道孚县新型冠状病毒肺炎患者口咽和粪便标本核酸检测结果分析

王有为，杨阳，叶萍，苟玛巴姆，肯布，周莹，章晓红b(.四川省医学科学院·四川省人民医院a. 检验科，b. 急诊内科，成都6007；.甘孜藏族自治州疾病预防控制中心，四川康定66099；.甘孜藏族自治州道孚县人民医院检验科，四川道孚6600；.甘孜藏族自治州炉霍县疾病预防控制中心，四川炉霍66500)

2019年12月以来，我国湖北省及以外地区相继发生新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情。由于在患者粪便中可分离到新型冠状病毒(SARS-CoV-2)，应注意粪便造成环境污染或气溶胶/接触传播[1]。本研究对四川省道孚县2020年2月报告的COVID-19确诊病例SARS-CoV-2核酸检测结果进行分析，以期对COVID-19防控和隔离管理提供参考。

1 资料和方法

1.1一般资料 收集2020年2月四川省道孚县人民医院收治COVID-19确诊病例67例，其中男性36例、女性31例；轻型患者31例、普通型患者35例、重型患者1例。诊断标准依据国家卫生健康委员会发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第五版)》中湖北以外省份标准[2]以及《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)》[3]。

1.2标本收集 确诊病例入院当天及在院期间间隔2～3 d采集口咽拭子、出院后集中隔离医学观察期间每周采集口咽拭子、粪便标本，于8 h内送至SARS-CoV-2核酸检测实验室，24 h内完成检测。

1.3主要仪器和试剂 NatchS全自动核酸提取仪、SLAN-96P Real-Time PCR System(湖南圣湘公司),CFX96荧光定量PCR仪(美国Bio-Rad公司)。新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒(荧光PCR法，批号：2020004，湖南圣湘公司)，QIAamp Viral RNA Mini Kit(50)(批号：166012740,QIAGEN公司)。

1.4粪便和口咽拭子核酸检测 由于道孚县不具备核酸检测能力，样本送至邻近2个实验室检测。收到标本后用75%乙醇消毒外包装及容器，去除外包装。粪便标本56 ℃灭活1 h、口咽拭子56 ℃灭活30 min。用一次性接种环挑取约0.2 g成型粪便或移液器吸取200 μL稀便加入装有2 mL TRIZOL的15 mL离心管中，密封后混匀、静置10 min，取上清液用QIAamp Viral RNA Mini Kit(50)试剂盒纯化RNA核酸。用新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒、NatchS全自动核酸提取仪提取口咽拭子标本中病毒RNA核酸。纯化和提取后核酸用新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒，按照说明书进行检测和阳性判断。通过开展室内质控和随机插入阴、阳性对照开展质量控制。

1.5统计学分析 用SPSS 23.0统计学软件进行。入院日至口咽拭子SARS-CoV-2核酸检测持续呈阴性的第一次采样日期间为口咽拭子核酸转阴天数。分类资料分析采用卡方检验，正态分布的定量资料的均数比较采用两样本t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1一般资料 轻型、普通型病例两组间性别分布差异无统计学意义(χ2=0.203，P=0.652)，年龄差异有统计学意义(t=-3.570，P=0.001)，见表1。重症患者1例，女，77岁，伴有高血压、肺结核，未纳入统计。

表1 67例确诊病例性别、年龄分布

2.2平均住院天数 67例患者最短住院9 d，最长住院30 d，平均住院(16.0±4.5)d。轻型、普通型病例平均住院天数分别为(15.7±4.1)d和(16.2±4.8)d，两组间差异无统计学意义(P=0.260)。1例重症患者住院天数为15 d。

2.3口咽拭子核酸转阴天数 67例患者入院后核酸转阴天数最短1 d，最长29 d，转阴平均天数为(7.4±6.2)d。轻型、普通型患者核酸转阴天数分别为(6.7±5.9)d和(8.1±6.4)d，两组间差异无统计学意义(P=0.881)。重症患者入院后第一天起口咽拭子核酸检测一直为阴性。所有患者出院后集中隔离医学观察期间咽拭子SARS-CoV-2核酸检测为阴性。

2.4口咽拭子核酸阳性天数统计 67例患者中有29例患者在入院后最短1 d、最长18 d，口咽拭子样本检测到SARA-CoV-2 ORF1ab基因和N基因；有3例患者入院后连续2次采样，SARA-CoV-2均仅N基因呈阳性。入院后核酸复查阳性率为47.8%(32/67)。

2.5粪便标本SARA-CoV-2核酸检测 患者出院后均实行集中隔离点隔离医学观察2～4周[4]。由于资料有限，仅报道隔离2周内粪便标本SARS-CoV-2核酸检测结果。67例粪便标本中有16例核酸检测呈阳性，阳性率为23.9%(16/67)，其中有2例第1周检出SARA-CoV-2 N基因，在第2周检测到SARA-CoV-2 ORF1ab基因和N基因；有6例持续2周检测到ORF1ab基因和N基因；有5例患者在住院期间口咽拭子未检测出SARA-CoV-2 ORF1ab基因或N基因。

3 讨论

疫情发生后，截至2月28日无新增病例。本文作者有幸参与道孚县新型冠状病毒肺炎疫情防控工作。文中病例均为密切接触发病或聚集性发病病例，为该地开展流行病学调查期间采集口咽拭子进行SARS-CoV-2核酸检测呈阳性时发现，尚不明确具体接触或感染时间。病例以临床症状轻微为主，重型病例数量有限，未作统计分析，同时，粪便核酸阳性者未随访至其转阴是本文的缺陷。

轻型、普通型病例两组间性别、年龄的比较结果与董玉颖等[5]报道一致。患者入院后，按方案治疗，有35例(52.2%)患者在入院后多次采集口咽拭子均未检出SARS-CoV-2核酸，可能与患者呼吸道症状轻微、无痰或主动咯痰能力弱等原因导致以口咽拭子为主的样本核酸检测假阴性有关。李彩玉等[6]报道不同采集时机、采集部位和样本类型等是造成核酸检测“假阴性”的重要因素。其中，口咽拭子阳性率最低，与该部位病毒含量、采样操作时刺激上呼吸道给患者带来不适从而降低患者依从性等有关。

轻型、普通型患者口咽拭子核酸阳性天数分别为(8.3±5.4)d和(7.6±4.9)d，提示该类型患者入院后1～2周仍有病毒排出并存在呼吸道传播可能。在临床症状消失、肺部CT影像学炎症渗出性改变明显改善时应加强病毒核酸的筛查，符合标准才能出院。文中病例在住院(16.0±4.5)d后出院，无呼吸道样本SARS-CoV-2核酸“复阳”的现象。

67例患者出院后有16例患者的粪便标本核酸检测呈阳性，其中5例住院期间口咽拭子未检出病毒核酸，提示SARS-CoV-2可在消化道复制并通过粪便排出，且持续时间长；SARA-CoV-2 N基因单阳性不能排除病毒复制的可能性；粪便标本核酸检测可能是呼吸道样本核酸检测阴性时的补充。COVID-19患者出院后解除隔离标准应考虑将粪便标本SARS-CoV-2核酸检测呈阴性纳入，且在隔离期间做好出院患者排泄物的消杀。