魏伟华,刘新海,丘创华
1.广东省深圳市龙岗区第三人民医院检验科,广东深圳518115;2.广东省深圳市第二人民医院检验科,广东深圳518035
宫颈癌为妇科常见恶性肿瘤,可严重危害女性身体健康,需引起临床重视。宫颈癌发生及发展较为漫长,从癌前病变发展至宫颈癌可需10~20年左右,期间采取有效手段对患者进行筛查及干预,可有效阻断癌前病变发展为宫颈癌,降低宫颈癌发病率及患者病死率[1]。目前临床对宫颈癌多采用细胞学技术检查,但其对技术及人员要求较高,在卫生资源有限的地区难以推广[2]。大量研究显示[3],人乳头瘤病毒(HPV)为宫颈癌发生的必要条件,超过99.0%的宫颈癌患者可检测到HPV DNA,而HPV检测结果呈阴性者几乎不会发生宫颈癌,因此HPV检测技术在宫颈癌筛查中具有较高应用价值。该研究选取2017年6月—2018年7月该院收治的1 000名女性为研究对象,将Isotncga用于子宫颈癌检查中,旨在评价其筛查作用,现报道如下。
选取进行宫颈癌筛查1 500名女性,年龄29~63岁,平均(46.78±2.78)岁。纳入标准:患者均宫颈完整,均有性生活史;所有患者均无盆腔放射治疗史、子宫切除史或手术史,所有患者均对该研究知情,且签订同意书,并通过医院伦理委员会的批准。排除标准:妊娠期或哺乳期女性;有检查禁忌证状者;对研究不同意者。
所有患者均行Isotncga检查,检查前3 d不进行阴道冲洗,不应用阴道内药物,检查24 h内嘱患者严禁性生活,于月经期结束后3~7 d检查。以宫颈细胞采样刷收集宫颈脱落细胞,并保存于PreserCyt细胞保存液内,对细胞保存液内标本行预处理,对粘液、炎症细胞及血液与上皮细胞进行分离,制成薄层细胞涂片,以95%酒精固定后行巴氏染色。吸取1 mL标本高速离心10 min,取上清液后加入裂解液100μL,将其充分摇匀。将标本置入干湿恒温器(杭州奥盛)内以95℃的温度对其进行加热,时间15 min。取2μL处理好的标本放入反应液内,并加入阴性及阳性质控。放置反应管于荧光定量PCR检测系统内,将恒温反应程序设置为60℃、75 min。应用人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒(PCR-反向点杂交法)对标本进行检测,严格按照说明书操作。分离提取DNA,随后应用荧光定量PCR扩增仪进行扩增。
病理学检查:将HPV检测呈阳性的女性行进一步阴道镜下可疑部位多点活检,于月经干净后行常规阴道镜检查,镜下仔细观察宫颈病灶形态、边界、血管、表面构型、颜色等征象,对病变最严重的部位行多点活检,若检查无异常现象,则取移行带第3、6、9、12点。病理检查结果分为慢性宫颈炎、轻度不典型增生(CINⅠ)、中度不典型增生(CINⅡ)、重度不典型增生(CINⅢ)、鳞状细胞癌(SCC)。
对HPV分型检测结果进行观察,观察不同年龄段女性HPV阳性率差异,将病理诊断结果作为金标准,与HPV-DNA检测结果进行比较。阴性判定标准:标本在荧光检测通道扩增过程中,无明显指数增长的荧光信号,内参在VIC荧光检测通道循环制≤65 min。阳性判定标准:内参在荧光通道扩增过程中有或无明显呈指数增长的荧光信号。
采用SPSS 20.0统计学软件对数据进行分析,计数资料采用百分比(%)表示,进行χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。
该组1 000名行宫颈癌筛查的女性,HPV DNA检测出危险患者251名,检出率为25.10%,见表1。
表1 HPV分型检测结果分析Table 1 Analysis of HPV typing test results
30~39岁、40~49岁、50~59岁、>60岁各年龄段HPV阳性率分别为26.92%、40.75%、25.87%、5.37%,其中40~49岁HPV阳性率最高,与其他各年龄段相比,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。
表2不同年龄段HPV阳性率分析Table 2 HPV positive rate analysis of different ages
HPV检测技术检出慢性宫颈炎102例、CINⅠ52例、CINⅡ41例、CINⅢ29例、SCC27例,与病理检查结果相比,差异无统计学意义(P>0.05),见表3。
宫颈癌为临床常见的一种恶性肿瘤,多项研究[4-5]表示该病发病病因与HPV感染相关,HPV-DNA检测为直接针对病因的检查手段,可有效对HPV感染女性进行筛查,及时发现并采取适当措施干预,利于降低宫颈癌发病风险,降低患者病死率。WHO指出,可将HPV-DNA检测作为宫颈癌早期筛查方法,其中16、18型为引发宫颈癌常见的类型,约76.58%的宫颈鳞癌可检测出HPV16,而7.51%可检测出18型[6]。我国临床宫颈癌筛选指南指出,对HPV检测为16、18型的患者需转诊阴道镜,其他感染患者不需转诊,只需定期复查[7]。理想的宫颈癌筛查手段需满足价格实惠、操作可行等需求,还需单独提供16、18型信息及其他高危型检测结果及内参检测信息,利于提升宫颈癌筛查效率,为临床诊治提供有力依据。
表3 HPV阳性与病理检查结果比较[n(%)]Table 3 Comparison of HPV positive and pathological examination results[n(%)]
以PCR为基础的HPV分型检测技术为临床筛查宫颈癌的主要手段,敏感性较高,在临床应用广泛,但其需反复热变性,要求设备精良,且操作过程中容易被污染,扩增反应时间较长,存在一定局限性。Isotncga检测技术为一种新型体外核酸扩增技术,具有高效、恒温、高特异性等优点,且不用借助精良昂贵的设备仪器,在临床逐渐应用广泛[8]。Isotncga为基于恒温DNA扩增原理的检查技术,为DNA提取、扩增一体化,可对HPV 16、18型进行特异性区分[9]。Isotncga取材方便,不仅可对已明确出现宫颈病变的女性进行检测,还可对可能患病的女性进行预测,便于临床尽早采取手段干预,阻断癌前病变发展为宫颈癌,降低患者患病率及病死率[10-12]。该次研究结果显示,30~39岁、40~49岁、50~59岁、>60岁各年龄段HPV阳性率分别为26.92%、40.75%、25.87%、5.37%,其中40~49岁HPV阳性率最高,>60岁年龄段HPV阳性率发病率最低,这与曹慧玲等[13]学者在相关研究中得出,在对女性宫颈癌的筛查过程中发现,各个年龄段中HPV阳性率发病率为30~39岁25.14%、40~49岁39.66%、50~59岁24.38%、>60岁5.05%,最高发病率年龄段是40~49岁,与该文所得结果相近。HPV-DNA检测慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC与病理检查结果相比差异无统计学意义(P>0.05),提示Isotncga在宫颈癌筛查中具有较高应用价值,可获得与病理诊断等同的结果。
综上所述,恒温扩增HPV检测技术在子宫颈癌中筛查作用理想,具有较高阳性率。