液相色谱法测定笋制品中阿斯巴甜的含量

王朝杰，陈艳茹，张友青，赵佳丽，陈睿轩，张惠君

(浙江省杭州市临安区产品质量监测中心，浙江 临安 311300)

阿斯巴甜(Aspartame)是由天冬氨酸和苯丙氨酸结合而成的缩二氨酸的甲基酯，作为新型甜味剂逐渐被人们所熟悉，且其在体内迅速代谢为天冬氨酸、苯丙氨酸和甲醇，甲醇在体内代谢为甲醛，进而氧化为甲酸，以甲酸形态在体内停留时间最长，因此被认为是甲醇毒性的作用机理，但是阿斯巴甜中含有苯丙胺酸，不适用于苯丙酮尿症患者，因此采取科学方法准确测定食品中阿斯巴甜的含量至关重要[1]。

目前行业内对阿斯巴甜的检测，已经有比较多的报道，有对阿斯巴甜单独的研究[2]，也有针对多种甜味剂的检测方法[3-6]，本文针对自身实验室实情与临安地区笋制品的抽检情况，结合国标[7]开发一种快速、节约、环保的方法，提高工作效率的同时，尽量减少了有机试剂的使用，并且取得良好的效果，使本方法具有一定的使用价值。

1 实 验

1.1 仪器和设备

LC-20AD液相色谱仪，配光电二极管阵列紫外可见光检测器；HC-3018高速离心机；Think-lab超纯水机，METTLER TOLEDO电子天平，FLUKO均质器。

1.2 试 剂

阿斯巴甜标准物质(97.7%)，阿斯巴甜标准储备液(1 mg/mL)；阿斯巴甜标准使用液系列浓度为5、10、25、50、100 mg/L；乙腈(色谱纯)；乙酸铵(色谱纯)。

1.3 实验方法

1.3.1 样品前处理

酱腌菜类笋制品：取适量样品经组织捣碎机打碎后，称取5 g打碎样品至100 mL离心管中(精确至0.001)，加入50 mL超纯水，用均质器打成匀浆状态，离心取上清液过滤，滤液经0.45 μm水系滤膜过滤后上机分析。

笋干制品：取适量样品剪成颗粒状后混匀，称取5 g混匀样品至100 mL离心管(精确至0.001)，加入50 mL超纯水，盖上盖子过夜泡胀，然后用均质器打成匀浆状态，离心取上清液过滤，滤液经0.45 μm水系滤膜过滤后上机分析。

1.3.2 高效液相色谱条件

色谱柱：纳谱分析ChromCore C18-P柱(5 μm，4.6×250 mm)；柱温为30 ℃；进样量10 μL；流速0.8 mL/min；流动为乙腈：20 mmol/L乙酸铵(20:80)；检测波长210 nm。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

本实验采用光电二极管紫外可见光检测器，在波长190～400 nm范围内对阿斯巴甜标准系列使用液进行扫描，结果发现在210 nm处，达到最高响应值。

2.2 流动相的选择

考虑到甲醇和乙腈的价格和国标中甲醇-水(40:60)和乙腈-水(20:80)的比例，以及乙腈作为流动相，阿斯巴甜保留时间更早，综合计算下还是乙腈-水更加节约有机试剂和成本。

在使用乙腈-水流动相中，发现本实验室色谱柱有峰宽过宽以及拖尾的问题，故选择加入缓冲盐改善峰形，查阅相关文献[7]和实际试用后，以及考虑到检测酱腌菜中其它添加剂指标的便利性，最终选择20 mmol/L的乙酸铵溶液作为缓冲液流动相。

此色谱条件下，阿斯巴甜标准图谱如图1所示。

图1 阿斯巴甜标准溶液(浓度5 μg/mL)在210 nm波长下的色谱图Fig.1 Chromatogram of aspartame standard solution (concentration 5 μg/mL) at 210 nm wavelength

2.3 样品前处理方法的选择

阿斯巴甜是一种易溶于水的甜味剂。笋制品打碎后称样至离心管中，再进行匀浆处理，即可均匀提取出阿斯巴甜，相比较国标，去除了甲醇的使用，该处理方法快速环保，处理液也可以继续上机做酱腌菜的其它添加剂指标，大大节约了人力物力。

2.4 线性范围、精密度和检出限

在本实验色谱条件下对一系列不同质量浓度的标准系列使用液进行上机测定，以各组分的峰面积(A)对质量浓度(C(μg/mL))绘制标准曲线，其线性关系、相关系数、检出限(RSN=3)和相对标准偏差见表1。结果表明，阿斯巴甜在5～100 μg/mL范围内有良好线性，可以满足定量分析的需要。

表1 线性关系、精密度和检出限Table 1 Linearity, precision and detection limit

2.5 样品加标回收实验

笋制品和笋干制品各取适量阴性样品制样，做加标实验，各加3个浓度，每个浓度做3个平行，结果见表2。结果显示该方法回收率范围在94.2%～98.6%，RSD为1.39%，可以适用于日常笋制品中阿斯巴甜的检测。

表2 阴性样品加标回收率Table 2 Recovery rate of negative sample

2.6 实际样品的测定

随机抽检临安地区上市的笋制品20个批次，其中阿斯巴甜检出2个批次，较多检出甜蜜素和糖精钠，添加量都在GB 2760-2014规定的限量值以内。

3 结 论

本方法测定笋制品中的阿斯巴甜，相对于国标对阿斯巴甜的检测，具有快速、节约、环保的优点，处理液也可进行其它添加剂指标的测定，节省了人力物力。实验数据证明，该方法具有较好的线性和较高的准确度、精密度和灵敏度，能够满足笋制品的国内市场监管和进出口检测要求，此方法的应用具有一定的实用价值。