3433例围产期妇女B族溶血性链球菌感染分析

吴海丹 童郁 林建萍

[摘要] 目的 探讨温州地区3433例不同育龄妇女围产期B族链球菌（GBS）感染状态及GBS携带耐药率情况。 方法 收集我院2018年8～12月3433例孕晚期孕妇生殖道分泌物标本，采用实时荧光定量PCR技术对标本GBS核酸检测，并对核酸阳性的患者进行GBS培养确认和药敏实验。 结果 温州地区3433例孕妇中检出GBS感染399例，感染阳性率为11.6%;将20～45岁阶段的孕妇按年龄分成5组，其GBS阳性感染率分别为10.3%、12.0%、11.6%、13.4%、9.6%。药敏结果统计发现耐药率高的抗生素为四环素、氯霉素、红霉素、克林霉素、环丙沙星、左氧氟沙星，GBS的一线抗生素青霉素耐药率为1.1%，未检测到GBS对氨苄西林、万古霉素耐药的菌株。不同年龄组感染率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 对温州地区孕妇采用PCR核酸技术筛查GBS感染，能够缩短传统培养法的检测时间，使临床医生提前评估孕产妇状态，及时采用一线抗生素（青霉素、氨苄西林）干预治疗。

[关键词] B-族链球菌;围产期感染;实时荧光定量PCR;产时抗生素干预策略

[中图分类号] R714.7;R446.5          [文献标识码] B          [文章編号] 1673-9701（2020）24-0139-03

[Abstract] Objective To investigate the status of group B streptococcus（GBS） infection and the rate of resistance to GBS in perinatal period of 3， 433 women of different reproductive age in Wenzhou. Methods A total of 3，433 reproductive tract secretions of pregnant women in late pregnancy were collected in ourhospital from August 2018 to December 2018. Real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect GBS nucleic acids in the specimens. And the GBS culture confirmation and drug sensitivity test were performed on nucleic acid positive patients. Results 399 cases of GBS infection were detected in 3，433 pregnant women in Wenzhou，with a positive infection rate of 11.6%. The pregnant women aged 20-45 were divided into 5 groups， and their GBS-positive infection rates were 10.3%，12.0%，11.6%，13.4%， and 9.6%，respectively. Antibiotic susceptibility statistics showed that the antibiotics with high resistance rate were tetracycline，chloramphenicol，erythromycin， clindamycin，ciprofloxacin，and levofloxacin. The first-line antibiotic penicillin resistance rate of GBS was 1.1%. No GBS strains resistant to ampicillin， vancomycin were detected.There was no significant difference in infection rate between different age groups（P>0.05）. Conclusion The PCR nucleic acid technology was used to screen GBS infection for pregnant women in Wenzhou，which can shorten the testing time of traditional culture methods，allow clinicians to evaluate maternal status in advance，and intervene treatment with first-line antibiotics （penicillin，ampicillin） in time.

[Key words] B-family streptococcus; Perinatal infection; Real-time PCR; Perinatal antibiotic intervention strategies

B-族链球菌（GBS）寄生于健康人的下消化道，带菌率为15%～35%，其往往能够发展到泌尿生殖道，并常与念珠菌感染共存。针对于特殊人群（孕妇和新生儿），GBS携带和持续性感染的危害远远高于普通群体，可引起孕产妇的早产、胎膜早破、产褥感染或宫内感染及新生儿死亡等[1-2]。然而文献发现GBS带菌率的种族和地区差异非常大，故本文研究温州地区孕35～37周孕妇GBS不同年龄组的GBS感染状况及GBS的地区耐药率情况，来了解温州地区GBS的流行特点，为临床的诊疗提供科学依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年8～12月在我院进行产检的3433例产妇作为研究对象，孕产妇签署知情同意书，在孕产妇孕期35～37周时进行GBS检测。

1.2 仪器与试剂

ABI-7500实时荧光定量PCR仪（美国Thermofisher公司），梅里埃VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统（梅里埃公司），B族链球菌核酸檢测试剂盒（博尔诚科技有限公司），细菌鉴定和药敏试剂（梅里埃公司）。

1.3 方法

1.3.1 标本采集和保存  先使用无菌棉签拭去外阴过多分泌物，然后将待用的无菌拭子插入女性生殖道低位1/3处，旋转采集阴道分泌物;再使用第2个无菌拭子插入肛门，定位在肛门括约肌上2～3 cm 处，采集直肠分泌物，注意避免划伤直肠。将采集的不同部位的标本及时送检实验室。保存在4℃冰箱，24 h内检测。

1.3.2 核酸提取  在拭子中加入无菌的生理盐水1 mL，震荡混匀后倒入EP管中，13 000 rpm离心10 min，然后弃上清液。沉淀加入50 μL DNA提取液充分混匀，使用金属浴100℃加热处理10 min后，13 000 rpm离心10 min，待检测。

1.3.3 PCR检测  PCR体系为40 μL，其中DNA模板5 μL，35 μL PCR反应液。反应条件：50℃ 2 min，95℃5 min，（95℃ 15 s，60℃ 35 s）45个循环，在60℃分别用ABI7500仪器检测FAM和HEX荧光信号，读取相应的CT值。

1.4 培养及药敏验证

GBS核酸检测阳性的患者再次采样培养检测，阳性的菌株加做药敏实验。

1.5 统计学方法

采用SPSS17.0统计学软件处理数据。计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各年龄组的GBS核酸阳性的感染率比较

见表1。将20～45岁孕妇按年龄分为5组。温州地区3433例孕妇标本中，通过qPCR法检测出GBS阳性的孕妇为399例，其余为阴性结果，阳性感染率为11.6%。在20～25岁组中851位孕妇检测出GBS阳性为88例，阳性感染率为 10.3%;其次在26～30岁组中1520位孕妇检测出GBS阳性为183例，阳性感染率为12.0%;在31～35岁组中719位孕妇检测出GBS阳性为84例，阳性感染率为11.6%;在36～40岁组中291位孕妇检测出GBS阳性为39例，阳性感染率为13.4%;最后在41～45岁组中52位孕妇检测出GBS阳性为5例，感染率为9.6%;在36～40岁组中的孕妇GBS阳性感染率最高，为13.4%。各年龄组之间进行两两比较，差异无统计学意义（χ2=2.779，P>0.05）。

2.2 GBS药敏结果

对370例GBS核酸阳性的患者加做培养法+药敏实验，观察到其中370株GBS药敏结果，见表2。其中氨苄西林、万古霉素均无耐药，这与汪锋平等[3]的报道相符，青霉素敏感性为98.9%，提示临床可以作为一线用药来指导，而左氧氟沙星、红霉素、克林霉素、氯霉素、四环素、环丙沙星则耐药严重。

3 讨论

GBS学名为无乳链球菌，是乳腺炎的病原体，通常作为条件致病菌共存于人类的阴道和直肠之中。在正常孕妇（6.5%～36.0%）阴道内可发现GBS携带。但随着陆续文献的报道发现，GBS不仅引起孕妇早产，也是新生儿早产、败血症和重症感染的罪魁祸首。GBS感染是孕妇胎膜早破的主要发病因素。发病机制是GBS具备了较强吸附能力，感染繁殖2 h后就可以吸附于母体组织，进一步侵入绒毛膜，通过炎症细胞的吞噬作用和GBS产生的蛋白水解酶的直接侵袭，使孕妇的胎膜组织局部张力降低，最终导致胎膜早破，随着胎膜早破，GBS和其他细菌协同侵入宫腔，可引起胎盘、羊水和胎膜感染。GBS的生殖道感染也间接导致早产。当GBS的泌尿生殖道感染时，会引起细胞因子、磷脂酶A2和前列腺素，如白细胞介素IL-1、IL-6、IL-8、IL-10和肿瘤坏死因子TNF等的释放，刺激子宫收缩导致早产。而且，GBS仍是造成产褥热的重要致病菌之一。临床孕妇感染后会出现放热早，平均产后11 h即发热，伴有畏寒、心率快、腹胀、子宫复旧不良、宫旁或附件触痛，妇科检查发现子宫或附件压痛，体温超过38℃时往往伴发败血症[4]。目前，国内随着新生儿GBS重症感染个案报道逐步增多，此感染性疾病的治疗和预防才被认识与重视，所以国内各个妇幼保健医疗机构纷纷开展 GBS产前筛查。查阅中华围产医学杂志刊登的妊娠期GBS感染处理措施，围产医学专家建议国内借鉴欧美地区的产时抗生素干预策略（Intrapartum antibiotic prophylaxis，IAP）预防方法，极力推荐35～37孕周的GBS筛查策略来执行。但是，我国在筛查策略及方法的选择上没有具体文件的工作指南，缺乏可以执行的相关策略。回顾欧美地区的情况，美国CDC在2010年颁布了GBS预防指南，此指南是在美国儿科学会、美国妇产协会、美国家庭医师学会、美国微生物协会和美国护理助产师协会等共同协商下，在2002版基础上修订而完成。指南主要推荐基于分娩危险因素和孕晚期 GBS培养普筛相结合的IAP预防策略。推荐的还是以培养法为技术的检测策略[5-7]。欧洲国家从2002年起跟随美国GBS普筛预防策略，新生儿GBS感染的发病率有所减低。但是，欧洲各个国家的临床产科医生与临床新生儿医生对鉴定IAP接受者评估、降低新生儿感染发生率上还存有诸多的争议。2013年6月在佛罗伦萨城市来自感染性疾病协会、欧洲临床微生物学、欧洲儿科研究协会、欧洲围产协会和欧洲新生儿科协会等不同领域专业的专家一起达成了统一方案，随即建立了欧洲共识，其核心内容是推荐快速实时PCR法的产时 GBS筛查策略[8]。两大欧美体系选择了不同的检测路线。而根据我国的国情，本次研究采用快速实时PCR法检测[9]，与培养法比较，缩短了检测的时间，提早给予临床对GBS阳性病例加以诊断和治疗。温州地区孕妇妊娠晚期生殖道GBS感染率较高，GBS阳性感染率为11.6%，高于侯雅萍等[10]报道的上海地区孕妇感染率6.3%，低于孙长冬等[11]报道的宁波地区孕妇感染率15.58%，与林保安[12]报道的广州地区孕妇感染率32.4%相差较大，从各地区GBS携带数据分析，GBS感染率可能与纬度变化有关系，低纬度的感染率较高。以往临床上通常采用细菌培养方式来检出GBS，培养法耗时较长，阳性结果鉴定和药敏鉴定需要耗时48～72 h，而且如果菌量较少时，检出率不高。而本次研究采用欧洲筛查指南标准，利用核酸技术来筛查GBS[13-15]，提高了检测灵敏度，而且能够快速出具检测报告，使临床医师在第一时间里给予干预，来减少早产、胎膜早破、宫内感染和新生儿感染的概率[16-18]。对温州地区孕妇不同年龄组的GBS感染率调查，通过统计学分析，各年龄组之间阳性感染率差异无统计学意义，GBS携带与孕妇年龄没有直接的关系，不会随着年龄的增加，而使GBS感染率升高。通过进一步对温州地区的GBS菌株耐药性分析，检测到第一线抗生素（青霉素、氨苄西林）耐药率极低（<2%），可以作为孕妇首选药物使用[19]，而二线类抗生素（左氧氟沙星、红霉素、克林霉素、氯霉素、四环素、环丙沙星）耐药率非常高，如果患者对青霉素过敏时，选用红霉素或克林霉素时，要进行D试验耐药性检测[20]。GBS对孕产妇、新生儿危害极大，PCR荧光法检测具备了快速、准确、灵敏度高等特点，值得临床推广应用，能够准确和特异的为产科医生提供诊治的依据。

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（收稿日期：2019-10-10）