离子色谱法测定喷昔洛韦中甲酸的含量

朱 洁，周云婷，李俊行，张利英

（1.浙江医药股份有限公司新昌制药厂，浙江绍兴 312500；2.新昌县食品药品检验检测中心，浙江绍兴 312500)

喷昔洛韦（penciclovir）是一种全合成的阿昔洛韦类抗病毒药物，对HSV-1、HSV-2、VzV和E-B病毒有抑制活性，而对CMV病毒的活性较弱。与阿昔洛韦相比，其抗病毒效果显著，是一种抗病毒谱较广的药物[1]。本品生产过程中使用了甲酸[2]，甲酸有急性毒性、刺激性和致突变性，甲酸为第三类溶剂，根据药典要求，需限制使用，中国药典规定其限度为0.5%[3]，因此需要对本品中的甲酸含量进行定量测定，但未发现有关测定喷昔洛韦原料药中甲酸残留的文献。由于甲酸在气相色谱的氢火焰离子检测器（FID）的响应信号很弱，无法用气相色谱仪直接测定，故采用离子色谱法测定本品中甲酸含量[4]。

1 仪器与试药

Dionex ICS-2100型离子色谱系统，配置抑制型电导检测器，EG淋洗液发生器（赛默飞世尔科技）；METTLERTOLEDO XS205DU型电子天平（梅特勒-托利多仪器有限 公司）。

喷昔洛韦（批号150901、150902、150903）（安捷伦科技有限公司）；Dionex EGC III KOH淋洗液（赛默飞世尔科技有限公司，货号：074532）；离子色谱用甲酸标准溶液（1mg/mL，西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司）；二甲基亚砜（西班牙萨劳有限公司）；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Dionex Ionpac AS11型阴离子交换色谱柱（4mm×250mm，13μm）；柱温30℃；流动相A为水，流动相B为Dionex EGC III KOH淋洗液，淋洗液浓度梯度洗脱（洗脱程序见表1）。流速1.0mL/min；定量环25µL；抑制器Dionex ASRS 300-4mm；抑制电流75mA；检测方式为抑制型电导检测器

表1 梯度洗脱程序

2.2 溶液配制

对照品溶液：精密量取甲酸标准溶液50µL（相当于50µg）， 置于100mL量瓶中，加5mL二甲基亚砜，再加水稀释至刻度，摇匀（0.5µg/mL）。

供试品溶液：精密称取供试品约25mg，置于100mL量瓶中，加5mL二甲基亚砜使溶解，再加水稀释至刻度，摇匀 （250µg/ml）。

2.3 专属性试验

分别取空白溶剂、对照品溶液和供试品溶液进样测定，记录色谱图，见图1。从图1看出，空白溶剂不干扰测定，甲酸峰形良好。

图1 典型离子色谱图

2.4 线性试验

分别精密量取0.1%甲酸标准溶液12.5µL、25µL、50µL、75µL、100µL（分 别 相 当 于12.5µg、25µg、50µg、75µg、100µg），分别置于100mL量瓶中，加5mL二甲基亚砜，再加水稀释至刻度，摇匀（浓度分别为0.125µg/mL、0.25µg/mL、0.5µg/mL、0.75µg/mL、1µg/mL）。进样测定，记录色谱图。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程y=0.565x+0.001，r=1.000。表明甲酸在0.125～1µg/mL时线性关系良好。

2.5 检测灵敏度试验

取最低浓度的线性溶液进一步稀释10倍，配制成0.012 5µg/mL的溶液。进样测定。计算信噪比为12，所以该方法的检测限为0.012 5µg/mL，相当于可以检出喷昔洛韦中甲酸的含量为0.005%。

2.6 精密度试验

取对照品溶液，进样测定6次，色谱图峰面积的RSD为4.2%。

取同一批供试品，依法平行操作制备6份供试品溶液，分别进样测定，6份结果的平均值为0.10%，RSD为5.4%。

2.7 加样回收率试验

分别在供试品中加入0.05%、0.2%和0.4%的甲酸，依法处理并测定，计算加样回收率，结果平均回收率为114.4%，RSD为2.1%。

2.8 样品测定

取喷昔洛韦样品3批，依法处理并测定，结果分别为0.10%、0.08%和0.10%。

3 结论

在常规检测中，由于甲酸在GC-FID上的响应信号弱，甲酸含量测定多采用衍生化法，但衍生化程度较难控制。由于甲酸在水溶液中呈离子状态存在，故可以采用操作简易的离子色谱法。

在本实验中，通过较全面的方法学验证，建立了一种离子色谱法测定喷昔洛韦中甲酸含量的方法，结果表明，甲酸在0.125～1µg/mL时线性关系良好，三个浓度平均回收率为114.4%，RSD为2.1%，方法准确度良好，精密度良好。在该色谱系统中，甲酸色谱峰保留时间适宜，峰形良好，重现性好，灵敏度高，可准确可靠地测定喷昔洛韦原料药中甲酸的残留量。