342x-1.375，R2=0.9997。

2.回收率试验。以鸡蛋为基质空白样品数据，见表2。然后采取空白试样加标回收法，确定方法回收率。称取2g空白试样，精密加入9.5μg/mL角黄素标准物质1mL，最后计算出回收率。

3.精密度试验。精密吸取角黄素标准物质（0.95μg/mL、3.8μg/mL、9.5μg/mL），连续进样6次，RSD分别为0.06%、0.02%、0.01%，测定结果表明，仪器精密度良好。

同时，为测定斑蝥黄的稳定性，在室温20℃的条件下分别取浓度为1.9μg/mL、3.8μg/mL、7.6μg/mL的標准品溶液，于0h、12h、24h不同时间进样，RSD分别为4.4%、3.9%、8.7%。测定结果表明，24h内角黄素标准物质不稳定。

4.仪器比对。准备相同浓度标准溶液，0.95μg/mL、1.9μg/mL、3.8μg/mL、7.6μg/mL、9.5μg/mL，在安捷伦1200与Waters e2695同时上机。结果显示，色谱图中峰型均良好，Waters e2695出峰较早、峰面积较大、峰高较高，且仪器比对信噪比≥3，均适宜角黄素测定。结果见表3。

5.结论。 （1）三种提取液比较中，乙腈丙酮（50：50）提取剂回收率115.22%，石油醚提取剂回收率98.80%，乙腈提取剂回收率91.18%，可见乙腈丙酮（50：50）提取剂更适合角黄素提取。

（2）9.5μg/mL标准品分别室温放置0h、12h、24h后上机检测，RSD%均小于10%，说明角黄素标准物质室温放置24小时内稳定。

（3）角黄素标准品3.87μg/mL在安捷伦1200与Waters e2695同时上机，峰型均较好且信噪比均≥3，说明两种仪器均适合角黄素检测。

（4）角黄素标准溶液9.5μg/mL在370nm、470nm、570nm下比对，发现470nm左右为最大吸收波长、响应度最高，且峰型较好，570nm峰型最差，则470nm较适合角黄素检测。

综上，提取角黄素的最佳条件为：乙腈丙酮提取法，回收率115.22%，采用高效液相色谱法测定，色谱柱为C18（4.6mm×150mm），流动相为甲醇-水，流速1.0mL/min，柱温：30℃，检测波长：471nm。在上述条件下，角黄素在0.95-9.5μg/mL范围内线性关系良好，R2=0.9997。