创伤球菌属的分类鉴定与临床意义

高亚飞徐慧敏张昭宇杨锐

1.甘州区人民医院，甘肃 张掖734000；2.河西学院附属张掖人民医院，甘肃 张掖734000

近些年来随着分子生物学的飞速发展，临床细菌学研究进展很快，在分类和命名上发生了很大的变化，一些新的菌种不断被分离报道命名，特别是在革兰阳性球菌领域，其引起的感染日趋复杂，临床诊治尤为困难，需要临床医生与临床微生物检验师及时了解和认识，对感染细菌做出正确和快速分类鉴定，推动临床抗感染治疗的成功率。创伤球菌属（Helcococcus）是近年来新分类命名的一个菌属，目前菌种成员由最初的1个增加至5个，临床感染病例也不断增加。本文对创伤球菌属的分类、命名、鉴定与临床意义等的研究进展作一综述。

1 创伤球菌属分类与命名

创伤球菌属是触酶阴性，兼性厌氧的革兰阳性球菌，隶属于细菌域、厚壁菌门、梭菌纲、梭菌目、消化球菌科，1993年由Collins等［1］建议独立设立的一个新菌属。以创伤（wound）来命名菌属，命名Helcococcus的寓意为伤口中的球菌，中文译名是创伤球菌，菌属内设一个种，以美国细菌学家Kunz姓氏作为种的名字，称Helcococcus Kunzii，中文译为孔兹创伤球菌。随后Collins等于1999年和2004年发现命名了羊创伤球菌［2］（Helcococcus ovis），瑞典创伤球菌［3］（Helcococcus sueciensis）。美国学者Panackal等［4］也于2004年报道分离1株“化脓创伤球菌”（Helcococcus pyogenica）。Chow等［5］2014年分离报道1株“西雅图创伤球菌”（Helcococcus seattlensis），但“化脓创伤球菌”和“西雅图创伤球菌”未获得国际权威正式分类认可。目前，创伤球菌属正式分类［6］3个种：孔兹创伤球菌，羊创伤球菌，瑞典创伤球菌，模式菌种为孔兹创伤球菌。

2 创伤球菌生物学特性

2.1 形态与染色 创伤球菌为革兰阳性球菌，呈单个、成双、短链、成簇状排列，也可见四联状排列，不形成芽孢，无荚膜，无鞭毛。孔兹创伤球菌不形成链状排列，多成双、成簇状或四联状排列，有报道［7］孔兹创伤球菌菌体大小不等，较葡萄球菌稍大。羊创伤球菌和瑞典创伤球菌多单个、成双、短链排列。“化脓创伤球菌”革兰染色不稳定，与易于脱色的溶血孪生球菌相似［4］。2.2培养特性 创伤球菌为兼性厌氧菌，在有氧、厌氧或5%CO2环境均可生长。在5%羊血琼脂平板上35℃孵育24～48h，形成针尖大小、灰白色或无色、半透明、不溶血或轻微α溶血菌落。在麦康凯平板不生长。创伤球菌有明显的亲脂性，在培养基中添加1%马血清或0.1%的玉米吐温80明显刺激其生长［8］。“化脓创伤球菌”［4］和“西雅图创伤球菌”［5］生长较缓慢，培养2～4d始见菌落，瑞典创伤球菌［3］在厌氧条件下生长良好。孔兹创伤球菌、瑞典创伤球菌和“西雅图创伤球菌”，可与金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）形成卫星状生长现象。

2.3 生化特性 创伤球菌氧化酶阴性、触酶阴性，发酵葡萄糖产酸不产气。孔兹创伤球菌吡咯烷酮芳基酰胺酶（PYR）阳性、亮氨酸氨基肽酶（LAP）阴性，在6.5%NaCl培养基中生长不定，在胆汁-七叶苷肉汤、10℃和45℃均不生长，水解七叶苷，分解乳糖、淀粉、糖原和海藻糖产酸，不水解马尿酸盐、不还原硝酸盐、VP试验阴性，对万古霉素敏感。

3 创伤球菌鉴定与鉴别触酶阴性革兰阳性球菌群初步鉴别

根据万古霉素（Van）敏感性、PYR和LAP三个试验区分［9］：Van敏感、PYR阳性、LAP阴性常见于虚伪球菌属、球链菌属、绿色气球菌和创伤球菌。其中虚伪球菌属和球链菌属菌体呈链状排列，前者6.5%NaCl不生长，水解马尿酸盐，而后者相反。绿色气球菌和创伤球菌菌体呈四联状或簇状排列，但绿色气球菌在血琼脂平板上菌落较大，α溶血环明显，在胆汁七叶苷培养基上生长，大多水解马尿酸盐；而创伤球菌在血琼脂平板上菌落细小，不溶血，在胆汁七叶苷培养基上不生长，不水解马尿酸盐。

创伤球菌属内鉴定。因为创伤球菌属其他菌株罕见于人类感染，临床试验室主要是将孔兹创伤球菌与其他触酶阴性、革兰阳性球菌属进行鉴别。已知的触酶阴性的革兰阳性球菌中，只有孔兹创伤球菌和绿色气球菌形态染色和生化特性很相近。这两种菌的鉴别点：绿色气球菌在厌氧环境不生长或生长不良，草绿色溶血环很明显，对红霉素敏感，分解菊糖、棉子糖、甘露醇、β半乳糖苷酶（ONPG）阳性；孔兹创伤球菌在厌氧环境生长，草绿色溶血环小，对红霉素耐药，不分解菊糖、棉子糖和甘露醇，β半乳糖苷酶（ONPG）阴性。孔兹创伤球菌采用梅里埃API 20 Strep系统鉴定，提示可疑“草绿色气球菌”，菌株编码大多是4100413。采用VITEK 2 Compact微生物自动化鉴定仪GP鉴定卡可获得良好的鉴定结果［10］，有条件的实验室应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法（MALDI-TOF MS），结合16SrRNA基因测序技术和来协助完成鉴定。见表1。

表1创伤球菌属内各种的鉴别特征

4 创伤球菌抗菌药物敏感性

创伤球菌对青霉素、氨苄西林、头孢菌素类、左氧氟沙星、莫西沙星、复方新诺明、利奈唑胺、亚胺培南、万古霉素等抗菌药物敏感；对红霉素多耐药，其次是克林霉素。临床经验治疗建议首选β-内酰胺类药物和万古霉素［11-12］。

5 创伤球菌的临床意义

创伤球菌属的设立已27年，由最初命名孔兹创伤球菌增至约5个种。但羊创伤球菌仅分离于动物，未见人体感染报道。瑞典创伤球菌曾经从菌血症患者血液中检出1例，伤口分泌物检出2例［3］。“化脓创伤球菌”由人工关节感染脓液中检出1例［4］。“西雅图创伤球菌”仅从尿毒症患者血液中分离1例［5］。国内外感染病例报告以孔兹创伤球菌最为常见［12］。以往认为创伤球菌是人类和动物皮肤的常住菌群，尤其在下肢皮肤。除引起一些免疫缺陷患者的机会感染外，很少引起人类感染性疾病。患者常伴有基础疾病（如糖尿病、高血压等）或免疫功能缺陷，与长期或多次住院、大量使用抗菌药物和免疫抑制剂有关，多在人体下肢、足部发生化脓性感染，以及心内膜炎、菌血症、脑膜炎、软组织脓肿、伤口、心脏植入物、人造关节化脓性感染等［11］，且感染标本常常分离出复数菌，伴随其他病原菌一起生长，如葡萄球菌、肠杆菌科、厌氧菌等，以葡萄球菌常见［11］。但近年来孔兹创伤球菌引起感染日渐增多，在免疫功能正常、无基础疾病的人群中不断分离报道，是一种潜在的病原菌，其致病作用及临床感染特点有待进一步阐明和认识［13］，在我国一些地区已逐渐分离报道，须引起临床微生物检验师的重视，提高对该细菌的认识，做出正确和快速分类鉴定。