黔东南州3个规模猪场伪狂犬病免疫抗体检测分析

王正文，金 鸿，陈 勇，吴冬梅，倪定琴，汪忠荣*

(1. 贵州省黔东南苗族侗族自治州动物疫病预防控制中心，贵州凯里556000；2. 凯里市动物疫病预防控制中心，贵州凯里556000； 3. 凯里市宏大牧业有限责任公司，贵州凯里556000)

黔东南州属于喀斯特山区地带，特殊的地理条件限制了规模化猪场的建设，现有平均年存栏种猪500头以上的规模猪场10个。猪伪狂犬病的防控和净化是种猪场防疫工作的重点内容，为了解我州规模猪场伪狂犬病免疫状况，本试验通过对3个具有代表性的规模猪场进行伪狂犬病免疫抗体监测，为该病的防疫和净化提供参考。

1 材料

1.1 检测血清2017—2019年，每年3月和9月分别对黔东南州3个规模猪场不同猪群进行伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗免疫(疫苗分别购自上海海利生物技术股份有限公司，批号：20160730；武汉科前生物股份有限公司，批号：180521；浙江美保龙生物技术有限公司，批号：281706)，4月和10月按群体5%比例采集血液，分离血清，-20 ℃冰箱冻存待检。3年采集血清A场(大型规模场，种猪≥1 000头)356份，B场(中型规模场，600≤种猪<1 000头)156份，C场(小型规模场，500≤种猪<600头)165份，共计677 份。

1.2 检测试剂猪伪狂犬病病毒gB抗体ELISA检测试剂盒，购自深圳市康百得生物科技有限公司(批号：20170325、20171124、20181026)。

1.3 检测方法在反应孔内先加入样品稀释液50 μL，再分别加入等量的检测样品、阴性和阳性对照，封板，室温反应1 h；洗板，每孔加入酶标结合物100 μL，室温避光反应20 min；甩去孔内液体，加显色液100 μL，室温避光反应15 min；加入终止液50 μL，用酶标仪读取D650 nm值。

1.4 判定标准有效性判定：阴性对照平均D650 nm值-阳性对照平均D650 nm值>0.3为有效，小于0.3则实验无效。计算公式：S/N=样品D650 nm值/阴性对照平均D650 nm值。S/N≤0.6判为猪伪狂犬病病毒gB抗体阳性；0.60.7判为猪伪狂犬病病毒gB抗体阴性。

1.5 数据统计应用SPSS19.0软件进行数据统计和差异显著性分析。

2 结果

2.1 不同年度伪狂犬病免疫抗体合格率由表1可见：不同年度猪群伪狂犬病免疫抗体合格率差别较大，2017年伪狂犬病免疫抗体合格率为68.00%，未达到农业农村部要求(≥70%)，2018年和2019年伪狂犬病免疫抗体合格率分别为85.66%、95.54%，均高于农业农村部规定标准。2019年与2017年比较差异显著(P<0.05)。

表1 2017—2019年伪狂犬病免疫抗体检测合格率

2.2 不同猪场伪狂犬病免疫抗体合格率由表2可见：各场伪狂犬病免疫抗体合格率差别较大，A场平均合格率为96.07%，B场平均合格率为78.85%，均高于农业农村部规定标准；C场平均合格率为69.70%，未达到农业农村部标准要求。A场与C场比较差异极显著(P<0.01)，A场与B场比较差异显著(P<0.05)。

表2 各场伪狂犬病免疫抗体合格率

2.3 不同猪群伪狂犬病免疫抗体离散度分析由表3可见：不同猪群免疫抗体离散度均较高，CV>60%，表明免疫抗体水平整齐度低，均一性差。

表3 不同猪群伪狂犬病免疫抗体离散度

3 结论

3个规模猪场伪狂犬病免疫抗体合格率呈逐年升高趋势，其中2018、2019年高于农业农村部要求≥70%的标准；大中型规模猪场免疫抗体达到标准要求，小型规模猪场未达到标准要求；不同猪群免疫抗体离散度高，整齐度低。

4 讨论

4.1伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(PRV)引起多种动物共患的传染病，猪是该病毒唯一的自然贮存宿主[1]。犬、猫、牛、羊等动物感染后表现为致死性[2，3]，种猪群感染后可引起繁殖障碍[4]。我国《动物疫病防控中长期规划(2012—2020年)》要求，2020年我国所有种猪场必须达到 PRV净化标准。研究表明，PRV在黔东南州规模猪场普遍存在[5]，通过疫苗免疫是净化该病的必备条件之一。黔东南州大型规模猪场根据农业部要求，从2015年起开始对场内种猪群进行猪瘟、口蹄疫免疫净化，2016年起进行伪狂犬病免疫净化，但小规模猪场未引起重视。有研究显示，规模猪场通过免疫伪狂犬病病毒基因缺失疫苗，调整免疫程序，做好综合性防控措施等，伪狂犬病免疫抗体合格率能维持较高水平[6]。同时若猪场安全卫生防护工作做得好，疫苗免疫效果相对较好[7]。本次检测结果与相关研究相符，饲养管理和生物安全防护条件好的猪场免疫抗体合格率较高。

4.2大部分养殖场在追求高免疫抗体合格率时，常不关注抗体整齐度。这和目前在免疫时进行“一刀切”的免疫方式有关，大部分猪场对免疫效果不进行跟踪监测，造成猪群免疫抗体参差不齐，猪群对疫病的免疫存在较大隐患。因此，建议猪场定期进行抗体监测，及时调整免疫程序，制定符合本场实际的疫病防控方案，优化调整免疫程序和加强生物安全防护措施，从根本上防止动物疫病发生。