补饲花粉对东方蜜蜂工蜂初生重及体蛋白的影响

胡宗文，黄新球，苗春辉，杨 娟，王艳辉

（云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所，云南 蒙自661101）

花粉是蜜蜂主要的蛋白质来源，是促进蜜蜂机体生长发育和维持体内生理功能的重要营养物质。花粉为蜜蜂提供了蛋白质、脂肪、维生素、矿物质等营养元素，在外界缺乏花粉或花粉单一时补充饲喂花粉对提高蜜蜂生理机能具有重要意义。Garance等2013年指出花粉的多样性及质量可以决定蜜蜂的生理，尤其是当前在土地利用日益密集和农业集约化下对蜜蜂的影响更为明显[1]。很多养蜂者认为饥饿和营养不良是导致蜂群下滑的重要因素[2]，这也间接说明了研究营养可利用性与蜂群健康间的关系[3]或许是目前世界范围内蜂群消失（colony loss）现象的一个原因。幼蜂在取食花粉后分泌蜂王浆以饲喂幼虫、蜂王、雄蜂、工蜂[4]，因此在增长的群势中有着极大的营养需求，并且不同显花植物泌粉量、时空易变、花粉质量有很大的不确定性[5]，导致了补充饲喂花粉对蜂群具有重要性。Garance等2016年再次指出花粉源的多样性可以有效提高蜜蜂的健康[6]。

国内学者也指出，花粉多样性对蜂群群体水平和个体水平上有着显著的意义。在缺少粉源的橡胶流蜜期间，补充花粉能够提高西方蜜蜂群18%的采蜜量[7]。春繁期补充饲喂花粉和橡胶蜂蜜对中囊病有一定的防控效果，能提高蜂群的抗病力[8]，能提升西方蜜蜂成年工蜂体蛋白和幼蜂的形态体征[9]。然而，补饲花粉对东方蜜蜂初生重及体蛋白的影响尚未见报道。初生重是评价蜜蜂质量的一个重要指标，体蛋白体是蜜蜂发育状况的重要体现，通过本次的研究能够完善补饲花粉（增加花粉多样性）对东方蜜蜂发育影响中的空白，为指导养蜂提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验蜂群：饲养于云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所蜂场内的6群东方蜜蜂，蜂群群势相同，蜂王健康，蜜充足。试验于2016年12月至2017年2月进行，该时段蜂场2 km半径范围内没有充足花粉源供给蜂群。花粉为2015年秋季收集的杂花粉，贮存于冷藏室。

药品与器材：75%乙醇、尿素、CHAPS、Destreak、BCA工作液（Reagent A和B）、50 mg/mL标准蛋白、ddH2O；各规格离心管、各量程移液枪、电子天平等。

1.2 试验方法

花粉饲喂：将群势相同的6群中蜂随机分为2组，一组饲喂花粉，另一组饲喂60%蔗糖液作空白对照。饲喂时将花粉用60%蔗糖液调制为条状，放置于蜂群上框梁，湿度以刚好能把花粉捏成型为宜。2016年12月开始每隔7 d喂1次，每次500 g，在下次饲喂前检查蜂群，清理出未吃完的花粉。2017年3月采集刚出房工蜂进行检测，样品贮存于-80℃冰箱。

初生重测定：采集到刚出房的工蜂立即送往实验室，置于-20℃冰箱5 min，当蜜蜂麻痹后进行称重，电子天平量程为0.000 1。

体蛋白测定：以BCA蛋白测定法测定，首先配制BCA工作液，根据样品和样品数量，将Reagent A和B按50∶1的比例配制，充分混匀，在室温下24 h稳定。其次是标准曲线绘制，取适量50 mg/mL蛋白标准10μL，加入990μL的稀释液即可配制为0.5 mg/mL蛋白标准。然后按表1操作。

表1 BCA法测定蜜蜂体蛋白

混匀，在37℃放置30 min，冷却至室温，测定A562的吸光度，根据标准曲线计算出样品蛋白浓度。

1.3 数据统计与分析

用软件Excel进行数据整理，用软件SPSS 17.0进行方差分析和独立样本T检验。“独立样本T检验”主要用于两个样本是否来自具有相同均值的总体，其检验概率P＞0.05则确定两样本是来自具有相同均值的总体，两者间差异不显著，反之则差异显著。

2 结果

2.1 补饲花粉对工蜂初生重的影响

图1补饲花粉对工蜂初生重的影响

饲喂花粉对东方蜜蜂工蜂初生重有显著 影 响 （FLevene=0.443，t=2.228，df=60，P=0.03＜0.05），饲喂花粉组的工蜂初生重（0.078 1±0.000 9）g显著高于对照组（0.075 0±0.001 0）g。通过饲喂花粉能够有效的提高工蜂的初生重，从而为今后蜜蜂处理复杂环境打下基础。

2.2 对工蜂体蛋白的影响

表2补饲花粉对蜜蜂体蛋白的影响

通过标准蛋白确定标准曲线，方程为y=0.635 2x+0.131 3，R2=0.996 5，再以样品吸光度OD值确定各工蜂样品的体蛋白量，结果表明饲喂花粉对东方蜜蜂工蜂的体蛋白有显著影响，从表2可知，饲喂花粉组的工蜂体蛋白平均为（0.576 3±0.163 1）mg，显著高于对照组（0.475 8±0.096 9 mg，P=0.013＜0.05）。

3 讨论

花粉多样性及质量能够改善蜜蜂生理状况，我们的结果也证实了这一点，通过补充高质量的花粉，更进一步提高了蜂群中存储花粉的丰富度，在长期的取食后可以提高东方蜜蜂工蜂的初生重和体蛋白。这也更加证实了在自然环境中，花粉源丰富度及可利用性能够很大程度地提升蜜蜂的健康[1]。

幼蜂，是刚出房1～4日龄的工蜂，王浆腺发达，营养丰富的花粉是影响这些个体蜜蜂的重要因子。Standifer在蜜蜂的膳食结构中添加蛋白质的水平可以激发蜜蜂咽下腺的发育[10]。Garance补饲营养丰富的悬钩子花粉与差的欧石楠花粉，结果表明取食蛋白质丰富的花粉的工蜂能促进组织中腺泡发育和较高的卵黄原蛋白及转铁蛋白基因的表达，并有显著的抗螨性[1]。确实，在取食花粉的研究中已表明对西方蜜蜂的新陈代谢、免疫[11]、抵抗病原体能力如细菌、病毒、微孢子和降低寄生虫的易感性[12]。中蜂（东方蜜蜂）是我国的土著种，补饲花粉对提升中蜂的质量，如初生重和体蛋白，能加强蜜蜂个体在日后面临复杂环境的应对能力均具有重要意义。