HPLC法同时测定灯盏细辛注射液中多种成分

杨秀峰 于百青

摘要：目的：研究HPLC法制定下的灯盏细辛注射液的中多种成分的研究方法。其中包含绿原酸、咖啡酸、灯盏花乙素、咖啡酰奎宁酸等。方法：采用阶梯色谱柱的方式，按照流动相位，使用-0.1%甲酸水溶液，柱温度控制在30T，调整监测的波长为300nm。通过调整流速1.0控制进样量。结果：在咖啡酸、灯盏花乙素、绿原酸的线性范围分别为，0. 072 ～ 5. 031 （r = 0. 999 9）， 0. 081 ～5. 090（r = 0. 999 9） ，0. 071 ～4. 692（r = 0. 999 9），加样回收率分为别98. 62% （ RSD 1.87% ），95. 58% （ RSD 1. 68% ） ， 100. 98% （ RSD 1. 83% ）。结论：HPLC法通过有效的检测方式，可以准确快捷的作为灯盏细辛注射液的实际质量控制操作依据，其中，灯盏细辛注射液中包含绿原酸、咖啡酸、灯盏花乙素的成分。

关键词：HPLC法;灯盏细辛注射液;成分

引言

灯盏细辛注射液是以菊科类植物的干燥全草提取物为主，具有良好的活血化瘀、通络止痛的作用。在临床上广泛应用于心脑血管的治疗。脑出血、冠心病、肺心病等治疗效果良好。其中的黄酮、酚酸是两大物质成分。黄酮中以灯盏花乙素为主，是公认的灯盏细辛注射液的主要成分。酚酸中包含咖啡酸、绿原酸，均属于分异构体标准。可以有效的抗炎保肝，具有抗氧化、抗凝血的作用。通过灯盏细辛注射液的操作，可以实现质量标准的明确化，保证其成分、含量的合理性。依据HPLC含量标准进行测定法，恩熙确定绿原酸、咖啡酸、灯盏花乙素的实际标准含量要点。

1  实验操作研究要求

采用脱气机、四元泵、恒温箱、紫外线检测器等进行分析，分析灯盏细辛注射液的实际批号、标准，分析其含量。咖啡酸的含量一般可以达到98%以上。依据实验用水的标准，调整确定超纯水、甲酸、甲醇等作為色谱剂使用。

2 方法操作及实验结果

2.1 色谱操作试验的系统适用条件

按照色谱条件要求，通过色谱柱、柱温等调整监测点的波长。通过流速、进样量等确定流动效果，调整阶梯洗脱的比例量，一般以4min为间隔，调整比例范围和标准。

按照系统所适应的试验标准范围，调整色谱的条件。通过绿原酸、咖啡酸、灯盏花乙素等，确定其实际的搭接标准。调整对照品以确定供应试验品的色谱范围。

2.2 溶液的操作制备

按照对照品的溶液操作范围，调整精密度，以获取绿原酸、咖啡酸、灯盏花乙素，分别溶于10ml的量瓶中。加入甲醇稀释至标注刻度，摇匀，调整期各项照品标准的储备液，做好备用工作。精密度操作中，需要明确精密移动储备下的适用量。通过5ml的两瓶，适用50%的甲醇溶液，至标准刻度，摇匀，获取复合标准溶度的溶液，按照溶液配比进行对照分析。

精密移动获取1ml的灯盏细辛注射液，溶液至于50ml的量瓶中，适用50%的甲醇定容至标准刻度，摇匀，适用12000r/min离心10min后，调整测试标准样品溶液量。

2.3 线性关系考察分析

按照精密吸取的相关混合液，通过对照品溶液的适量度操作，调整稀释达到不同浓度的标准混合液。依据对照品的溶液范围，调整获取20L标准的HPLC层。依据各峰值面积记录，确定纵坐标。浓度为横坐标，获取曲线标准方程公式。绿原酸=52.6C-0.43 （「=0.999 9），灯養花乙素= 59C - 1. 86 （ r = 0. 999 9）

2.4 精密度实验分析

按照精密度移动曲线方式，通过1ML的灯盏细辛注射液，通过多次方式的制备操作，重复6次，获取峰值面积。绿原酸、咖啡酸、灯盏花乙素三种的峰值RSD分别为0.97% ， 1.25% ，1.37% 。

2.5 多次反复试验操作

通过精密度仪器获取1ML标准的灯盏细辛注射液，调整制备的供液标准方法，测定绿原酸、咖啡酸、灯盏花乙素三种的平均质量浓度，分析保留时间内的RSD比例变化范围。

2.6 稳定性水平试验分析

选取灯盏细辛注射液，依次按照制备的试验品溶液量，室温标准放置，确定其实际测定的范围。根据RSD系统确定分别为1.27%，0.88%，1.65%。

2.7 回收率试验分析

按照灯盏细辛注射液的0.5ml溶液量，加入绿原酸、咖啡酸、灯盏花乙素进行调配，确定制备液的比例量。结合实际制备供应溶液的标准，确定平行下的测试范围和含量，做好数据的回收率分析。

2.8 含量测定标准分析

选取合理的植被试验操作，结合灯盏细辛溶液量，分析绿原酸、咖啡酸、灯盏花乙素的含量，分别占总量的1.53%，1.28%，1.68%。

3 谈论分析

灯盏细辛是从民间有效获取发掘出来的，对于心脑血管疾病具有良好的治疗效果。按照灯盏细辛注射液的治疗操作需求，分析咖啡酰、吉奎宁酸纸类化学的主要成分和性能，依据灯盏细辛注射液中的灯盏花乙素、确定总芬酸类的标准。调整其中的绿原酸、咖啡酸，使用HPLC测定灯盏细辛注射液中的绿原酸、咖啡酸、灯盏花乙素含量，建立完善的稳定分析标准，实施全面的、细致的检查分析，制定合理的分离标准。在有限的条件下，调整确定药业色谱的范围，确定混合物的含量和操作标准要求，完善灯盏细辛的质量标准，做好参考思路分析。

经过DAD数据全波长扫描分析，在300nm状态下确定最佳的测定波长。通过色谱峰值的变化观测分析，发现在324nm的时候，为最佳的检测波长，其色谱峰符合测定标准性能要求。绿原酸前后的溶剂、实验操作标准符合实际要求，经过50%比例量的甲醇确定最佳的稀释溶剂量。按照实际含量的测定结果显示，灯盏细辛注射液中的灯盏花乙素、咖啡酸、绿原酸含量稳定，符合实验稀释溶液中的参考标准范围。通过反复的试验测定分析，确定其药材的来源和标准要求，具有进一步测定的效果。

结语

综上所述，含量测定数据分析中，通过灯盏细辛注射操作，调整不同批次下的药业比例量值，经过反复的试验发现，受药材的来源影响，其实际的操作需要符合操作标准要求，满足心脑血管疾病治疗的标准。通过HPLC测定方法，准确的判断灯盏细辛注射液中含有多种成分，其成分符合临床医学中对于不同临床表现的治疗需求，提高整体治疗操作的合理性。通过多批次的溶液量含量分析，确定其实际的峰值标准。按照具体的操作来源量，调整不同批次下的不同药品含量，通过调整高低标准比例，保证实际符合临床治疗的标准需求。

参考文献

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