甲型H1N1 流感73 例T 淋巴细胞亚群分析

虎维东，张静，王小军，赵燕霞，杨晓丽，胡建明

2009 年6 月11 日世界卫生组织已宣布对甲型H1N1 流感的警戒级别升至6 级，意味着甲型H1N1流感的世界性大流行已形成［1-3］。本研究分析了2009年11月以来在甘肃省人民医院、兰州大学第二医院收治的甲型H1N1 流感病人外周血中T 淋巴细胞亚群相关指标的改变。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2009 年11 月5 日至2017 年1月15 日甘肃省人民医院及兰州大学第二医院所收治的73 例甲型H1N1 流感病人，年龄（50.09±23.35）岁，所有病例符合中国卫生部疾病控制司发布的《甲型H1N1 流感诊疗方案（2009年第三版）》［4］。病人或其近亲属知情同意，本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。

1.2 诊断依据依据《甲型H1N1 流感诊疗方案（2009年第三版）》诊断［4-5］。

1.3 检测方法所有病例均在诊断初期（病人发热、咳嗽、咳痰、乏力、全身酸痛等症状明显，胸片或CT 示双肺出现新的浸润性病变且进展迅速），入院后病人体温达38.5 ℃以上时采血；缓解期（病人发热、咳嗽、咳痰、乏力、全身酸痛等明显缓解，胸片或CT 示双肺浸润性病开始吸收）体温降至正常的第5～7 天采血；以及恢复期（症状消失，胸片或CT示双肺浸润性病变大部分吸收）病变大部分吸收后1 周内采血，均为空腹采血，血液离体2 h 内进行总T 淋巴细胞、CD4+T 淋巴细胞、CD8+T 淋巴细胞的检测。

1.4 试剂和仪器T淋巴细胞亚群采用结合三色荧光素的免疫单克隆抗体直接标记后（试剂盒为美国R&DT-SUBSET），用多参数流式细胞仪，CELLQUEST流式数据获取与分析软件检测。

1.5 统计学方法73例甲型H1N1流感病例资料均使用SPSS 10.0软件进行录入，计量资料以±s表示，采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。

2 结果

甲型H1N1 流感病人T 淋巴细胞亚群变化情况的比较在甲型H1N1流感病程诊断初期即有相当部分病人CD8+T淋巴细胞开始升高，至缓解期、恢复期时逐渐降低；诊断初期与恢复期相比差异有统计学意义（P＜0.05），而诊断初期与缓解期、缓解期和恢复期则差异无统计学意义（P＞0.05）；病程中总T淋巴细胞在诊断初期有不同程度下降，随病情好转逐渐回升，并且诊断初期和恢复期差异有统计学意义（P＜0.05）；CD4+T淋巴细胞变化趋势和总T淋巴细胞相似，但诊断初期、缓解期、恢复期之间差异无统计学意义（P＞0.05）。甲型H1N1流感病人CD4+T淋巴细胞/CD8+T淋巴细胞变化情况的比较：CD4+T淋巴细胞与CD8+T淋巴细胞比值在诊断初期、缓解期、恢复期差异无统计学意义（P＞0.05），但可以发现在恢复期有升高的趋势。见表1。

表1 甲型H1N1流感73例病程中T淋巴细胞亚群的变化情况/±s

表1 甲型H1N1流感73例病程中T淋巴细胞亚群的变化情况/±s

病程诊断初期缓解期恢复期F 值P 值总T细胞（cells/ul）44.09±13.51 51.09±12.99 61.91±12.1 5.617 0.004 CD4+T细胞（cells/ul）47.27±7.73 46.91±7.44 50.55±12.84 0.018 0.930 CD8+T细胞（cells/ul）42.27±11.13 38.36±12.17 29.26±12.99 3.247 0.017 CD4+/CD8+1.33±0.39 1.33±0.39 1.73±0.79 0.508 0.027

3 讨论

甲型H1N1 流感是一种新的传染病，该病传染性强，人类对它尚未完全认识［6］。在正常机体内，淋巴细胞亚群之间以及与其他免疫细胞之间，在数量上保持着一定的比例，如果免疫细胞种类比例失调或者细胞亚群比例失调，体内免疫功能则发生紊乱，将导致疾病的发生，特别是感染性疾病或自身免疫病［7-9］。T淋巴细胞是介导细胞免疫的主要细胞，根据其表面标志细胞黏附分子的不同，T淋巴细胞可分为CD4+细胞和CD8+细胞两大亚群［10-11］。在正常情况下，T淋巴细胞亚群相互作用，平衡、稳定地调节维持机体的免疫功能［12-13］。CD4+T淋巴细胞又称辅助性T淋巴细胞，能促进B细胞、T淋巴细胞和其他免疫细胞的增殖与分化，协调免疫细胞间的相互作用［13］。CD8+细胞按其功能可分为细胞毒性T淋巴细胞和抑制性T淋巴细胞［14］，其中细胞毒性T淋巴细胞为主要部分，与抗病毒免疫、抗肿瘤免疫以及对移植物的移植排斥反应有关，是抗病毒感染的主要效应细胞；抑制性T 淋巴细胞可抑制免疫应答的活化期，其功能变化是引起各种免疫功能异常的重要原因。CD3+则代表着T淋巴细胞总数，一般为CD4+和CD8+细胞之和，CD4+/CD8+比值的动态恒定可以维持细胞免疫反应的平衡［15-16］。通过检测T淋巴细胞亚群可以间接反映细胞免疫功能的状态［17-18］。

本研究通过对甲型H1N1 流感病人外周血T 淋巴细胞亚群的测定，发现在病程诊断初期即有相当部分病人CD8+T 淋巴细胞开始升高，可能与病毒感染后机体的免疫应答有关。同时与Powell 等［19］的研究结果一致，发现在抗甲流病毒感染的免疫过程中，CD4+T 淋巴细胞的数量达峰后，CD8+T 淋巴细胞数仍持续增多，并且在疾病过程中，数量的降低比CD4+T 淋巴细胞要慢。可能是由于CD4+T 和CD8+T 淋巴细胞执行着不同的功能，受不同的机制调节所致。诊断初期总T 淋巴细胞下降，至缓解期、恢复期时逐渐恢复；CD4+T 淋巴细胞的变化趋势和总T 淋巴细胞相似；CD4+T 淋巴细胞与CD8+T淋巴细胞比值虽然在诊断初期、缓解期、恢复期没有统计学上的差异，但可以发现在恢复期有升高的趋势。甲型H1N1 流感病人发病初期CD8+T 淋巴细胞的升高，CD4+T 淋巴细胞、总T 淋巴细胞及CD4+T淋巴细胞与CD8+T 淋巴细胞比值的降低，说明病人机体细胞免疫水平降低，这就可以解释为什么甲型H1N1 流感病人容易反复发生肺部感染，进一步加重病情。