消除淡水叶绿素a 在750 nm 波长浊度的方法

赵 萱

（天津市蓟州区水产业发展服务中心，天津 301900）

1 材料和方法

1.1 材料 水样分别采自天津市北辰、西青、静海、武清、宝坻5 个区域的12 家淡水养殖公司。每家公司取进水、池水、排水3 个位置的水样各1 500 mL。

1.2 方法 将所采水样各取500 mL，倒入烧杯后，加入3 mL 碳酸镁悬浮液（10 g/L），搅拌均匀后，用0.45 μm纤维素酯微孔滤膜进行过滤。

方法一：将过滤后样品滤膜放入离心管中，加入10 mL丙酮溶液摇荡，放入冰柜中24 h 后，在转速4 000 r/min 的低速离心机中离心30 min，并在630、647、664、750 nm 波长处测吸光度值。方法二：取方法1 中测量不合格样品，继续放入冰柜冰冻，取冰冻12 d 后样品，放入转速4 000 r/min的低速离心机中离心40 min，在630、647、664、750 nm 波长处测吸光度值。如果依然存在不合格样品，再取测量不合格样品，放入冰柜中继续进行冰冻，将冰冻20 d 后的样品，放入转速4 000 r/min 的低速离心机中离心40 min，在630、647、664、750 nm 波长处测吸光度值。

2 方法比较研究结果

2.1 实验结果 利用方法一对叶绿素a 进行测定时，在750 nm 波长吸光值低于0.005 的要求，很难达到。基于方法一实验过程中存在的问题，经过深入研究分析，采用适当延长冰冻时限、提高离心转速和延长时间的方法，通过对样品进行反复冻融得到实验结果，如表1。

表1 方法二（多次）测试情况

2.2 两种方法实验结果对比 总量为45 的样品，经方法1 实验后，取不符合要求的样品采用方法二处理后，再次进行实验。对比每次实验符合要求样品所占比例，结果见表2。

表2 方法一和方法二测量结果比较

3 结果讨论

由表1 可以看出，在冰冻24 h 后，用3 000 r/min 的低速离心机离心30 min 后，样品确实很难达到750 nm 处吸光值小于0.005 的要求，浊度比较高，严重影响了水样中叶绿素a 值的测定，因此有必要改进实验方法。

从表1、表2 可以看出，两种方法在630、647、664 nm波光处的测得结果变化很小，但在750 nm 波光处的测得吸光值存在明显差异。在方法一24 个未通过的样品中，经方法二处理后的样品进行实验，仅有5 个未通过，当适量延长冰冻时限后再次实验，基本全部能够满足750 nm 处吸光值低于0.005 的要求。因此，通过方法二即适当延长冰冻时限、提高离心转速、延长时间、采用反复冻融的方法，对改善样品浊度、提高叶绿素a 的检测效率有积极的作用。

如表2 所示，经两种不同方法处理的待测样品，750 nm处的浊度满足低于0.005 要求的样品数量所占比例有显著差异。方法一测得样品通过率仅有30.3%，而采用方法二的样品符合要求的占比更高，通过率为79%和80%，比方法一提高了很多。实验数据表明，方法二可以提高淡水叶绿素a 样品检测的成功率，大大降低因样品浊度高而产生的干扰。但是如果掌握不好冰冻时间，过短或过长，会影响淡水中浮游植物的活性，会给实验造成误差，所以要掌握好冰冻时限、离心速度和离心时间。

4 相关结论

通过上述分析得出如下结论：方法一的冰冻和离心时间虽然较短，但短时间冰冻和离心后的样品浑浊度比较高，严重影响检测结果，会降低检测效率；方法二采用适当延长冰冻时限、提高离心速度、延长时间、反复冻融的方法，可以改善样品的浑浊度，能够满足样品在750 nm 处吸光值小于0.005 的要求，具有易操作、成功率高的特点。