在肝组织网状纤维染色中复染方法的选择

张红雷，单天凤，王 芳，邵 晨，杨 磊，王泰龄⋆

（1.中日友好医院 病理科，北京 100029；2.天津医科大学，天津 300070）

网状纤维染色在肝病病理诊断中起着关键作用。在不同的肝脏疾病中往往需要配合不同的复染方法以清晰显示关键的组织及细胞结构，有利于病变的分析。本文对比了3 种不同复染方法及无复染法在网状纤维染色中的不同特点，并进行了分析和总结，为肝病病理诊断染色选择提供必要的依据和参考。

1 材料和方法

1.1 材料

组织切片：我院病理科肝组织标本，中性福尔马林固定，切片厚4μm。网状纤维染色-渡边染色法[1]试剂：酸性高锰酸钾、草酸、硫酸铁铵、氨银液、还原液、氯化金。复染试剂：核固红、丽春红、亮绿、Schiff 液、苏木素。

1.2 方法

1.2.1 无复染无分化

常规脱蜡至水，酸性高锰酸钾5min，水洗；草酸2min，水洗；铁明矾1min，水洗；氨银液10～60s，还原数秒，水洗；脱水透明封固。

1.2.2 复染核固红

常规脱蜡至水，酸性高锰酸钾5min，水洗；草酸2min，水洗；铁明矾1min，水洗；氨银液10～60s，还原数秒，水洗；氯化金分化1～3min，水洗；核固红复染5min，脱水透明封固。

1.2.3 复染Masson

常规脱蜡至水，酸性高锰酸钾5min，水洗；草酸2min，水洗；铁明矾1min，水洗；氨银液10～60s，还原数秒，水洗；氯化金分化1～3min，丽春红3min，水洗；磷钼酸1min，亮绿2min，水洗；脱水透明封固。

1.2.4 复染过碘酸-雪夫（periodic acid-Schiff，PAS）染色

常规脱蜡至水，酸性高锰酸钾5min，水洗；草酸2min，水洗；铁明矾1min，水洗；氨银液10～60s，还原数秒，水洗；氯化金分化1～3min，Schiff 液10min，水洗；苏木素复染，脱水透明封固。

2 结果

无复染无分化：网状纤维呈黑色，胶原纤维呈棕黄色，背景无色或淡黄色（图1，见彩插一）。复染核固红：网状纤维呈黑色，胶原纤维呈棕黄色，细胞核呈红色，背景淡红色（图2，见彩插一）。复染Masson：网状纤维呈黑色，胶原纤维呈绿色，细胞核呈红色，肌纤维呈深红色，背景淡红色（图3，见彩插一）。复染PAS：网状纤维呈黑色，肝细胞浆呈樱桃红色，背景淡红色（图4，见彩插一）。

3 讨论

网状纤维染色在病理诊断中应用广泛，对肝病病理尤为重要。该染色可清晰反映肝病变的网状支架形态[2]，并在一定程度上区分网状纤维及胶原纤维。一方面通过显示肝板网架断离、塌陷、胶原沉积甚至纤维化等，判断肝脏疾病的性质、程度及转归。另一方面还可用于观察不同肝脏肿瘤细胞的排列模式，从而对判断肿瘤性质及来源亦有重要意义。根据观察不同病变的需要，在网状纤维染色的基础上，附加不同复染方法，旨在对其它目标组织结构或细胞有选择性地突出显示，对疾病的观察及诊断往往起到关键作用。

无复染无分化法可以区分肝组织胶原纤维和网状纤维的变化，反映肝实质损伤或纤维化程度，在一般的肝病病理诊断中应用广泛（图1，见彩插一）。

复染核固红后，在原网状纤维染色显示肝板结构的基础上，还可显示肝细胞损伤，如大泡性脂变（见图2，与图1为同一部位连续切片）。与无复染法相比，病变观察可以更加细致全面。

复染Masson 后，网织纤维呈黑色，胶原纤维呈绿色，肝细胞呈浅红色，肝细胞胞核、红细胞及平滑肌呈深红色。优势较大，特别在重度肝炎病变中，既标记出网织纤维同时又显示胶原纤维，2 种纤维组织颜色对比度高，差别鲜明，在肝组织坏死带内可清晰显示胶原纤维沉积的情况，以区分较为新鲜的坏死带或纤维化带，从而判断病变发生的进程，是评价肝组织结构损伤、修复和纤维化程度的主要依据[3]。因此，该复染方法应用广泛。此外，Masson 还可以将平滑肌细胞等通过丽春红标记成红色，可以清晰显示汇管区间质内的动脉或门脉管壁的病变（图3，见彩插一）。较网状纤维染色（方法1.2.1）而言，复染Masson 对技术要求更高。玻璃器皿必须十分清洁，试剂必须达到相应纯度，各试剂比例必须精确[4]，其中氢氧化铵的量不能过多，否则将降低染色的敏感性，使网状纤维浸染较弱或达不到浸染效果[5]。另外，氨银液染色时间应精确、网状纤维镀银要恰好，染色程度达标的同时，其余部位要避免非特异性黑颗粒沉积，以免背景过深或染色剂叠加等，影响后续复染效果。

虽然复染Masson 优势颇多，应用广泛，但仍有一些特殊肝病需要其它复染方法。肝细胞富含糖原，PAS 染色可以将肝细胞染成樱桃红色。在很多肝脏血管疾病中，例如肝小静脉闭塞病引起的静脉回流障碍，小叶中心带肝实质破坏严重，复染PAS，可显示严重破坏的肝网架结构及剩留的肝实质（图4，见彩插一），有利于辨别肝细胞损伤[3]，对于该类疾病的诊断起着关键作用。

综上，4 种复染方法由于复染的目标组织或细胞不同，决定了各自在不同肝脏病变中的染色优势，熟练掌握每种复染方法的优缺点，并在疾病诊断中合理应用，必将有助于疾病诊断。此外，不同的复染方法对技术的要求也有所不同，技师应仔细认真，与诊断医师充分沟通与合作，更好地服务临床。

图1 网状纤维呈黑色，胶原纤维呈棕黄色，背景无色或淡黄色。

图2 网状纤维呈黑色，胶原纤维呈棕黄色，细胞核呈红色，背景淡红色。

图3 网状纤维呈黑色，胶原纤维呈绿色，细胞核呈红色，肌纤维呈深红色，背景淡红色。

图4 网状纤维呈黑色，肝细胞浆呈樱桃红色，背景淡红色。