寻常型白癜风与晕痣患者外周血T淋巴细胞亚群及Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡比较

曹 伟, 冯玉婷, 王小媛, 王颖娟, 康 乐, 易海玲,杨 曦, 李青青, 李习梅, 李 宝, 李 超

(陕西省宝鸡市中心医院 皮肤科, 陕西 宝鸡, 721008)

白癜风和晕痣均是临床常见的脱色性皮肤病，患者皮肤色素脱失均与免疫性黑色素细胞破坏相关[1-2]。近些年，随着对T淋巴细胞亚群的深入研究，发现辅助性T细胞(Th)1(Th1)、Th2以及Th17、调节性T淋巴细胞(Treg细胞)这两对相互抑制、相互平衡的T淋巴细胞及其细胞因子在诸多自身免疫性皮肤病中发挥着关键性作用。本研究分析寻常型白癜风和晕痣患者外周血Th1、Th2细胞及Th17、Treg细胞的流式细胞学特征，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月—2019年1月本院皮肤科门诊收治的进展期寻常型白癜风患者43例和Ⅰ、Ⅱ阶段晕痣患者37例。纳入标准: ① 临床及病理确诊为进展期寻常型白癜风及Ⅰ、Ⅱ阶段晕痣患者; ② 3个月内未使用糖皮质激素及免疫调节剂等系统治疗，3个月内未应用皮损局部治疗药物及光电疗法等患者; ③ 患者均签署知情同意书。排除标准: ① 合并其他自身免疫性疾病者; ② 孕妇及哺乳期妇女; ③ 寻常型白癜风合并晕痣者。对照组(n=15)为本院常规体检健康人群。

1.2 研究方法

抽取寻常型白癜风组、晕痣组及对照组受试者常规清晨空腹外周血5 mL, 并即刻进行流式细胞术检测。CD3-PE-vio615、CD8-Percp-vio700、IFN-γ-FITC、IL-4-PE、IL-17A-PE、IgG1-FITC、IgG1-PE、CD4-Percp-vio700、CD25-PE、CD127-FITC、IgG2a-FITC、IgG2-PE、刺激剂均购自Beckman Coulter公司，检测仪器为Beckman Coulter XL，购自美国Beckman Coulter公司。

外周血中Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞的检测: 取外周血500 μL, 加入刺激剂，混匀, 37℃孵育4～6 h; 取50 μL孵育刺激后的样本，设同型对照管和检测管，共3管，分别加入CD3-PE-vio615、CD8-Percp-vio700, 混匀，室温避光15 min; 加入A液固定剂100 μL, 孵育5 min; 加入溶血素500 μL, 混匀，室温避光10 min, 1 500 转/min离心5 min, 弃上清; 加入B液破膜剂500 μL, 孵育10 min, 1 500转/min离心5 min, 弃上清; 同型对照管和检测管分别加入同型抗体IgG1-FITC、IgG1-PE和检测抗体IFN-γ-FITC、IL-4-PE及IL-17A-PE, 混匀，室温避光25 min; 1×PBS洗涤, 1 500 转/min离心5 min, 弃上清; 加1×PBS 500 μL, 1 h内上机。

外周血中Treg细胞的检测: 取外周血50 μL, 设同型对照管和检测管，共2管，分别加入同型抗体IgG2a-FITC、IgG2-PE、CD4-Percp-vio700和检测抗体CD127-FITC、CD25-PE、CD4-Percp-vio700, 混匀，室温避光15 min; 加入溶血素500 μL, 混匀，室温避光15 min; 1×PBS洗涤, 1 500转/min离心5 min, 弃上清; 加1×PBS 500 μL, 1 h内上机。次日采用流式细胞仪(美国贝克曼公司)检测各管细胞比例。

1.3 统计学方法

2 结 果

2.1 3组受试者一般资料比较

3组性别、年龄分布比较，差异无统计学意义(P>0.05)。寻常型白癜风组及晕痣组均表现为颜面部高发，但组间无显著差异(P>0.05)。寻常型白癜风组多部位者比率显著高于晕痣组多部位者比率(P<0.05)。见表1。

表1 3组受试者一般资料比较

2.2 寻常型白癜风组及晕痣组患者外周血Th1、Th2、Th17及Treg细胞比较

寻常型白癜风组、晕痣组及对照组Th2、Th17细胞水平及Th17与Treg比值(Th17/Treg)有显著差异(P<0.05或P<0.01), Th1、Treg细胞及Th1与Th2比值(Th1/Th2)无显著差异(P>0.05)。见表2。Th1、Th2、Th17及Treg细胞检测值为各细胞占CD4+T细胞的百分比。

表2 寻常型白癜风组与晕痣组患者外周血Th1、Th2、Th17、Treg细胞水平比较

3 讨 论

寻常型白癜风是一种临床常见的获得性、渐进性、脱色性皮肤病，目前病因尚不明确，其中皮肤黑色素细胞功能丧失是主要的发病原因[3-4]。晕痣又称离心性后天性白斑、Sutton痣，表现为色素痣周围出现一圈局限性色素脱失晕，发病率约1%, 多见于青少年[5]。临床上晕痣常单独存在，但也有部分患者合并白癜风，其中泛发型白癜风伴发晕痣比率较高[6]。从免疫学发病机制来看，黑色素细胞特异性T淋巴细胞皮肤迁移在白癜风及晕痣发病中都可能起到关键作用[7], 其中Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡偏移相关黑色素细胞破坏机制的研究越来越受到学术界关注[8]。

Th1/Th2细胞平衡偏移已在很多自身免疫性疾病中得到证实，研究[9]发现Th1细胞功能相对亢进会引起糖尿病、类风湿关节炎、溃疡性结肠炎、皮肤迟发型超敏反应及移植物排斥反应、银屑病等自身免疫性疾病，而Th2细胞过度应答则可以降低机体的抗感染能力，促进抗体过度产生，导致自身免疫性荨麻疹、特异性皮炎、系统性红斑狼疮、哮喘等疾病。Th17/Treg细胞平衡偏移也在免疫性疾病中得到证实[10]。针对白癜风患者Th17细胞的研究[11-12]发现，患者外周血IL-17水平持续升高，且与疾病活动及皮损面积呈正相关。Klarquist J等[13]发现白癜风患者皮损处、皮损周围和非皮损处Treg细胞数量均显著减少。

本研究发现: ① 寻常型白癜风和晕痣患者在性别、年龄方面无显著差异，但寻常型白癜风患者更易出现多部位受累。颜面部多发可能与样本量较少及患者重视程度不同有关。② 在Th1/Th2细胞平衡方面, 3组外周血Th1细胞无显著差异，晕痣患者Th2细胞显著降低，寻常型白癜风与晕痣患者外周血Th1/Th2细胞平衡无显著差异。③ Th17/Treg细胞平衡方面，寻常型白癜风患者外周血Th17细胞水平显著增高，而晕痣患者无明显变化, 3组Treg细胞无显著差异，寻常型白癜风患者外周血Th17/Treg细胞平衡向Th17偏移。

综上所述，寻常型白癜风与晕痣患者外周血Th1、Th2、Th17及Treg细胞变化存在差异，寻常型白癜风患者外周血Th17细胞增高更为明显，而晕痣患者外周血Th2细胞下降更明显，与普遍认为的寻常型白癜风及晕痣系Th2型偏移不同。